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10-08-2012




            Facultad de Medicina
           Escuela de Enfermería
               Sede Temuco




          Histoembriología
           ENFB2006 2012




Introducción a la Histología
Técnicas Histológicas




                           Dra. Paola A. Araneda Reynolds
                           paola.araneda@umayor.cl
                           Histoembriología
                           08-08-2012
                           Temuco, Chile




                                                                    1
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    ESTE POWERPOINT ES
     UNA GUÍA PARA EL
          ESTUDIO.
    EL ESTUDIANTE DEBE
   COMPLEMENTAR CON
        LECTURA DE
       BIBLIOGRAFÍA
      RECOMENDADA




       RESULTADOS DE APRENDIZAJES
                       ESPERADOS
 A. CONCEPTUALES

Establecer concepto de tejido señalando sus
características y propiedades.


Comprender e identificar las técnicas de
procesamiento de los tejidos.


Examinar, identificar e     interpretar   una
preparación   histológica   a    través    del
microscopio óptico común.




                                                         2
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                               TEMARIO


  Definición de Histología
  Historia
  Técnicas histológicas
  Interpretación
  Microscopía




                                 HISTOLOGÍA
                                   Definición

Estudio en profundidad de la estructura y
función de componentes celulares.


Rama de la anatomía que estudia los
tejidos de animales y plantas haciendo una
descripción de estructura celular, tejidos y
órganos asociada a su función.




                                                        3
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                                                                   Historia

  Padre de la Histología: Marie F. X. Bichat
  SXVIII
  Publicación de libro 20 tejidos diferentes
  Histología acuñado S. XIX (1806)




 Bacha, W., L. Bacha. 2001. Atlas de histología veterinaria.




                                                               Importancia

1. Conocimiento de la estructura y función
   normal    a   nivel microscópico     de
   organización.


2. Comprensión del proceso patológico por
   respuesta celular y tisular a las lesiones
   relacionadas con procesos patológicos.


3. Entender a los seres vivos en estado de
   salud y enfermedad.




                                                                                      4
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                       Unidades de Medida


Angström (Aº)    1Aº = 10.000.000 mm


Micrómetro (µm) 1 µm = 0.001 mm         1x 10-6    m




Nanómetro (nm) 1 nm = 0.001 µm          1 x 10-9   m




                                        TEJIDO
                                  DEFINICIÓN

Grupo de células similares, idénticas o
diferentes y sus productos extracelulares que
realizan una función específica o un conjunto
de funciones relacionadas.




HISTÓLOGOS :
           4 tipos de tejidos básicos




                                                               5
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                Clasificación y características
                                 de los Tejidos

T. Básicos o simples :   T. Epitelial
                         T. Conectivo - T.Adiposo*
                         T. Muscular
                         T. Nervioso




                          Origen de los Tejidos




                                                             6
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Organización de los Tejidos




                                      7
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   Procesamiento de Tejidos en Histología


TÉCNICAS HISTOLÓGICAS


OBJETIVO

Preparar  los   tejidos   para    estudiarlos
asemejando su estado natural y analizarlos por
medio de microscopio óptico.




                                                         8
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               1. Obtención de la Muestra


ubicación del tejido – identificación de muestra
rápida y con destreza
instrumentación adecuada
colocar en fijador
10 hrs




                                                           9
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       10
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                                     2. Fijación
OBJETIVO

 Detener la autólisis postmortem
 Conservación
 Endurecimiento de tejidos
 Intensificar la tinción
 Reducir la presencia de agua en tejidos
 Estabilizar componentes celulares
 Propiedades antisépticas




                             Tipos de Fijadores

1. FIJADORES COAGULANTES
  Generan cambios estructurales profundos
  ej : metanol, etanol


2. FIJADORES ADITIVOS
         •Formalina 10%
         •Fijador de Bouin


Tiempo necesario para fijación ápróx. 24 hrs




                                                          11
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                               3. Deshidratación

OBJETIVO

Eliminación total del agua desde el tejido.


     Baño gradual en alcohol
     Diferentes grados de manera ascendente
     Hasta llegar al 100%.


ej: alcohol etílico, acetona
    Tiempo 8 hrs




                                                          12
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                                   4. Aclaración

OBJETIVO

Eliminar el alcohol de los tejidos porque no
es compatible con parafina.


     Baño gradual en xilol


ej: xilol, benzol, cloroformo, tolueno
             1:1, 1:2, 2:2
   Tiempo 4 hrs




                                                          13
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                             5. Impregnación

OBJETIVO

Impregnar los tejidos con parafina sustituyendo
al xilol para luego proceder a la inclusión.


     Parafina purificada a 51–53ºC en moldes
                           56–58ºC


     Tiempo 6 hrs
Autotécnico : máquina automática de 12 envases
Reloj - brazo




          Autotécnico




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                                        6. Inclusión

OBJETIVO

Colocar el tejido en moldes de parafina.


   ej: Parafina purificada, paraplast
             56–58ºC
   • corte en forma pirámide truncada




                                                              15
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                                         7. Corte

OBJETIVO

Obtener fragmentos delgados de tejidos
Se realiza con bloque en frío


    corte en forma pirámide truncada
     Micrótomo : cintas finas 5 – 7 µm
     Baño de agua 45º C




                                                           16
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       17
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Criostato




                   18
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                                         8. Tinción

OBJETIVO

Diferenciar componentes celulares resaltando
sus cualidades.

OJO : Los colorantes son sales solubles en agua.


Pasos:
     Agentes desparafinantes (xilol I y Xilol II)
     Hidratación (100% - 70%)
     Agua
      Tiempo 40 min




                                                             19
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       20
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                                    9. Montaje

OBJETIVO

Adhesión del tejido en el portaobjeto.


   ej:
   • bálsamo de Canadá
   • albúmina de Mayer + timol
   • Entellán®


   • Estufa secado 20 minutos




                                                        21
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http://www.youtube.com/watch?v=OavP
Z6hx5oA&feature=related

  http://youtu.be/KyO3TT2NaKk


  http://youtu.be/EMXpQzwOc_Q




      TINCIONES




                                             22
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                                               Tipos de Colorantes

1. COLORANTES BÁSICOS

Componente celular ácidos                                           básicos
     BASOFILOS


2. COLORANTES ÁCIDOS
Componente celular básicos                                          ácidos
     ACIDÓFILOS


      “ Neutralización”




                                                                     Ejemplo




      Bacha, W., L. Bacha. 2001. Atlas de histología veterinaria.




                                                                                      23
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                   Tinciones de uso frecuente

a) TINCIÓN DE HEMATOXILINA-EOSINA


  USO : diferenciar elementos celulares


      H : color azul o púrpura a componentes
     ácidos de células
     ej: cromatina, secreciones

      E : color rosa pálido a rojo a componentes
     básicos de células
     ej : citoplasma.




                                                          24
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b) TINCIÓN DE WRIGHT-GIEMSA; MG; G


USO : diferenciar células sanguíneas


        rosa : eritrocitos, gránulos de eosinófilos
        púrpura : núcleos de leucocitos, gránulos
        basófilos.
        azul : citoplasma de monocitos y linfocitos.




Wittwer, F. UACH.
 Wittwer, F. UACH.




                                                              25
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c) TINCIÓN DE ORCEÍNA


USO : diferenciar fibras elásticas


      marrón rojizo : fibras elásticas




              Sobotta, J. 1999. Histología.




                                                     26
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        Bacha, W., L. Bacha. 2001. Atlas de histología veterinaria.




d) TINCIÓN TRICRÓMICA DE MALLORY


USO : diferenciar elementos del tejido conectivo


      azul oscuro : fibras de colágeno
      rojo                    : fibras musculares, glias
      naranja                 : fibras de elastina




                              www.iqb.es




                                                                             27
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e) TINCIÓN DE VAN GIESON


USO : diferenciar fibras de colágeno


             rojo         : fibras de colágeno




                                                        Sobotta, J. 1999. Histología.




                                                                                        Artefactos




Bacha, W., L. Bacha. 2001. Atlas de histología veterinaria.




                                                                                                            28
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Bacha, W., L. Bacha. 2001. Atlas de histología veterinaria.




Bacha, W., L. Bacha. 2001. Atlas de histología veterinaria.




                                                                     29
10-08-2012




                      Técnicas Avanzadas


1. HISTOQUÍMICA


2. INMUNOCITOQUÍMICA


3. AUTORRADIOGRAFÍA




                                                  30
10-08-2012




Importancia




                     31
10-08-2012




GRACIAS POR SU ATENCIÓN!!
       CONSULTAS?




                                   32
10-08-2012




 Facultad de Medicina
Escuela de Enfermería
    Sede Temuco




Histoembriología
 ENFB2006 2012




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Técnicas histológicas

  • 1. 10-08-2012 Facultad de Medicina Escuela de Enfermería Sede Temuco Histoembriología ENFB2006 2012 Introducción a la Histología Técnicas Histológicas Dra. Paola A. Araneda Reynolds paola.araneda@umayor.cl Histoembriología 08-08-2012 Temuco, Chile 1
  • 2. 10-08-2012 ESTE POWERPOINT ES UNA GUÍA PARA EL ESTUDIO. EL ESTUDIANTE DEBE COMPLEMENTAR CON LECTURA DE BIBLIOGRAFÍA RECOMENDADA RESULTADOS DE APRENDIZAJES ESPERADOS A. CONCEPTUALES Establecer concepto de tejido señalando sus características y propiedades. Comprender e identificar las técnicas de procesamiento de los tejidos. Examinar, identificar e interpretar una preparación histológica a través del microscopio óptico común. 2
  • 3. 10-08-2012 TEMARIO Definición de Histología Historia Técnicas histológicas Interpretación Microscopía HISTOLOGÍA Definición Estudio en profundidad de la estructura y función de componentes celulares. Rama de la anatomía que estudia los tejidos de animales y plantas haciendo una descripción de estructura celular, tejidos y órganos asociada a su función. 3
  • 4. 10-08-2012 Historia Padre de la Histología: Marie F. X. Bichat SXVIII Publicación de libro 20 tejidos diferentes Histología acuñado S. XIX (1806) Bacha, W., L. Bacha. 2001. Atlas de histología veterinaria. Importancia 1. Conocimiento de la estructura y función normal a nivel microscópico de organización. 2. Comprensión del proceso patológico por respuesta celular y tisular a las lesiones relacionadas con procesos patológicos. 3. Entender a los seres vivos en estado de salud y enfermedad. 4
  • 5. 10-08-2012 Unidades de Medida Angström (Aº) 1Aº = 10.000.000 mm Micrómetro (µm) 1 µm = 0.001 mm 1x 10-6 m Nanómetro (nm) 1 nm = 0.001 µm 1 x 10-9 m TEJIDO DEFINICIÓN Grupo de células similares, idénticas o diferentes y sus productos extracelulares que realizan una función específica o un conjunto de funciones relacionadas. HISTÓLOGOS : 4 tipos de tejidos básicos 5
  • 6. 10-08-2012 Clasificación y características de los Tejidos T. Básicos o simples : T. Epitelial T. Conectivo - T.Adiposo* T. Muscular T. Nervioso Origen de los Tejidos 6
  • 8. 10-08-2012 Procesamiento de Tejidos en Histología TÉCNICAS HISTOLÓGICAS OBJETIVO Preparar los tejidos para estudiarlos asemejando su estado natural y analizarlos por medio de microscopio óptico. 8
  • 9. 10-08-2012 1. Obtención de la Muestra ubicación del tejido – identificación de muestra rápida y con destreza instrumentación adecuada colocar en fijador 10 hrs 9
  • 11. 10-08-2012 2. Fijación OBJETIVO Detener la autólisis postmortem Conservación Endurecimiento de tejidos Intensificar la tinción Reducir la presencia de agua en tejidos Estabilizar componentes celulares Propiedades antisépticas Tipos de Fijadores 1. FIJADORES COAGULANTES Generan cambios estructurales profundos ej : metanol, etanol 2. FIJADORES ADITIVOS •Formalina 10% •Fijador de Bouin Tiempo necesario para fijación ápróx. 24 hrs 11
  • 12. 10-08-2012 3. Deshidratación OBJETIVO Eliminación total del agua desde el tejido. Baño gradual en alcohol Diferentes grados de manera ascendente Hasta llegar al 100%. ej: alcohol etílico, acetona Tiempo 8 hrs 12
  • 13. 10-08-2012 4. Aclaración OBJETIVO Eliminar el alcohol de los tejidos porque no es compatible con parafina. Baño gradual en xilol ej: xilol, benzol, cloroformo, tolueno 1:1, 1:2, 2:2 Tiempo 4 hrs 13
  • 14. 10-08-2012 5. Impregnación OBJETIVO Impregnar los tejidos con parafina sustituyendo al xilol para luego proceder a la inclusión. Parafina purificada a 51–53ºC en moldes 56–58ºC Tiempo 6 hrs Autotécnico : máquina automática de 12 envases Reloj - brazo Autotécnico 14
  • 15. 10-08-2012 6. Inclusión OBJETIVO Colocar el tejido en moldes de parafina. ej: Parafina purificada, paraplast 56–58ºC • corte en forma pirámide truncada 15
  • 16. 10-08-2012 7. Corte OBJETIVO Obtener fragmentos delgados de tejidos Se realiza con bloque en frío corte en forma pirámide truncada Micrótomo : cintas finas 5 – 7 µm Baño de agua 45º C 16
  • 19. 10-08-2012 8. Tinción OBJETIVO Diferenciar componentes celulares resaltando sus cualidades. OJO : Los colorantes son sales solubles en agua. Pasos: Agentes desparafinantes (xilol I y Xilol II) Hidratación (100% - 70%) Agua Tiempo 40 min 19
  • 21. 10-08-2012 9. Montaje OBJETIVO Adhesión del tejido en el portaobjeto. ej: • bálsamo de Canadá • albúmina de Mayer + timol • Entellán® • Estufa secado 20 minutos 21
  • 23. 10-08-2012 Tipos de Colorantes 1. COLORANTES BÁSICOS Componente celular ácidos básicos BASOFILOS 2. COLORANTES ÁCIDOS Componente celular básicos ácidos ACIDÓFILOS “ Neutralización” Ejemplo Bacha, W., L. Bacha. 2001. Atlas de histología veterinaria. 23
  • 24. 10-08-2012 Tinciones de uso frecuente a) TINCIÓN DE HEMATOXILINA-EOSINA USO : diferenciar elementos celulares H : color azul o púrpura a componentes ácidos de células ej: cromatina, secreciones E : color rosa pálido a rojo a componentes básicos de células ej : citoplasma. 24
  • 25. 10-08-2012 b) TINCIÓN DE WRIGHT-GIEMSA; MG; G USO : diferenciar células sanguíneas rosa : eritrocitos, gránulos de eosinófilos púrpura : núcleos de leucocitos, gránulos basófilos. azul : citoplasma de monocitos y linfocitos. Wittwer, F. UACH. Wittwer, F. UACH. 25
  • 26. 10-08-2012 c) TINCIÓN DE ORCEÍNA USO : diferenciar fibras elásticas marrón rojizo : fibras elásticas Sobotta, J. 1999. Histología. 26
  • 27. 10-08-2012 Bacha, W., L. Bacha. 2001. Atlas de histología veterinaria. d) TINCIÓN TRICRÓMICA DE MALLORY USO : diferenciar elementos del tejido conectivo azul oscuro : fibras de colágeno rojo : fibras musculares, glias naranja : fibras de elastina www.iqb.es 27
  • 28. 10-08-2012 e) TINCIÓN DE VAN GIESON USO : diferenciar fibras de colágeno rojo : fibras de colágeno Sobotta, J. 1999. Histología. Artefactos Bacha, W., L. Bacha. 2001. Atlas de histología veterinaria. 28
  • 29. 10-08-2012 Bacha, W., L. Bacha. 2001. Atlas de histología veterinaria. Bacha, W., L. Bacha. 2001. Atlas de histología veterinaria. 29
  • 30. 10-08-2012 Técnicas Avanzadas 1. HISTOQUÍMICA 2. INMUNOCITOQUÍMICA 3. AUTORRADIOGRAFÍA 30
  • 32. 10-08-2012 GRACIAS POR SU ATENCIÓN!! CONSULTAS? 32
  • 33. 10-08-2012 Facultad de Medicina Escuela de Enfermería Sede Temuco Histoembriología ENFB2006 2012 33