Todo sobre los métodos de estudio de biología.

2. Las células son difíciles de estudiar ya que son muy pequeñas y
transparentes, no absorben bien las longitudes de onda de la luz visible.
Robert Hooke
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3. LOS MICROSCOPIOS ÓPTICOS SE UTILIZAN
PARA ESTUDIAR CÉLULAS TEÑIDAS O VIVAS
• CONSISTE EN UN TUBO CON LENTES DE VIDRIO EN
CADA EXTREMO.
• LA LUZ VISIBLE PASA A TRAVÉS DE LA MUESTRA
QUE SE ESTÁ OBSERVANDO Y POR MEDIO DE LAS
LENTES.
• LAS LENTES REFRACTAN LA LUZ, AMPLIANDO LA
IMAGEN.

4. LAS IMÁGENES OBTENIDAS SE
CONOCEN COMO
MICROGRAFÍAS ÓPTICAS.

5. DOS CARACTERÍSTICAS DE UN MICROSCOPIO
DETERMINAN LA NITIDEZ CON LA QUE SE PUEDE VER
UN OBJETO PEQUEÑO:
• AUMENTO: ES LA RELACIÓN ENTRE EL TAMAÑO DE LA IMAGEN VISTA CON EL MICROSCOPIO Y EL
TAMAÑO REAL DEL OBJETO.

6. RESOLUCIÓN O PODER DE
RESOLUCIÓN:
• ES LA CAPACIDAD PARA DISTINGUIR
DETALLES FINOS EN UNA IMAGEN
• DISTANCIA MÍNIMA ENTRE DOS PUNTOS
A LA CUAL AMBOS SE PUEDEN VER POR
SEPARADO Y NO COMO UN ÚNICO
PUNTO BORROSO.
• DEPENDE DE:
• LA CALIDAD DE LAS LENTES
• LA LONGITUD DE ONDA DE LA LUZ DE
ILUMINACIÓN.

8. TIPOS DE MICROSCOPIO

9. Tipos de microscopios
Microscopio óptico Microscopio electrónico
 Utiliza la luz
 Lentes: Ocular y objetivo
 Mayor poder de resolución que
el ojo humano
 Poder de resolución: 0.2 μm
(200 nm).
 Aumento: de 500 a 1500
veces más que el ojo humano
 Utiliza haces de electrones
 Mayor poder de resolución que
el ojo humano y el MO
 Aumento: Hasta 1 millón de
veces más que el ojo humano
 Imagen en blanco y negro
 Estudian ultraestructuras
Poder de resolución del ojo humano: 100 μm.

10. PARTES DE
UN M.O.

11. • EL AUMENTO DE LA IMAGEN EN EL MO DEPENDE PRINCIPALMENTE DE:
• LAS LENTES DEL OBJETIVO, EL MÁXIMO ES DE 100X A 120X.
• EL OCULAR AGRANDA LA IMAGEN DEL OBJETIVO ENTRE 5 Y 15 VECES
 SE LLEGA A UN AUMENTO DE 500X A 1500X.
OCULAR

13. MICROSCOPIA DE CAMPO CLARO:
• LA IMAGEN SE FORMA
TRANSMITIENDO LUZ A TRAVÉS DE LA
CÉLULA (U OTRA MUESTRA).
• DEBIDO AL POCO CONTRASTE LOS
DETALLES DE LA ESTRUCTURA CELULAR
NO SON VISIBLES.
• PRODUCE UNA IMAGEN OSCURA SOBRE
UN FONDO CLARO.

15. MICROSCOPIA DE CAMPO OSCURO:
• LOS RAYOS DE LUZ SE PROYECTAN LATERALMENTE Y SOLO
ENTRA LUZ DISPERSADA POR LA MUESTRA EN LAS LENTES.
• LA CÉLULA SE VE COMO UN OBJETO BRILLANTE EN UN
FONDO OSCURO. NO SE NECESITA TEÑIR LA MUESTRA.
Treponema Pallidum
Sífilis

17. MICROSCOPIA DE CONTRASTE DE FASE Y LA MICROSCOPIA
DE CONTRASTE DE INTERFERENCIA DIFERENCIAL DE
NOMARSKI:
• USA LAS VARIACIONES DE DENSIDAD ÓPTICA EN
EL INTERIOR DE LA CÉLULA.
• PROVOCAN DIFERENCIAS EN LA FORMA EN QUE
REFRACTAN LA LUZ.
• OCURREN RETRASOS EN LAS RADIACIONES QUE
ATRAVIESAN LA ESTRUCTURA.
• PARA OBSERVAR CÉLULAS VIVAS, MITOSIS.

19. MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA:
• UTILIZAN FILTROS QUE TRANSMITEN LA LUZ EMITIDA
POR LAS MOLÉCULAS TEÑIDAS CON COLORANTES
FLUORESCENTES.
• MUY ÚTIL PARA OBSERVAR PROTEÍNAS ESPECIFICAS EN
CÉLULAS VIVAS.

20. • ALGUNOS COLORANTES
FLUORESCENTES SE PUEDEN
UNIR QUÍMICAMENTE A LOS
ANTICUERPOS (ESTUDIOS
INMUNOHISTOQUÍMICOS).

21. MICROSCOPIO CONFOCAL
LASER DE BARRIDO:
• ES COMPUTARIZADO.
• LAS CÉLULAS VIVAS QUE SE HAN MARCADO CON UN COLORANTE FLUORESCENTE.
• SE PROYECTA UN HAZ DE LUZ ULTRAVIOLETA A UNA PROFUNDIDAD ESPECIFICA.
• EL MARCAJE FLUORESCENTE EMITE LUZ VISIBLE Y SE PUEDE VER OBJETOS EN UN ÚNICO PLANO DE LA
CÉLULA.

22. • EL MICROSCOPIO PRODUCE CORTES
ÓPTICOS.
• UNA COMPUTADORA INTEGRA LAS
IMÁGENES, DE MODO QUE SE PUEDEN
UTILIZAR UNA SERIE DE CORTES
ÓPTICOS DE DIFERENTES PLANOS.
• FORMAR UNA IMAGEN 3D.

23. MICROSCOPIO DE POLARIZACIÓN:
• SE BASA EN EL COMPORTAMIENTO DE LOS
COMPONENTES OBSERVADOS:
• SI ES ISOTRÓPICO, LA LUZ PASA CON LA MISMA
VELOCIDAD
• SI ES ANISOTRÓPICO (BIRREFRINGENTE) LA VELOCIDAD
DE PROPAGACIÓN CAMBIA.
• USA LUZ POLARIZADA.

26. MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE
TRANSMISIÓN (MET):
• LA MUESTRA SE SUMERGE EN RESINAS Y DESPUÉS SE HACEN
CORTES EXTRAORDINARIAMENTE FINOS CON UNA CUCHILLA
DE VIDRIO O DE DIAMANTE.
• EL HAZ DE ELECTRONES PASA A TRAVÉS Y DESPUÉS INCIDE
SOBRE UNA PLACA FOTOGRÁFICA O SOBRE UNA PANTALLA
FLUORESCENTE.

27. Pueden detectar moléculas específicas con el uso
de anticuerpos, a las que se unen partículas de
oro, éstas bloquean el haz de electrones,
identificando la localización de las proteínas
reconocidas por los ac, que se observan como
puntos negros.

28. MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO (MEB):
• LA MUESTRA SE RECUBRE CON UNA FINA PELÍCULA DE ORO
O ALGÚN OTRO METAL.
• CUANDO EL HAZ DE ELECTRONES GOLPEA VARIOS PUNTOS
DE LA SUPERFICIE DE LA MUESTRA, SE EMITEN
ELECTRONES SECUNDARIOS CUYA INTENSIDAD VARÍA
DEPENDIENDO DEL CONTORNO DE LA SUPERFICIE.

29. Los patrones de emisión registrados de los electrones
secundarios proporcionan una imagen 3-D de la
superficie.
Da información acerca de la forma y características
externas de la muestra que no se pueden obtener con
el MET.

31. FRACCIONAMIENTO CELULAR
Técnica para separar las partes de la célula.
Se separan en un mezclador.
La mezcla resultante, llamada homogenizado o extracto celular, se
somete a una fuerza centrífuga en un aparato llamado centrifuga.

32. SEPARA EL EXTRACTO EN DOS
FRACCIONES:
• SEDIMENTO: QUE SE FORMA EN EL FONDO DEL TUBO CONTIENE LOS MATERIALES MÁS PESADOS,
COMO LOS NÚCLEOS, MUY JUNTOS O EMPAQUETADOS.
• SOBRENADANTE: LÍQUIDO QUE QUEDA POR ENCIMA DEL SEDIMENTO, CONTIENE LAS
PARTÍCULAS MÁS LIGERAS, MOLÉCULAS DISUELTAS E IONES.

34. CENTRIFUGACIÓN DIFERENCIAL:
• EL SOBRENADANTE SE CENTRIFUGA DE NUEVO CON RAPIDECES SUCESIVAMENTE MAYORES,
PERMITIENDO LA SEPARACIÓN DE DIVERSOS COMPONENTES CELULARES EN FUNCIÓN DE LA
DIFERENCIA DE TAMAÑO Y DENSIDAD.
• EL NUEVO SEDIMENTO CONTIENE COMPONENTES CELULARES MÁS PESADOS, POR EJEMPLO, LAS
MITOCONDRIAS Y LOS CLOROPLASTOS.

36. CENTRIFUGACIÓN EN UN GRADIENTE DE
DENSIDAD:
• PURIFICA LOS COMPONENTES CELULARES DE LOS SEDIMENTOS RESUSPENDIDOS.
• LOS TUBOS DE LA CENTRIFUGA SE LLENAN CON UNA SERIE DE DISOLUCIONES DE DENSIDAD
DECRECIENTE.
• LA CONCENTRACIÓN DE SACAROSA ES MÁS ALTA EN EL FONDO DEL TUBO Y DISMINUYE
GRADUALMENTE, DE MODO QUE LA CONCENTRACIÓN MÁS BAJA ESTÁ EN LA PARTE SUPERIOR.

37. Cada muestra de sedimento resuspendido se
coloca sobre la capa superior de un gradiente de
densidad, cada tipo de ellos migrara y formara
una banda en la misma posición del gradiente en
la que su densidad iguala a la de la disolución.

39. FRACCIONES:
1. NUCLEAR: NÚCLEO. MÁS DENSO
2. MITOCONDRIAL: ORGANOIDES QUE NO FORMAN PARTE DEL
SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS Y LISOSOMAS.
3. MICROSOMAL: SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS Y MEMBRANA
PLASMÁTICA.
4. DE GRÁNULOS DE SECRECIÓN: SI ES QUE SE TRATA DE CÉLULAS
SECRETORAS.
5. SOLUBLE: RIBOSOMAS Y RESTOS DE ESTRUCTURAS NO
FRACCIONADAS.

41. PASOS DE LA PREPARACIÓN DEL MATERIAL
A SER ESTUDIADO:
1. FIJACIÓN
2.DESHIDRATACIÓN
3.INCLUSIÓN
4.CORTE
5.COLORACIÓN

42. FIJACIÓN
•PRESERVA LA MORFOLOGÍA Y LA COMPOSICIÓN QUÍMICA.
•FIJACIÓN QUÍMICA: PRODUCEN ALGUNOS CAMBIOS EN ESTRUCTURAS Y MOLÉCULAS.
EJ.: FORMALDEHÍDO, ACETONA, GLUTARALDEHÍDO, ETC.
•FIJACIÓN FÍSICA: CONSERVA INTACTA LA MUESTRA. EJ.: MÉTODO CONGELACIÓN-
DESECACIÓN LOGRADA CON NITRÓGENO LÍQUIDO.

43. DESHIDRATACIÓN
• PARA QUE LA MUESTRA PUEDA SER PENETRADA
CON EL MATERIAL DE INCLUSIÓN.
• SE REALIZA CON BENCENO, TOLUENO O
ETANOL-ETER.
• LUEGO REALIZAR ACLARAMIENTO.

44. INCLUSIÓN
• PARA QUE LA MUESTRA SEA FIRME Y CORTARSE
POSTERIORMENTE.
• SE REALIZA CON PARAFINA.

45. CORTE DEL MATERIAL
• EN LÁMINAS MUY DELGADAS MEDIANTE MICRÓTOMOS.
• SI SE DESEA MANTENER LA COMPOSICIÓN QUÍMICA DEL
MATERIAL SE REALIZA CON MICRÓTOMOS DENTRO DE
CÁMARAS ENFRIADAS CON CO2 LÍQUIDO, DENOMINADOS
CRIOSTATOS.

46. COLORACIÓN DEL MATERIAL
Tipos de colorantes:
•Acidos
•Básicos

47. COLORANTES BÁSICOS
• REACCIONAN CON SUSTANCIAS ÁCIDAS (BASÓFILAS).
• SUSTANCIAS: PROTEÍNAS, ÁCIDOS NUCLEICOS.
• SON ACIDÓFILAS. EJ.: HEMATOXILINA.
• PROPIEDAD DE METACROMASIA: CIERTOS COLORANTES BÁSICOS TIENEN LA PROPIEDAD DE TEÑIR
CIERTOS COMPONENTES CELULARES CON UN COLOR DIFERENTE DEL QUE CARACTERIZA AL
COLORANTE. ES INTENSA EN POLISACÁRIDOS Y GAGS.

48. COLORANTE ÁCIDOS
Reaccionan con sustancias básicas (acidófilas).
Son basófilas.
Ej.: Eosina.

49. COLORACIÓN H&E

50. COLORACIÓN DE GRAM

53. MICROCIRUGÍA:
• CON MICROINSTRUMENTOS PARA ESTUDIAR LAS
ESTRUCTURAS ORGÁNICAS.
• FUNCIÓN:
• DISECCIÓN Y EXTRACCIÓN
• INYECCIÓN DE SUSTANCIAS
• MEDICIÓN DE VARIABLES ELÉCTRICAS
• INJERTOS

54. CITOMETRÍA DE FLUJO:
• PARA SEPARAR CÉLULAS DE MUESTRAS
HETEROGÉNEAS. USA UNA MÁQUINA
DENOMINADA “CELL SORTER”.

55. RADIOAUTOGRAFÍA:
• SE MARCA LOS COMPONENTES DE LA CÉLULA CON RADIOISÓTOPOS (TRITIO) QUE PUEDEN SER
DEMOSTRADOS POR MEDIOS FOTOGRÁFICOS.
• UTILIZADO PARA ESTUDIAR METABOLISMO Y DIVISIÓN CELULAR.

56. CRIOFRACTURA:
• PARA ESTUDIO DE LAS MEMBRANAS
CELULARES CON EL ME.
• CONSISTE EN LA CONGELACIÓN
RÁPIDA DE LA MUESTRA SEGUIDA DE
UN CORTE O FRACTURA Y
SOMBREADO METÁLICO O
RECUBRIMIENTO DE CARBONO DE LA
SUPERFICIE.

58. LÍPIDOS:
• CON FIJADOR Y COLORANTE. EJ.: SUDÁN, ROJO O Y OSMIO.
• CRIOFRACTURA
• TEJIDO ADIPOSO

59. HIDRATOS DE CARBONO:
Reacción de PAS (ácido periódico
de Schiff)
Metacromasia (GAGs sulfatados)
Mocos

60. ÁCIDOS NUCLEICOS:
• COLORANTES COMO AZUL DE
TOLUIDINA O NARANJA DE ACRIDINA.

61. PROTEÍNAS:
• ACTIVIDAD ENZIMÁTICA (TÉCNICA DE
GOMORI)
• INMUNOHISTOQUÍMICA
(ANTÍGENO-ANTICUERPO)

63. • SE USAN PLACAS DE VIDRIO (PLACAS DE PETRI) Y SE BRINDA A LA CÉLULA:
• TEMPERATURA ADECUADA (25° PARA PROCARIOTAS Y 37° EUCARIOTAS)
• OXÍGENO
• ALIMENTACIÓN (SUERO CON MINERALES O ELECTROLITOS Y GLUCOSA)

64. TIPOS DE CULTIVO:
• PRIMARIOS: LA CÉLULA ES EXTRAÍDA DIRECTAMENTE DEL SER VIVO.

65. • SECUNDARIOS: MUESTRA ES EXTRAÍDA DE UN CULTIVO PRIMARIO.

66. • DE LÍNEAS ESTABLECIDAS: CÉLULAS ANORMALES, NECESITAN MENOS ALIMENTACIÓN,
CRECIMIENTO PROLONGADO.