Comparación de los efectos
del tratamiento con
Monofluorofosfato y Fluoruro de
Sodio sobre el proceso de
reparación ósea e...
Defectos óseos

•Críticos: Los que no tienen la posibilidad de
regenerarse por sí solos.

•No críticos: Los que sí cuentan...
El hueso largo y sus partes

Funciones del tejido óseo:
Sostén
Protección
Homeostasia fosfocálcica

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Organización Haversiana del Hueso Compacto

http://www.aula2005.com/html/cn3eso/14locomotor/14locomotores.htm
Hueso largo en crecimiento

Espacios
Medulares

Hueso
neoformado

Cartílago en
crecimiento

Hueso
trabecular
Osteoclasto y condrocitos

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Medida de fluoruria

Método: potenciometría directa.

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Medida de la fosfatasemia alcalina

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Medida de fosfatemia

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Medida de calcio fecal

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Análisis histológico



Eutanasia y disección de extremidades traseras.

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RESULTADOS
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CONCLUSIONES
El tratamiento con NaF y MFP con respecto
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 Aumento de la DMO en la zona del defecto
 Aumento de la F...
Estos resultados estarían indicando que la
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TRABAJOS FUTUROS
Evaluar las propiedades biomecánicas del hueso
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Reparación Ósea estimulada por MFP y NaF

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Producto de la investigación se logra evidenciar la diferencia en el estímulo que ejerce el Monofluorofosfato MFP y el Fluoruro de Sodio NaF en la reparación de defectos óseo no críticos y la importancia que ello representa para la clínica.

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Reparación Ósea estimulada por MFP y NaF

  1. 1. Comparación de los efectos del tratamiento con Monofluorofosfato y Fluoruro de Sodio sobre el proceso de reparación ósea en ratas Autores Dra. Sandra Mejía Dr. Alfredo Rigalli
  2. 2. Defectos óseos •Críticos: Los que no tienen la posibilidad de regenerarse por sí solos. •No críticos: Los que sí cuentan con ella. Crenshan, A. 1992. Cirugia Orthopedical. 8ª Ed. Panamericana. Buenos Aires.
  3. 3. El hueso largo y sus partes Funciones del tejido óseo: Sostén Protección Homeostasia fosfocálcica http://www.aula2005.com/html/cn3eso/14locomotor/14locomotores.htm
  4. 4. Organización Haversiana del Hueso Compacto http://www.aula2005.com/html/cn3eso/14locomotor/14locomotores.htm
  5. 5. Hueso largo en crecimiento Espacios Medulares Hueso neoformado Cartílago en crecimiento Hueso trabecular
  6. 6. Osteoclasto y condrocitos Oc
  7. 7. Osteoblastos BMP TGFβ Wnt MSC OB
  8. 8. El fluoruro (F-) es un mitógeno de las células óseas que produce incremento de la masa ósea. El mecanismo de acción sobre el osteoblasto es parcialmente conocido y la hipótesis con mayor sustento experimental, se basa en su actividad inhibitoria sobre la tirosin fosfatasa ácida del osteoblasto¹ encargada de desfosforilar proteínas involucradas en la transducción de señales. También existe evidencia que la acción podría ser llevada a cabo por mecanismos que involucran a las proteínas G triméricas asociadas a adenilciclasa y fosfolipasa C. ² En ambos casos el fluoruro prolongaría el efecto de factores de crecimiento sobre las células involucradas. [1] Farley, J.R; Tarbaux, N; Hall, S and Baylink, D.J. 1990. Mitogenic Action(s) Of Fluoride On Osteoblast Line Cells; Determinants Of The Response In Vitro. J. Bone Miner. Res. 5, Supp 1: S107 113. Lau, K.H; Farley, J.R; Freeman, T.K; Baylink, D.J.A proposed mechanism of the mitogenic action of fluoride on bone cells inhibition of the activity of an osteoblastic acid phosphatase. Metabolism 38: 858-868. 1989. [2] Aussel, C; Mary, D; Peyron, J.F; Pelassy, C; Ferua, B; Fehlmann, M. Inhibition and activation of interleukin 2 synthesis by direct modification of guanosine triphosphate binding proteins. J. Immunology 140(1):215 220. 1988. Anderson, N.G; Kilgour, E; Sturgill, T.W. 1991. Activation of mitogen activated protein kinase (mapk) in bc3h1 myocytes by fluoroaluminate. J. Biol. Chem 266:(16) 10131 - 10135.
  9. 9. Mecanismo acción del fluoruro Ca++ F F + MATRIZ CALCIFICADA COLAGENO
  10. 10. Mecanismo de acción del monofluorofosfato AM-MFP Ca AM-MFP + AM-MFP MATRIZ CALCIFICADA COLAGENO AM-MFP
  11. 11. HIPOTESIS
  12. 12. LA REPARACIÓN DE UN DEFECTO ÓSEO EN PRESENCIA DE MFP Y NaF SERÁ MAYOR QUE EN ANIMALES CONTROLES Y EL EFECTO SERÁ MÁS RÁPIDO EN ANIMALES TRATADOS CON MFP.
  13. 13. OBJETIVOS
  14. 14. General Determinar el efecto de la administración oral de MFP y del NaF sobre el proceso de reparación ósea en la rata. Específicos  Determinar el efecto de la administración de MFP o NaF sobre la calidad del hueso neoformado.  Evaluar el efecto del tratamiento con MFP y NaF sobre el proceso de mineralización en el sitio de la lesión y en el hueso adyacente a través de mediciones radiológicas.  Evaluar el contenido de flúor en orina y plasma y su relación con la reparación y calidad del hueso reparado
  15. 15. MATERIALES Y METODOS
  16. 16.  Se seleccionaron 18 ratas hembras IIM/Fm “e” de 7 semanas, normales.  Se produjo un defecto no crítico en la epífisis proximal de las tibias  Se administró MFP o NaF durante 30 días  Se avaluó el efecto del tratamiento sobre el tejido óseo.
  17. 17. Control G r u p o s NaF MFP Días Defecto Óseo Peso Pruebas Bioquímicas RX DMO 0 + + + + 10 20 30 + + + + + + + + + + + + Ca Fecal y Flúor en orina + Disección de extremidades + Descalcificación y Análisis Histológico + Sacrificio
  18. 18. Creación del defecto óseo
  19. 19. Rx en la zona del defecto óseo
  20. 20. Medida de la densidad mineral ósea 160.000 intensidad de gris 140.000 120.000 100.000 80.000 60.000 40.000 DMO DMO 20.000 0 0 10 20 30 mg Ca/cm2 40 50 60
  21. 21. Medida de la fluoremia La medición de la concentración de flúor plasmático se realizó por potenciometría directa utilizando un electrodo de ión específico ORION 94-09 , luego de la destilación isotérmica
  22. 22. Medida de fluoruria Método: potenciometría directa. Electrodo de ión específico ORION 94-09.
  23. 23. Medida de la fosfatasemia alcalina La actividad de la fosfatasa alcalina plasmática se midió utilizando un equipo comercial ALP 405 línea líquida, laboratorio Wiener, Rosario. La técnica se fundamenta en la medida del cambio de absorbancia a 405 nm, generado por la hidrólisis del p-nitrofenilfosfato en medio alcalino por la enzima fosfatasa alcalina.
  24. 24. Medida de fosfatemia La determinación de fósforo inorgánico en plasma se realizó por un método UV con un equipo Fosfatemia UV de Laboratorios Wiener
  25. 25. Medida de calcio fecal Se determinó en heces de 24 horas por Absorción Atómica
  26. 26. Medida de la calcemia La calcemia se determinó con un equipo CaColor Laboratorios Wiener, Rosario por espectrofotometría a 570 nm
  27. 27. Análisis histológico  Eutanasia y disección de extremidades traseras.  Descalcificación con EDTA 10%, pH 7 por 30-35 días.  Se siguen los pasos de coloración usados para los tejidos blandos con Hematoxilina-Eosina.  Sobre este preparado se hizo el análisis histológico.
  28. 28. RESULTADOS
  29. 29. Efecto del tratamiento sobre el crecimiento y sobre la DMO del hueso no afectado por el defecto CONTROLES NaF MFP CRECIMIENTO g/día 1.40.2 1.0 0.2 1.2 0.3 DMO gCa/cm2.día 0.16 0.12 -0.13 0.11 0.08 0.16
  30. 30. DMO de la zona del defecto 45 CONTROL NaF MFP DMO, mg/cm2 40 35 30 * 25 20 10 0 0 10 20 DIAS DE TRATAMIENTO 30
  31. 31. CALCEMIA FOSFATEMIA FOSFATASA ALCALINA
  32. 32. CALCIO FECAL 400 * mgCa/dia 300 200 100 0 CONTROL NaF 30 DIAS MFP
  33. 33. FLUOREMIA
  34. 34. FLUORURIA 5 CONTROL NaF MFP mol/24h 4 3 2 1 0 CONTROL NaF MFP
  35. 35. GRUPO CONTROL Escasa mineralización Fibras colágenas desordenadas Carencia de sistemas Haversianos. Presencia de condrocitos.
  36. 36. GRUPO NaF Zonas mineralizadas. Trabéculas engrosadas Escasos osteoblastos Sistemas Haversianos definidos.
  37. 37. GRUPO MFP Depósito de tejido óseo en forma laminar Osteoblastos en estado protoplásico Ingreso celular al osteoide Sistemas Haversianos
  38. 38. CONCLUSIONES
  39. 39. El tratamiento con NaF y MFP con respecto al Control, mostró:  Aumento de la DMO en la zona del defecto  Aumento de la FAL plasmática  Disminución de la excreción de calcio fecal  Mejoramiento de la estructura ósea estimada histológicamente.  Estos efectos fueron más marcados con el MFP que con el NaF.  Los tratamientos no mostraron efectos adversos. 
  40. 40. Estos resultados estarían indicando que la reparación ósea de un defecto no crítico en ratas, ocurre independientemente del tratamiento, pero el tratamiento con MFP y NaF aceleraría dicho proceso.
  41. 41. TRABAJOS FUTUROS Evaluar las propiedades biomecánicas del hueso formado. Evaluar la magnitud del proceso de reparación a nivel local. Evaluar los efectos sobre la reparación ósea con diferentes dósis de ambas drogas. Evaluar el efecto de ambas drogas sobre la reparación de defectos críticos.
  42. 42. MUCHAS GRACIAS
  43. 43. MOLÉCULAS SEÑAL EN LA ACTIVACIÓN DE LAS FUNCIONES ÓSEAS Activación/Inhibición
  44. 44. Inhibición de la vía Wnt Espacio Extracelular DVL Frizzled K R E M E N Wnt L R P 5 L R P 6 L R P 6 L R P 5/6 Dkk-1 SOST Núcleo AXINA+APC+GSK3 Bcat Bcat Bcat P Esclerosin UBIQUITINA = PROTEOLISIS
  45. 45. Activación de la vía Wnt Espacio Extracelular A-M Frizzled A-M MFP MFP L R P 5 A-M MFP Wnt L R P 6 L R P 6 K R E M E N L R P 5/6 Dkk-1 SOST A-M A-M MFP AXINA+APC+ A-M MFP MFP Esclerosin GSK3 Núcleo Bcat Bcat Bcat Inicia la transcripción MFP: Monofluorofosfato AM: Alfa Macroglobulina Interacción P Inicia la diferenciación y proliferación osteoblástica

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