Determinación cuantitativa enzimatico-colorimetrica de colesterol total en suero

1. SEPDGETISEMS
CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107
TUXTEPEC OAXACA.
NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE
CATEDRÁTICO:I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA
SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACIONMETABOLICAS
PRACTICA:
DETERMINACION CUANTITATIVA-ENZIMATICO-COLORIMETRICA
DE COLESTROL TOTAL EN SUERO
SEMESTRE: 6° GRUPO: “AL”
FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_
CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________

2. INTRODUCCION
El método enzimático para colesterol fue introducido en 1973 por Flegg1 y Richmond2,
utilizando colesterol oxidasa de origen bacteriano seguida de saponificación química de los
ésteres del colesterol. Roeschlau3 modificó ésta técnica y Allain y Col4 publicó los primeros
ensayos enzimáticos completos combinando el colesterol oxidasa y el colesterol estearasa.
Este método se basa en el de Allain y utiliza estas enzimas en combinación con el reactivo
peroxidasa/fenol-4-antipirina, de Trinder5.
La colesterol estearasa (CE) hidroliza a los ésteres del colesterol para dar colesterol libre y
ácidos grasos. El colesterol libre así producido más el colesterol preformado se oxida en
presencia del colesterol oxidasa (COx) para dar colesten-4-3-cetona y peróxido de
hidrógeno. Un cromógeno quinonaimina, con absorción máxima a 500 nm, se produce
cuando el fenol se acopla oxidativamente con 4-aminofenazona en presencia de
peroxidasa (POD) con peróxido de hidrógeno. La intensidad final del color rojo
esproporcional a la concentración total del colesterol. El Factor Aclarador Lipemico (LCF) es
una mezcla de aditivos especialmente diseñados porStanbio integrados dentro del reactivo
de colesterol para ayudar a minimizarlas interferencias debidas ala Lipemia.
Esteres del colesterol CE Colesterol + Ácidos Grasos
Colesterol +O2COxColesten-4-3-cetona +H2O2
H2O2 + 4-Aminofenazona + fenol PODH2O+ O-Quinonaimina colorante
OBJETIVO
En el laboratorio clínico, la aplicación más importante de la electroforesis es la separación
de proteínas presentes en el suero, orina y otros fluidos biológicos como el líquido
cefalorraquídeo y el líquido sinovial. El objetivo principal de la práctica estará dirigido a la
comprensión e identificación de conceptos físicos teóricos relacionados con este tipo de
técnicas, así como la descripción de las mismas y su uso.
PROCEDIMIENTO
1. Extraer 5ml de sangre sin anticoagulante
2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min.
3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a centrifugar a 2500
r.p.m. por 3 minutos.
4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro tubo ya
rotulado, sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células.
5. Continuamos agregando 2.0ml de reactivo a un tubo rotulado con la letra “M” de
muestra.
6. Al tubo “M” le agregamos 20µl de suero problema, mezclar y llevar a …
7. Incubar a 37°C por 5 minutos.
8. Procedemos a leer en el espectrofotómetro a 500nm
9. Realizar cálculos.

3. Blanco (B) Estándar (S) Muestra(U)
Reactivo 2.0ml 2.0ml 2.0ml
Estándar 20µl
Muestra 20µl
INTERPRETACION
Reactivos: Incoloro
Reactivo y suero: se torna color rosáceo/crema.
CALCULOS
RESULTADOS
Los valores se derivan de los siguientes cálculos:
Colesterol total en suero (mg/dL) = AM x 200
AE
Donde AM y AE son los valores de absorbancias de la muestra y del estándar
respectivamente y 20 es la concentración del estándar (mg/dL).

4. SEP DGETISEMS
Tuxtepec, OAX.
APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS
PRÁCTICA
DETERMINACIÓN CUANTITATIVA-ENZIMATICO-
COLORIMETRICA DE COLESTEROL TOTAL
NOMBRE DEL PACIENTE:JUNCO GARCÍA PERLA RUBÍ
SEXO:F EDAD:18 AÑOS FECHA:22/03/11 HORA:9:40AM
REPORTE
RESULTADOS:
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OBSERVACIONES:
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ANALISTA:
AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”
VALORES DE REFERENCIA
Colesterol Total mg/dL
Cordón 45-100
Recién Nacido 53-135
Infante 70-175
Niños 120-200
Adolescentes 120-210
Adultos 140-310
Ideal p/adultos 140-200
Raza Negra: Aproximadamente
10 mg/dL más altos.