Este documento describe los métodos e instrumentos utilizados para el estudio de la histología, incluida la preparación de cortes de tejido mediante la técnica de inclusión en parafina y resina, el uso de microscopios ópticos y electrónicos, y diferentes técnicas de tinción e inmunohistoquímica para visualizar estructuras celulares y componentes.

1. Unidad 2
Métodos e instrumentos
empleados
para el estudio de la
histología

2. Preparación de los cortes

3. Técnica de inclusión
en parafina
1. Obtención del tejido
2. Fijación
3. Procesamiento de la muestra (manual o
automatizada)
- Deshidratación
- Clarificación
- Embebido en parafina
4. Inclusión en parafina
5. Corte
6. Tinción
7. Montaje

4. 1. Obtención de un tejido

5. Formaldehído
10%
Glutaraldehíd
o 3%
2. Fijación
Tratamiento de tejido con sustancias químicas, para mantener las
propiedades celulares e inactivación de enzimas líticas.

7. 3. Procesamiento de la
Muestra
• Deshidratación
Medios hidrófobos para la eliminación de agua en la muestra.
Alcohol etílico 0.5%,, 10%... A 95%.

8. • Clarificación
Impregnación con Xilol, tornandose transparente, cambiando su
índice de refracción.

9. • Embebido en parafina
60° C.
Xilol sea remplazado con este material.
4. Inclusión en parafina
Cajas o cápsulas de plástico para su
manejo y corte.

10. 5. Corte
Cortes delgados que permitan el paso de la luz.
5 micras

11. 6. Pesca
7. Tinción de rutina
8. Montaje

13. Técnica de inclusión en resina
para microscopia electrónica

14. Técnica de inclusión en resina
para microscopia electrónica
• Fijado en glutaraldehído
• Fragmentos pequeños no más de 1
mm
• Se incluyen en resinas sintéticas
• Cortes 10 veces más delgados
• Tinción sales de metal pesado
(citrato de plomo, tetróxido de
osmio o acetato de uranilo)
• Montan en grillas de cobre

15. Louis de Broglie “Los electrones acelerados
se comportan como una onda, con una longitud
de onda muy similar a la luz visible.
1929. Premio Nobel de física.

16. Glóbulo rojo Glóbulo blanco
Ruska, premio Nobel de Física 1986

17. Haz de electrones a 80 kV
+ de 500,000 aumentos

21. Tamaños relativos de las células y sus componentes

22. Técnica de congelamiento
para biopsia transoperatoria

24. Microscopio de luz o
fotónico
Microscopio óptico

25. OCULARES
OBJETIVOS
• SISTEMA ÓPTICO CONDENSADOR
DIAFRAGMA
FOCO
SOPORTE O BASE
PLATINA
• SISTEMA MECÁNICO CABEZAL
BRAZO
REVOLVER
TORNILLOS DE ENFOQUE

26. SISTEMA MECÁNICO

31. SISTEMA ÓPTICO

38. Técnicas de microscopía

39. Campo claro
• Método clásico, en el que la luz
pasa a través del especimen y es
colectada por el objetivo.

40. Campo oscuro
• Haz enfocado de luz muy intensa
concentrado sobre el especimen, el
objeto iluminado dispersa la luz y se
hace visible en el fondo oscuro que tiene
detrás
• Condensador especial que ilumina la
muestra con luz indirecta.

41. Contraste de fases
• Método excelente para visualizar
estructuras muy finas menores de 5
µ y que tienen poco contraste en
tinciones de rutina. Se requiere
objetivo y condensador especial.

42. Confocal
Imágenes tridimensionales con dos
diafragmas confocales uno antes de
la muestra y el otro después y un
láser como fuente luminosa.

43. Histoquímica
• Conjunto de técnicas que permiten la identificación,
localización y cuantificación de componentes o
sustancias en un tejido.

44. TINCIONES
Catiónica – ácidos (cargas
eléctrica positiva)
Aniónico – Básicas (cargas
eléctrica negativa)

45. Hematoxilina de Harris
Eosina
Naranja G

46. Tricrómica de Masson
Rojo - músculo y
epitelio
Azul - colágena
Escarlata de Biebrich
Azul de anilina
Ácido fosfomobdílico

47. Rojo congo
Sal de sodio del ácido de benzidineziano bis-1-naftilamina-4-sulfonica
Amiloide - Luz polarizada – fluoresce (verde manzana)

48. Ácido periódico de Schiff
Glucógeno
Glicoproteínas
glicosaminoglicano
s
Ácido periódico – rompe enlaces
hexosas libera grupos aldehídos que
se combinan al Reactivo Schiff -
(dando el color púrpura)

49. Azul alcian
Mucopolisacaridos ácidos sulfatados y carboxilicos (pH 2.5)

50. Von kossa
Sustitución de Ca por Ag (unión a las sales de Calcio)

51. Azul de toluidina
Ortocromáticos (azul) – Cromatina y tejido nervioso
Metacromáticas (violeta-rojo) – Proteoglicanos sulfatados
cartílago o gránulos de células cebadas

52. Grocott
Hongos – verde oscuro a café
Alrededor - verde
Metenamina de Ag
Hongos

53. Aceite rojo
Lípidos – rojo
Núcleo – azul
Alrededor - gris
Cortes congelados

54. Fontana-Masson
Melanina
Reduce el nitrato de Ag que se precipita sobre los gránulos del
pigmento dando una coloración negra
Melanina - negro

55. Ziehl Neelsen
Ácidos micólicos del bacilo Mycobacterium
tuberculosis – resisten decoloración
Ácido periódico. Fuscina de Ziehl, hematoxilina

56. Mucicarmin
Carmin y cloruro de aluminio
Mucinas y mucoproteínas - amarillo

57. Tioflavina T
Luz polarizada
Amiloide

58. Azul de metileno
Tinción utilizada para morfología
celular.
Evidenciar núcleos de color azul
Células vivas – extendidos
celulares

59. Procedimiento basado en la
utilización de un anticuerpo
específico, marcado a una
enzima que puede
transformar un sustrato en
visible sin afectar la
capacidad del Ab a formar
un complejo Ag-Ab
Investigación biomédica
Diagnóstico
Tratamiento

60. Sustancias producidas por
un laboratorio que
reconocen y se unen
proteínas específicas (células
blanco)

61. Anticuerpo monoclonal

62. Anticuerpos policlonales
Derivados de ciertas líneas de
linfocitos.
Una mezcla de
inmunoglobulinas secretadas en
contra de un antígeno
específico, cada una
reconociendo diferentes
epítopes

63. Cromógeno
• Moléculas que poseen potencial de
coloración conferido por el
radical cromóforo.

64. Inmunohistoquími
ca

65. Inmunofluores
cencia