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Alumna: María Augusta
Sánchez
Docente: Dr. Manuel
Quezada
BIOTECNOLOGÍA
REPRODUCTIVA
TRANSFERENCIA DE
EMBRIONES
permite que las hembras
seleccionadas
genéticamente puedan
incrementar, su número de
crías al año, mejorando así
tanto la capacidad
reproductiva, como el nivel
genético de la granja.
GENERALIDADES
empezó a realizarse en 1980 y en 1950 se
aplicó en el ganado vacuno.
se realizaba de forma quirúrgica, haciendo
inviable la aplicación de esta técnica en
forma rutinaria.
1970 se desarrollan técnicas no quirúrgicas
concepción entre 40 y el 70% : tamaño de
HEMBRA DONANTE
Ventajas
Aumenta la capacidad reproductiva de hembras de
gran valor genético (mayor número de
descendientes por hembra)
 Disminuye el intervalo generacional
Rescate genético de animales accidentados o
enfermos de los que pudieran obtenerse embriones
antes de que el animal muera.
 Intercambio material genético.
Se pueden obtener crías de vaquillas que aún no
alcanzan la edad y peso para cargarse, ya que será
la receptora quien se encargue de mantener la
preñez.
 Aumenta eficiencia del semen
Desventajas
Costo operacional
Inversión en equipos, materiales,
productos veterinarios.
Contratación de personal especializado.
Mayor costo de los terneros.
Promedio de aceptación de embriones
por parte de la hembra receptora 40-
50%.
 libres de enfermedades
vacunas obligatorias y
necesarias
Condiciones sanitarias de la hembra donadora
Factores externos que afectan la respuesta superovulatoria
Factores fisiológicos que afectan la respuesta superovulatoria
Dinámica folicular y características de las ondas foliculares
PROTOCOLO DE SUPEROVULACIÓN
COLECCIÓN Y EVALUACIÓN
EMBRIONARIA
Colección de embriones
 séptimo día
un lavado uterino transcervical
embriones se encuentran en el
estadio de blastocistos o de
mórulas
Preparación del animal
Infraestructura
docilidad del animal
destreza y experiencia del operador.
lavaje es necesario
precisar la posición
dimensiones del útero
respuesta ovárica al tratamiento
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Anestésico epidural
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Dilatador
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Catéter
recolección
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2 Mandril 2
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ml 2 20 ml
2 Clamps
2 Botella
para el medio
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3 Tubo de
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adaptador
2 Filtro
2 Recipiente
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1 PBS
2 Suero fetal
bovino
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Agujas 18
descartables
x 11/2 6
agua con
temperatura
controlada
portátil
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Incubadora
portátil, 1
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Maleato de
acepromacina
2 ml
Clorhidrato
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Colocación del catéter y lavaje
del útero
El instrumento
Catéter, goma o silicona, mandril
Fijación
empujando suavemente el instrumento
hacia craneal
último anillo
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libera el catéter del mandril
Desplaza
. Repetir la operación un par de veces
hasta comprobar una óptima colocación
del catéter en el cuerno uterino
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20ml
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Lavado del filtro
Luego del lavaje
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conteniendo los embriones
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placas de Petri (de 130 mm
de diámetro) con divisiones.
Para garantizar una
completa observación visual
de la superficie total de la
placa, la búsqueda deberá
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Clasificación de embriones
Grado I: Excelente, el desarrollo
corresponde al día de la
recolección. No existen defectos
visibles. Los blastómeros son
claramente visibles, de color y
estructura uniformes, simétricos,
de forma esferoide y la zona
pelúcida está intactaGrado II: Bueno, el embrión tiene
muy pocos blastómeros
desprendidos de la masa celular
y/o posee una pequeña cantidad
de detritus celulares. Su forma
puede ser ligeramente irregular
Grado III: Regular, el embrión
posee varios defectos: detritus
celulares, forma irregular, de color
muy oscuro o muy claro y/o ligero
agrietamiento de la zona pelúcida
Grado IV: Malo, el embrión posee
muchos defectos.
EVALUACIÓN DE EMBRIONES
Días de vida
0 Huevo sin fertilizar después de la ovulación.
1 Fertilización hasta la primera división celular.
2 Embrión de dos células.
3 Embrión de cuatro células.
4 Embrión de ocho células.
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AISLAMIENTO DE EMBRIONES
 Preparación del equipo de
manipulación de embriones.
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(Holding) a 37°C.
 Llenado de las pajillas.
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congelamiento.
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 Etiquetar las pajillas con su
respectiva información.
 Pasar las pajillas al tanque de
congelamiento con nitrógeno
líquido a -196°C
DESCONGELADO DE LOS
EMBRIONESLa descongelación se debe hacer lo más rápido posible en
agua a 37°C.
Ventajas
no necesariamente debe ser de
elevado valor genético
manejable y dócil para
desarrollar el proceso
Desventajas
sin embargo esta hembra debe ser
de preferencia menor de 10 años
buena condición corporal
debe ser una hembra libre de
enfermedades
Manejo de la hembra luego de la
transferencia debe ser observado
continuamente por una persona
calificada para así poder detectar
inconvenientes como abortos
prematuros.
Mejor método para sincronización
HEMBRA RECEPTORA
CONDICIONES SANITARIAS DE LA
HEMBRA RECEPTORA
esta hembra cumpla con el mínimo de
requisitos sanitarios de la donante
estar libre de enfermedades
tener una equilibrada alimentación,
cumpliendo con todas las necesidades para
la gestación.
Además, se debe realizar un buen manejo
hay que evitar el transporte de los animales,
vigilar los partos prematuros (7 meses)
realizar el diagnóstico de la gestación antes
de entregar a la receptora
nunca se deberá entregar una receptora sin
verificar previamente su estado de gestación.
PROTOCOLO DE SINCRONIZACIÓN
PGF2α con un intervalo de 2
semanas.
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Implantes de liberación lenta de
progestágenos durante 7 0 9
días.
PROTOCOLOS
PGF2α
P4
Dispositivos vaginales de P4
PRID
CIDR
Implantes subcutáneos de P4
Crestar
SMB
Método RESET
a. PGF2Α
a. Protocolo 1 PGF2α: Se usan dos
dosis de prostaglandinas
separadas por 8 días.
b. Protocolo 2 PGF2α: Utiliza
una sola dosis de
prostaglandina.
c. Protocolo 3 PGF2α (Con embriones congelados):
Se usan 2 dosis de prostaglandina intramuscular,
separadas por 12 días.
b. P4 (SE UTILIZA UN DISPOSITIVO DE LIBERACIÓN LENTA DE PROGESTERONA,
ÉSTOS PUEDEN SER DISPOSITIVOS VAGINALES (PRID, CIDR) O IMPLANTES SUBCUTÁNEOS
(CRESTAR, SMB).
a. Protocolo 1 con dispositivos
vaginales de P4: CIDR
b. Protocolo 2 con dispositivos
vaginales de P4: CIDR
Dispositivos vaginales de P4
c. Protocolo 3 con dispositivos vaginales de P4: CIDR
Implantes subcutáneos de P4
a. Protocolo 1 con implantes subcutáneos de P4: Crestar
C. MÉTODO RESET
(80%)
a. Protocolo 1 RESET: Es utilizado para novillas Holstein de 15
- 18 meses.
TRANSFERENCIA DE EMBRIONES
los embriones (óvulos fertilizados) son colectados del
cuerno uterino de la hembra antes de la nidación
(donadora), y transferidos al cuerno uterino de otras
hembras para completar su gestación (receptoras)
PROCEDIMIENTO PARA LA
TRANSFERENCIA DE EMBRIONES
 Traslado de las Vacas Receptoras
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  • 1. Alumna: María Augusta Sánchez Docente: Dr. Manuel Quezada BIOTECNOLOGÍA REPRODUCTIVA
  • 2. TRANSFERENCIA DE EMBRIONES permite que las hembras seleccionadas genéticamente puedan incrementar, su número de crías al año, mejorando así tanto la capacidad reproductiva, como el nivel genético de la granja.
  • 3. GENERALIDADES empezó a realizarse en 1980 y en 1950 se aplicó en el ganado vacuno. se realizaba de forma quirúrgica, haciendo inviable la aplicación de esta técnica en forma rutinaria. 1970 se desarrollan técnicas no quirúrgicas concepción entre 40 y el 70% : tamaño de
  • 4. HEMBRA DONANTE Ventajas Aumenta la capacidad reproductiva de hembras de gran valor genético (mayor número de descendientes por hembra)  Disminuye el intervalo generacional Rescate genético de animales accidentados o enfermos de los que pudieran obtenerse embriones antes de que el animal muera.  Intercambio material genético. Se pueden obtener crías de vaquillas que aún no alcanzan la edad y peso para cargarse, ya que será la receptora quien se encargue de mantener la preñez.  Aumenta eficiencia del semen Desventajas Costo operacional Inversión en equipos, materiales, productos veterinarios. Contratación de personal especializado. Mayor costo de los terneros. Promedio de aceptación de embriones por parte de la hembra receptora 40- 50%.
  • 5.  libres de enfermedades vacunas obligatorias y necesarias Condiciones sanitarias de la hembra donadora
  • 6. Factores externos que afectan la respuesta superovulatoria Factores fisiológicos que afectan la respuesta superovulatoria Dinámica folicular y características de las ondas foliculares PROTOCOLO DE SUPEROVULACIÓN
  • 7. COLECCIÓN Y EVALUACIÓN EMBRIONARIA Colección de embriones  séptimo día un lavado uterino transcervical embriones se encuentran en el estadio de blastocistos o de mórulas Preparación del animal Infraestructura docilidad del animal destreza y experiencia del operador. lavaje es necesario precisar la posición dimensiones del útero respuesta ovárica al tratamiento superovulatorio
  • 8. Anestésico epidural 4-6 ml de Lidocaina (2%) Materiales Dilatador cervical 1 Catéter recolección de embriones 2 Mandril 2 Jeringa 60 ml 2 20 ml 2 Clamps 2 Botella para el medio de recolección 3 Tubo de recolección adaptador 2 Filtro 2 Recipiente de vidrio 500 ml 3 Lubricante 1 PBS 2 Suero fetal bovino Toallas de papel Agujas 18 descartables x 11/2 6 agua con temperatura controlada portátil 1 Incubadora portátil, 1 Procaína al 2% 10 ml, Maleato de acepromacina 2 ml Clorhidrato de xilaxina 1 ml.
  • 9. Colocación del catéter y lavaje del útero El instrumento Catéter, goma o silicona, mandril Fijación empujando suavemente el instrumento hacia craneal último anillo  cuerno uterino, punta del catéter libera el catéter del mandril Desplaza . Repetir la operación un par de veces hasta comprobar una óptima colocación del catéter en el cuerno uterino inyectar con aire el balón del catéter;15 20ml
  • 10. la recolección de embriones Circuito cerrado con flujo continuo Circuito cerrado con flujo discontinuo
  • 11. Lavado del filtro Luego del lavaje La sedimentación de los embriones requiere 20-30 minutos. El volumen de solución conteniendo los embriones (40-50 ml) se vuelca en 4-5 vidrios de reloj o en 2-3 placas de Petri (de 130 mm de diámetro) con divisiones. Para garantizar una completa observación visual de la superficie total de la placa, la búsqueda deberá hacerse en forma ordenada. Clasificación de embriones Grado I: Excelente, el desarrollo corresponde al día de la recolección. No existen defectos visibles. Los blastómeros son claramente visibles, de color y estructura uniformes, simétricos, de forma esferoide y la zona pelúcida está intactaGrado II: Bueno, el embrión tiene muy pocos blastómeros desprendidos de la masa celular y/o posee una pequeña cantidad de detritus celulares. Su forma puede ser ligeramente irregular Grado III: Regular, el embrión posee varios defectos: detritus celulares, forma irregular, de color muy oscuro o muy claro y/o ligero agrietamiento de la zona pelúcida Grado IV: Malo, el embrión posee muchos defectos.
  • 12. EVALUACIÓN DE EMBRIONES Días de vida 0 Huevo sin fertilizar después de la ovulación. 1 Fertilización hasta la primera división celular. 2 Embrión de dos células. 3 Embrión de cuatro células. 4 Embrión de ocho células. 5 Embrión de dieciséis células. 6 Mórula. 7 Blastocito. 8 Blastocito expandido. 9 Blastocito eclosionado.
  • 13. AISLAMIENTO DE EMBRIONES  Preparación del equipo de manipulación de embriones.  Lavado del filtro de embriones.  Búsqueda de embriones.  Clasificación de embriones.  Mantenimiento de embriones (Holding) a 37°C.  Llenado de las pajillas.  Sellar pajillas.  Preparación del equipo de congelamiento.  Cristalización  Etiquetar las pajillas con su respectiva información.  Pasar las pajillas al tanque de congelamiento con nitrógeno líquido a -196°C
  • 14. DESCONGELADO DE LOS EMBRIONESLa descongelación se debe hacer lo más rápido posible en agua a 37°C.
  • 15. Ventajas no necesariamente debe ser de elevado valor genético manejable y dócil para desarrollar el proceso Desventajas sin embargo esta hembra debe ser de preferencia menor de 10 años buena condición corporal debe ser una hembra libre de enfermedades Manejo de la hembra luego de la transferencia debe ser observado continuamente por una persona calificada para así poder detectar inconvenientes como abortos prematuros. Mejor método para sincronización HEMBRA RECEPTORA
  • 16. CONDICIONES SANITARIAS DE LA HEMBRA RECEPTORA esta hembra cumpla con el mínimo de requisitos sanitarios de la donante estar libre de enfermedades tener una equilibrada alimentación, cumpliendo con todas las necesidades para la gestación. Además, se debe realizar un buen manejo hay que evitar el transporte de los animales, vigilar los partos prematuros (7 meses) realizar el diagnóstico de la gestación antes de entregar a la receptora nunca se deberá entregar una receptora sin verificar previamente su estado de gestación.
  • 17. PROTOCOLO DE SINCRONIZACIÓN PGF2α con un intervalo de 2 semanas. GnRH y PGF2α 7 días más tarde. Implantes de liberación lenta de progestágenos durante 7 0 9 días.
  • 18. PROTOCOLOS PGF2α P4 Dispositivos vaginales de P4 PRID CIDR Implantes subcutáneos de P4 Crestar SMB Método RESET
  • 19. a. PGF2Α a. Protocolo 1 PGF2α: Se usan dos dosis de prostaglandinas separadas por 8 días. b. Protocolo 2 PGF2α: Utiliza una sola dosis de prostaglandina.
  • 20. c. Protocolo 3 PGF2α (Con embriones congelados): Se usan 2 dosis de prostaglandina intramuscular, separadas por 12 días.
  • 21. b. P4 (SE UTILIZA UN DISPOSITIVO DE LIBERACIÓN LENTA DE PROGESTERONA, ÉSTOS PUEDEN SER DISPOSITIVOS VAGINALES (PRID, CIDR) O IMPLANTES SUBCUTÁNEOS (CRESTAR, SMB). a. Protocolo 1 con dispositivos vaginales de P4: CIDR b. Protocolo 2 con dispositivos vaginales de P4: CIDR Dispositivos vaginales de P4
  • 22. c. Protocolo 3 con dispositivos vaginales de P4: CIDR
  • 23. Implantes subcutáneos de P4 a. Protocolo 1 con implantes subcutáneos de P4: Crestar
  • 24. C. MÉTODO RESET (80%) a. Protocolo 1 RESET: Es utilizado para novillas Holstein de 15 - 18 meses.
  • 25. TRANSFERENCIA DE EMBRIONES los embriones (óvulos fertilizados) son colectados del cuerno uterino de la hembra antes de la nidación (donadora), y transferidos al cuerno uterino de otras hembras para completar su gestación (receptoras)
  • 26. PROCEDIMIENTO PARA LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES  Traslado de las Vacas Receptoras  Evaluación de la receptora  Armado de la Pistola de Transferencia de Embriones  Preparación de la vaca receptora  Identificación de la vaca transferida