Fijación de tejidos en Anatomía Patológica

1. PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIÓN
UNIDAD DIDÁCTICA 10
PRINCIPALES FIJADORES.
1.- INTRODUCCIÓN.
2.- FIJADORES PUROS Y MUESTRAS FIJADORAS.
3.- PROPIEDADES DE LOS FIJADORES.
3.1.- Formol.
3.2.- Alcohol.
3.3.- Acetonas.
3.4.- Ácido Pícrico.
3.5.- Ácido Acético.
3.6.- Ácido Tricloracético.
3.7.- Glutaraldehido.
3.8.- Ácido Osmico.
4.- MEZCLAS FIJADORAS.
4.1.- Composición de algunas mezclas fijadoras con formol:
4.1.1.- Mezcla de Orth.
4.1.2.- Mezcla Bouin acuosa.
4.2.- Composición de algunas mezclas fijadoras sin formol:
4.2.1.- Líquido de Carnoy.
4.2.2.- Líquido de Zenker.
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2. PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIÓN
1.- INTRODUCCIÓN.
El principal fijador es el Formol, es sin duda el más usado de los fijadores, ya que reúne a la
vez las propiedades del líquido fijador y conservador.
El Formol o Formalina, es una solución concentrada de Aldehido Fórmico al 35-40%.
La concentración en Aldehido Fórmico es variable de una muestra a otra, ya que el formol
es volátil.
2.- FIJADORES PUROS Y MUESTRAS FIJADORAS.
Si se exceptúa la Formalina o Formol, el Alcohol y el Ácido Ósmico, los fijadores sencillos o
puros no se utilizan nunca aislados, pues las ventajas que estos suponen, se ven
contrarestadas por una serie de inconvenientes considerables.
Con la fijación no se busca el poner de manifiesto exclusivamente y de manera especial un
determinado elemento tisular, sino que a menudo causas que parecían secundarias,
adquieren de pronto una mayor importancia. Por ello las mezclas fijadoras revisten una
serie de ventajas por su carácter fijador en general.
A partir de la solución madre del 35-40% de Formol, se harán distintas soluciones al
10% - 15% - 20% - 30%.
3.- PROPIEDADES DE LOS FIJADORES.
3.1.- Formol.
Esta dotado de un gran poder de penetración, fija y endurece rápidamente los tejidos sin
deshidratarlos, deja en los tejidos su contenido en agua y por tanto no los deforma.
En cambio un mal fijador citológico. En los tejidos que encierran una gran cantidad de
sangre, da origen bien puro o en mezcla fijadora con BOUIN, a un pigmento artificial negro
o pardo oscuro que precipita irregularmente. Este pigmento se llama pigmento formólico y a
veces es motivo de confusiones; se elimina bien tamponándolo o sumergiendo los cortes en
alcohol amoniacal o en alcohol absoluto (100%) con Ácido Pícrico a saturación.
SATURACION, es cuando en un líquido ya no se diluye la parte sólida que vamos añadiendo.
Las piezas pueden estar en el formol durante mucho tiempo sin alterarse mucho.
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3. PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIÓN
3.2.- Alcohol. Propiedades generales. Inconvenientes.
En general se utiliza el Alcohol Etílico, la acción más potente corresponde como es natural a
la solución más concentrada como es el de 100º.
Para fijar trozos pequeños de unos 5 mm de espesor lo dejaremos de 2-4 horas, habiendo
renovado éste unas 3 veces por lo menos.
El alcohol que se diluye en agua se vuelve más pesado y se acumula en el fondo del
recipiente quedando el alcohol más concentrado y ligero en la superficie. Por ello será
conveniente que las piezas a fijar permanezcan en las capas superiores, para lo cual el
mejor sistema seria colgarlas.
En la fijación de piezas de gran tamaño con el Alcohol Absoluto, se corre el peligro de que
la capa más externa de la pieza se endurezca de tal manera que el alcohol ya no pueda
penetrar más allá y no alcance el centro de la misma.
Para garantizar una buena fijación de las partes centrales, es decir obtener una
penetración óptima al mismo tiempo que una deshidratación suficiente se deberá utilizar
una solución al 70%. Para los cortes por congelación es preferible utilizar una solución del
70-80%. Las soluciones alcohólicas poco concentradas, tienen un efecto macerador. El
alcohol precipita con rapidez las proteínas, los lípidos son disueltos rápidamente y la
hemoglobina con lentitud.
Los resultados, podríamos aceptarlos como buenos en general a pesar del endurecimiento
de los tejidos que es considerable.
3.3.- Acetonas. Propiedades generales.
La fijación de los tejidos con Acetona, da lugar a concentraciones considerables de los
tejidos, debido a la extraordinaria rapidez con que deshidrata los mismos. La Acetona es
muy volátil, incolora, e inflamable. Estos efectos indeseados y molestos hacen, que la
Acetona, solo se utilice en determinados trabajos.
La fijación durará el minuto indispensable y los tejidos han de ser inmediatamente
retirados de la misma e incluidos (duración máxima 2 horas, para piezas delgadas 20
minutos son suficientes).
3.4.- Ácido Pícrico. Propiedades generales.
Se presenta en forma de agujas cristalizadas de color amarillo dorado, muy toxicas y
venenosas, explosivas y solo un 2% soluble en agua. En la fijación produce contracciones en
el tejido, pero no endurecimiento.
El Ácido Pícrico a de ser eliminado después de la fijación, lavando las piezas en el alcohol de
70-80%. Eliminación que facilitaremos, añadiendo unas gotas de amoníaco. La utilización del
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4. PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIÓN
Ácido Pícrico, no se recomienda para las inclusiones en Celoidina.
3.5.- Ácido Acético. Propiedades generales.
Su propiedad fundamental consiste en la precipitación de los núcleos proteicos, de forma
que el núcleo y los cromosomas quedan perfectamente fijados.
El citoplasma y las mitocondrias no quedan bien fijadas, a lo sumo alcanzan un estado de
prefijación. El Ácido Acético en solución al 1-4% en numerosas mezclas fijadoras, pues el
hinchazón que produce, compensa la contracción que originan otras sustancias y los tejidos
permanecen blandos.
Los vapores de Ácido Acético Glacial son inflamables.
3.6.- Ácido Tricloracético. Propiedades generales.
Los cristales del Ácido Tricloracético son incoloros, cáusticos (queman) y fácilmente
solubles en agua, la solución al 5% sobre todo se utiliza para descalcificar. Debido al
hinchazón de los tejidos conjuntivos, deben ser lavados con agua, los tejidos fijados en
estas soluciones contienen Ácido Tricloracético.
3.7.- Glutaraldehido. Propiedades generales.
Es un líquido oleoso, que se encuentra en el mercado en forma de solución al 25%. El
proceso de fijación es muy parecido al de Formol, tiene muchas ventajas y en parte supera
la fijación con Ácido Ósmico.
Las piezas pequeñas sobretodo en microscopía electrónica, en la cual los tejidos pueden ser
tratados luego con Ácido Ósmico. Las piezas pequeñas quedan fijadas al cabo de 6 horas.
Los tejidos pueden ser permanecer más tiempo en Glutaraldehido, lavándolos luego con una
solución tampón de fosfato.
3.8.- Ácido Osmico. Propiedades generales.
El Ácido Ósmico ó Tetróxido de Osmio, se presenta en cristales de color amarillo dorado,
son volátiles y solubles en agua. En el comercio se encuentran en tubitos de vidrio cerrado,
que contiene 0.1 mg a 1 g.
Debido a su escaso poder de penetración 0.5 mm/h el Ácido Ósmico se utiliza solamente en
las técnicas de cortes ultrafinos (microscopía electrónica) que se usan proporciones
reducidísimas de tejidos, a pesar de lo cual todos reconocen que es el fijador óptimo.
Los vapores de Ácido Ósmico, alteran las mucosas: bucal y nasal produciendo ronquera.
También daña la córnea, por ello se ha de trabajar con gafas protectoras o mejor todavía
bajo una campana de gases.
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5. PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIÓN
La incorporación del Ósmio en los tejidos proporciona el contraste necesario para los
márgenes de microscopía electrónica. En la práctica se utiliza exclusivamente el Ácido
Ósmico diluido en una solución tampón.
La ampolla de vidrio resultante, se limpia cuidadosamente por fuera, después de abrirla se
introduce con su contenido en el líquido preparado de antemano. El Ácido Ósmico tarda
varias horas en disolverse y ha de colocarse en la oscuridad, ya que es descompuesto por la
acción de la luz.
4.- MEZCLAS FIJADORAS.
Tienen por finalidad el compensar las desventajas que pueda presentar una sustancia
fijadora con las ventajas de otra, algunas de ellas se utilizan para fijar de manera especial
un componente celular y otras sirven para un problema determinado.
4.1.- Composición de algunas mezclas fijadoras con formol:
4.1.1.- Mezcla de Orth.
Se compone de:
1 parte de Formol, 9 partes de líquido de Muller, obteniéndose buenos resultados al cabo
de 24 ó 48 horas.
4.1.2.- Mezcla Bouin acuosa.
Se compone de:
15 partes de Ácido Pícrico en solución saturada, 5 partes de Formol y 1 parte de Ácido
Acético puro, fija al cabo de 2 a 24 horas. Terminada la fijación de las piezas, se lavan con
alcohol de 70-80º hasta la desaparición de su coloración amarillenta.
Es una de las mejores mezclas fijadoras.
4.2.- Composición de algunas mezclas fijadoras sin formol:
4.2.1.- Líquido de Carnoy.
Se compone de:
6 volúmenes de alcohol de 100º, 3 volúmenes de cloroformo y 1 volumen de Ácido Acético.
Penetra en los tejidos con gran rápidez l mm/h y da buenos resultados en conjunto. Su
fijación no debe sobrepasar en ningún caso las 24 horas, pasando luego las piezas al alcohol
absoluto.
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6. PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIÓN
4.2.2.- Líquido de Zenker.
Se compone de:
2.5 g de Dicromato Potásico, 5 g de Cloruro de Mercurio sublimado, 1 g de Sulfato Sódico
y 100 cc de agua destilada. En el momento de su uso se agregan 5 cc de Ácido Acético.
Las piezas pueden ser conservadas durante años, si se tiene la precaución de añadir unos
trozos de CRETA CRISTALIZADA.
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