L

1. MICROSCOPÍA
Dra. Aixa E. Urdaneta de Romero

2. Ciencia que estudia el funcionamiento y
composición de cada uno de los microscopios
conocidos o existentes.
Microscopía

3. Instrumento de óptica que permite hacer
observación de mínimos detalles de un
tejido determinado, que a simple vista no
puede ser observado.
Microscopio

4. HISTORIA DE LA MICROSCOPIA

5. HISTORIA DE LA MICROSCOPIA

6. HISTORIA DE LA MICROSCOPIA

7. HISTORIA DE LA MICROSCOPIA
Resumen de los acontecimientos más sobresalientes en la historia de la
Microscopía:
• El naturalista holandés Jan Swammerdam observó insectos con el microscopio
haciendo hincapié en su conformación, descubrió también que la sangre no es un
líquido uniforme rojo sino que existen corpúsculos que le dan ese color.
• El botánico inglés Nehemiah Grew estudió los órganos de reproducción de las
plantas y descubrió los granos de polen.
• El anatomista holandés Reigner de Graaf realizó estudios similares en animales
describiendo ciertos elementos del ovario que desde entonces se conocen con el
nombre de folículos de Graaf.

8. HISTORIA DE LA MICROSCOPIA
Resumen de los acontecimientos más sobresalientes en la Historia de la
Microscopía.
• Marcello Malpighi fue uno de los microscopistas más grandes de la historia de
acuerdo a su espectacular descubrimiento. Sus primeros estudios los realizó
con pulmones de rana, pudiendo observar en ellos una compleja red de vasos
sanguíneos, demasiado pequeños para ser vistos por separado y muy
anastomosados.
Cuando siguió el recorrido de los vasos hasta que se unían con otros mayores,
comprobó que estos últimos eran venas en una dirección y arterias en dirección
opuesta. Por consiguiente, las arterias y las venas se hallaban unidas mediante
una red de vasos llamados capilares.

9. HISTORIA DE LA MICROSCOPIA

10. HISTORIA DE LA MICROSCOPIA

11. HISTORIA DE LA MICROSCOPIA

12. HISTORIA DE LA MICROSCOPIA

13. HISTORIA DE LA MICROSCOPIA

14. HISTORIA DE LA MICROSCOPIA

16. De acuerdo al número de lentes.
• Simples o lupas: Constituidos por un solo
sistema de lentes convergentes, produciendo
una imagen: aumentada, derecha y virtual.
• Compuestos: Aquellos cuya parte óptica
consta de dos sistemas de lentes llamados,
ocular y objetivo. Producen una imagen
aumentada, invertida y virtual.

17. De acuerdo al numero de oculares
que posee:
 Monoculares
 Binoculares
 Tetraoculares
 Multioculares
 Con pantalla visora incorporada

19. A.- Luz visible
- Natural.
- Artificial
Microscopio simple, microscopio óptico compuesto,
microscopio de contraste de fase, microscopio de
interferencia, microscopio de polarización,
microscopio de campo oscuro.
B.- Luz invisible:
Microscopio de rayos x, microscopio de luz
ultravioleta, microscopio electrónico.
De acuerdo a la fuente luminosa

20. MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE
• Necesita un condensador especial de Zernike y una
placa de fase colocada detrás de los lentes objetivos.
• El M.C.F. convierte las diferencias de fases no
detectables a diferencias de amplitud visibles a la retina
humana.
• Utilidad: muestras vivas o sin teñir.

21. MICROSCOPIO DE INTERFERENCIA
• Usa los mismos principios del M.C.F. es preciso y útil en
las determinaciones de densidad.
• Con el se determina la masa seca y los índices de
refracción de células y tejidos.
• El M.I. de Fase de Nomarski, da imágenes
tridimensionales de células y tejidos.

22. MICROSCOPIO DE POLARIZACIÓN
• Sust. Intracelulares Org. Mol PerfectaRayo de Luz
Polarizada Rayo Ordinario y Rayo
Extraordinario=Birrefrigencia.
• Es de campo claro, utiliza un polarizador y un analizador
con la muestra entre ellos.
• Útil para estudiar bandas isotrópicas(I) y
anisotrópicas(A) del músculo y organización estructural
ósea.

23. MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA
• Fuente de radiación ultravioleta.
• Resolución entre 500 y 1500 Aº.
• Lentes de cuarzo.
• La L.U. no es visible al ojo humano y daña la retina y
los especimenes vivosTécnicas Fotográficas.
• Utilidad: microespectrometria como complemento de
estudios histoquímicos.

24. MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
• Luz visible.
• Utiliza filtros.
• Utilidad: técnicas de anticuerpos fluorescentes.

25. MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO
• Es una modificación del microscopio de campo claro.
• Reemplazo del condensador común por uno que
alcance la imagen en ángulo oblicuo.
• Las células y otros elementos tisulares se ven brillantes
en un campo oscuro.
• Permite estudiar especimenes vivos no teñidos.

26. MICROSCOPIO ELECTRONICO DE
TRANSMISION
• Se efectúa un registro permanente de la imagen
resultante, mediante sustitución de una película sensible
a los electrones en lugar de la placa fluorescente y
producción de un negativo= fotomicrografía en blanco y
negro.

27. MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDO
• Brinda una imagen tridimensional del objeto que se está
viendo.
• La imagen se puede volver permanente mediante
fotografía o por digitalización para guardar en un disco
de computadora.

28. Contribución de Humberto Fernández-Morán
a la Microscopía Electrónica
1.- Introduce el concepto de Crio-ultramicrotomia.
2.- Introduce la Cuchilla de Diamante.
3.- Introduce la aplicacion de la cuchilla de diamante para el seccionamiento
ultrafino de materiales biologicos y de metales.
4.- Introduce su ultramicrotomo diseñado especialmente para su cuchilla de
diamante.
5.- Introduce la crio-fijacion ultrarapida con helio II.
6.- Introduce el metodo de substitucion bajo congelamiento en microscopia
electronica.
7.- Desarrolla filamentos de punta y de cristal unico para proveer microhaz
coherente para la obtencion de micrografias de baja dosis electronica
disminuyendo el dano por irradiacion electronica.
8.- Introduce el concepto de crio-microscopia electronica: la necesidad de
observar las muestras congeladas-hidratadas.
9.- Introduce el crio-microscopio electronico.
10.-Introduce el uso de lentes superconductoras a temperatura de helio liquido en
microscopios electronicos
11.-Introduce el portaespecimen de nitrogeno y el de helio liquido.
12.-Introduce el crio-ultramicrotomo a temperatura de helio liquido.

29. MICROSCOPIO DE BARRIDO CONFOCAL
Utiliza métodos electrónicos de imagen que permiten
enfocar un plano escogido de una muestra fina,
eliminando la luz que proviene de las zonas fuera de
foco, superiores e inferiores a este plano obteniéndose
imagen nítida de una fina sección óptica series
de secciones ópticas de este tipo obtenidas a diferentes
profundidades (archivadas en un ordenador) Imagen
tridimensional detallada de secciones del interior de
una estructura intacta.

31. Parte Mecánica:
• Pie.
• Columna - pilar.
• Tubo.
• Revolver.
• Platina.
• Sub-Platina.
• Tornillo macrometrico.
• Tornillo micrometrico.
• Escala graduada.
Parte Óptica:
• Objetivos
• Oculares
• Aparato de Iluminación

34. Parte Óptica
• OBJETIVOS

36. F F
Clasificación de los Lentes
Tipos de Lentes
De acuerdo al comportamiento de los Rayos de luz que la atraviesan:
• Lentes Convergentes ( Positivas o de Aumento)
• Lentes Divergentes (Negativas o de Reducción)
Divergente
Convergente

37. Clasificación de los Lentes
De acuerdo a su forma
Biconvexa Plano Convexa Cóncavo -Convexa
Bicóncava Plano-Cóncava Convexa-Cóncava
Convergentes
Divergentes

38. Un rayo luminoso choca contra una superficie
pulimentada, y es rechazado fuera de ella,
siendo el ángulo de reflexión igual al ángulo de
incidencia.

39. N
RI RR
i r
Superficie
R
S
Rayo Reflejado
Espejo Plano
P
Q
Reflexión de la Luz

41. N
RI
RR
Menos Denso
Mas Denso
i
r
N
RI
RR
Mas Denso
Menos Denso
i
r
Elementos de la Refracción
1.- Rayo Incidente (RI)
2.- Rayo Refractado (RR)
3.- Angulo de Incidencia (i)
4.- Angulo de Refracción (r)
5.- Normal (N)

42. Aberraciones:
Aberración de Esfericidad
a
n
m
b
d
e
c
a`
b`
c`
d`
e`
Corrección de la Aberración de Esfericidad
a
Lentes acopladas de distinto
Indice de Refracción
Funciona: Lente Simple
convergente Aplanática sin
AE
F
b
d
e
c
a`
b`
c`
d`
e`

43. Aberración Cromática
Luz Blanca
Luz Blanca
a
a` b`
b
A B
Corrección de la Aberración Cromática
Se utilizan lentes compuestas de 2 cristales de diferente clase:
Crown I.R.: Semejante
Flint Poder Dispersivo: Diferente
Una lente poco Divergente de Flint-Glass ( Silicato de K y Pb de alto poder
Dispersivo, acoplada a una Convergente de Crown-Glass (Silicato de K y Ca),
recompone la luz descompuesta por ésta, sin anular su efecto Convergente
Objetivos Acromáticos

44. A.- De acuerdo al sistema de lentes que los constituyen:
•Acromáticos
•Apocromáticos
•Semi apocromáticos
•Mono-Cromáticos
•Aplanáticos,
B.- De acuerdo al uso:
•Secos.
•De inmersión.(agua n=1.33, Aceite n=1.515, monobromuro
de naftaleno n=1.66).
•De corrección

46. Descripción:
- Lente Inferior.
- Lente Superior.
Clasificación de los oculares:
- De Huyghens o negativos.
- De Ramsden o positivos.
- De Compensación.
- Aplanáticos, ortoscópicos y periscopicos

47. Espejo
Condensador
- De ABBE.
- Acromático.
Diafragma o Iris.

49. • Central.
• Oblicua.
• De campo oscuro:
- Diafragma para campo oscuro.
- Condensadores para campo oscuro.

50. •Imagen del ocular: Aumentada, virtual y derecha.
•Imagen del objetivo: Aumentada, real e invertida.
• Imagen definitiva del microscopio óptico compuesto:
Aumentada, virtual e invertida.
• Imagen del Microscopio simple:
Aumentada, virtual y derecha.

51. • ABERTURA NUMERICA
Capacidad del objetivo de utilizar un mayor o
menor número de rayos luminosos en la
formación de la imagen del microscopio.
• ÁNGULO DE ABERTURA
Ángulo limitado por los rayos más periféricos
que penetran en el sistema óptico y
contribuyen a formar la imagen de un punto
cualquiera del objeto.

52. • PODER DE DEFINICIÓN .
Es la capacidad del objetivo de formar imágenes claras,
de contornos nítidos.
• PODER DE RESOLUCIÓN.
Es la facultad del objetivo de distinguir los más finos
detalles de estructura y ligeros contrastes de índice
de refracción.

53. • PODER DE PENETRACION.
Propiedad del objetivo de permitir observar varios
planos del preparado con una misma posición de
enfoque.
• DISTANCIA FOCAL.
Distancia entre el foco y el centro de la lente del
objetivo.

54. • DISTANCIA FRONTAL
Distancia existente entre la lente frontal del objetivo y el
preparado enfocado.
• AUMENTO PROPIO
Relación existente entre el tamaño real del objeto y el
de la imagen que produce el objetivo.

55. •Pupila de emergencia.
Circulo luminoso formado por la
concurrencia en ese plano de todos los rayos
procedentes de la imagen del microscopio.
• Distancia normal de proyección.
Distancia entre la pupila de emergencia y el
plano donde se forma la imagen
microscópica definitiva.
•Campo real.
Superficie del preparado que se abarca en
la observación microscópica, sin desplazar el
portaobjeto.

56. FUNDAMENTOS BASICOS DE LA MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA
MICROSCOPIO ELECTRÓNICO
Es un instrumento utilizado para estudios ultraestructurales, tanto
de muestras biológicas como de materiales, el cual permite resolver
con mayor capacidad que cualquier otro sistema óptico, dos puntos
que se encuentran muy cercanos uno del otro.

57. OBSERVACION AL MICROSCOPIO ELECTRONICO DE TRANSMISION
PHILLIPS EM-208 JEOL JEM-1010

58. TECNICA LIMITES RESOLUCION
Ojo humano Retina 2.000.000 Å
Microscopio óptico Difracción de la luz 2000 Å
Microscopio Electrónico Scanning
Difracción de los
electrones
20 Å
Microscopio Electrónico de Transmisión
Difracción de los
electrones
10 Å
Microscopio de ionización de campo Tamaño atómico 3 Å
El poder de resolución
del ojo humano es de
0,2 mm es decir que
para ver dos objetos
separados estos deben
estar como mínimo a
esa distancia.
RESOLUCION

59. MICROSCOPIO ELECTRONICO DE TRANSMISION

60. ESTRUCTURA DE LA COLUMNA DE UN MICROSCOPIO

61. ESTRUCTURA DE LA COLUMNA DE UN MICROSCOPIO
ELECTRONICO DE TRANSMISION

62. ESTRUCTURA DE LA COLUMNA DE UN MICROSCOPIO
ELECTRONICO DE TRANSMISION

63. SISTEMAS ADICIONALES DE UN MICROSCOPIO ELECTRONICO
DE TRANSMISION
SISTEMA DE EVACUACION
BOMBA MECANICA
BOMBA DIFUSORA DE ACEITE

64. SISTEMAS ADICIONALES DE UN MICROSCOPIO ELECTRONICO
DE TRANSMISION
SISTEMA DE OBSERVACION Y REGISTRO DE IMAGENES
SISTEMA DE LA FUENTE DE PODER

65. Óptico Compuesto Electrónico
Luz Visible Invisible
Lentes + Convergentes Electromagnéticas
Se Observa Ocular Pantalla Fluorescente
Fuente de Luz Natural o Artificial Haz de Electrones
Tubo No está al vacío Está al vacío
Fuente de Poder No Tiene Si Tiene

67. HISTORIA DE LA MICROSCOPIA

68. MICROSCOPIA
Microscopio Óptico

69. MICROSCOPIA
• Microscopio Electrónico de Transmisión.

70. MICROSCOPIA
• Microscopio Electrónico de Barrido

71. MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDO

73. EJEMPLO: MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDO
MUESTRA

79. EJEMPLO: MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDO

90. Microscopio Óptico
Microscopio Electrónico de
Transmisión
Microscopio Electrónico de Barrido
L I N F O C I T O S
IMAGENES SEGUN EL TIPO DE MICROSCOPIO

91. Microscopio Electrónico de
Transmisión
Microscopio Electrónico de Barrido
G L Ó B U L O S R O J O S
IMAGENES SEGUN EL TIPO DE MICROSCOPIO
Microscopio Óptico