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XVIII SIMPOSIO ANUAL

Diagnóstico en
FAUNA SILVESTRE
Christian.Gortazar@uclm.es
EU FP7 Health

EU FP7 EMIDA ERA-NET

EU FP7 KBBE

Collaborating institutions
-

EU consortia
Oklahoma State Univ.
EBD – CSIC, Doñana
Univ. Zaragoza
SERIDA
CReSA
SeFas
(…)

Industrial partners
-

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Vacunek
(…)

Government agencies
-

Ministerio de Agricultura, Alimentación
y Medio Ambiente
(…)
SaBio: Model hosts, vectors & pathogens
Estructura de la
presentación
 Fauna silvestre y enfermedades
compartidas

 Peculiaridades del diagnóstico en
fauna silvestre
 Ejemplos actuales
1. MERS-CoV y lengua azul
2. Tuberculosis y Escherichia coli
3. Sarna y leishmaniosis

 Conclusiones
Infecciones compartidas

Zoonosis

Reservoir
Spill back

Spill over
Effects on
3rd species
Cambios demográficos…
Enfermedades compartidas

The larger the
difference in
prevalence, the
higher the risk

AV antibody
seroprevalence,
F. Ruiz-Fons
La frontera sur
•
•
•
•

Onset at >30 kg
Seasonal
Highly adaptable
200% annual increase!
Enfermedades compartidas

1

Boadella et al. 2011 EJWR
Estructura de la
presentación
 Fauna silvestre y enfermedades
compartidas

 Peculiaridades del diagnóstico en
fauna silvestre
 Ejemplos actuales
1. MERS-CoV y lengua azul
2. Tuberculosis y Escherichia coli
3. Sarna y leishmaniosis

 Conclusiones
Diagnóstico en fauna silvestre
•

Diversidad de especies

•

Muestras limitadas en
volumen y número

•

Complejidad logística

•

Calidad frecuentemente pobre
(hemólisis, congelación…)

•

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otras no validadas
Diversidad de especies
Diversidad de especies
Complejidad logística
Detección del antígeno
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•
•
•
•
•
•

ELISA > SN… – pero:
Ojo con los conjugados
Interpretación más severa de puntos de corte
Registrar calidad (hemólisis) antes de congelar
Alicuotar para evitar múltiples descongelaciones
Registrar el número de descongelaciones de cada alícuota
Estructura de la
presentación
 Fauna silvestre y enfermedades
compartidas

 Peculiaridades del diagnóstico en
fauna silvestre
 Ejemplos actuales
1. MERS-CoV y lengua azul
2. Tuberculosis y Escherichia coli
3. Sarna y leishmaniosis

 Conclusiones
Diagnóstico en fauna: MERS-CoV
•

Abril 2012 primeros casos, Arabia Saudí

•

Hasta 11/11/2013 - 153 casos confirmados, 64 fatales
(42%).

•

Casos en Penísula Arábiga, y casos importados en
varios países, recientemente España

•

Origen del virus probablemente murciélagos
vespertiliónidos

•

¿Hospedador intermediario?
Diagnóstico en fauna: MERS-CoV

Reusken et al.
Diagnóstico en fauna: Lengua Azul

1

Ruiz-Fons et al. 2008 & submitted, Falconi et al. 2011
Diagnóstico en fauna: Lengua Azul

1

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Diagnóstico en fauna: Lengua Azul
Diagnóstico en fauna: Lengua Azul

DIFICULTADES DIAGNÓSTICO

•
•

Interpretación PCR

•

Ruiz-Fons et al. submitted

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•

1

Anticuerpos maternales

(…)
Diagnóstico en fauna: TB
•
•
•
•
•

Cultivo y tipado  Epidemiología molecular
Patología  Epidemiología y vigilancia sanitaria
Serología (suidos)  Epidemiología y control
Testado en vivo  Control explotaciones y traslados
IDEALMENTE: combinar varias herramientas
Diagnóstico en fauna: TB
•
•
•
•

Onset at >30 kg
Seasonal
Highly adaptable
200% annual increase!

• M. bovis infection
widespread, expanding.
• Up to >50% confirmed
infection in Mediterranean
habitats

Mean 50%

1

Boadella et al. 2011 EcoHealth
Diagnóstico en fauna: TB

Distribution of the
tested wild boar:
green square=
seronegative wild
boar; red square =
seropositive wild
boar when using
the 0.2 cut-off.
Richomme C, Boadella M, Courcoul A, Durand B, et al. (2013) Exposure of Wild Boar to Mycobacterium tuberculosis Complex in France since 2000 Is Consistent with the
Distribution of Bovine Tuberculosis Outbreaks in Cattle. PLoS ONE 8(10): e77842. doi:10.1371/journal.pone.0077842
http://www.plosone.org/article/info:doi/10.1371/journal.pone.0077842
Diagnóstico en fauna: E. coli

Ishii and Sadowsky, 2008
Karch et al., 2011
Diagnóstico en fauna: E. coli

Germany:

Spain:

Vietnam:

a n t i g o ne
STUDY AREA

Coto del Rey (CR)

Biological Reserve (BR)

Marismillas (MA)

Atlantic ocean
Cattle share the park with wildlife
Wild boar (1700)

Cattle (1200)

Fallow deer (800)
No people…
septic tanks!

Red deer (600)

Iberian lynx (<50)

Data: EBD-CSIC, R. Soriguer
Diagnóstico en fauna: E. coli
Upstream village
Water
flow

9 water samples
5 septic tanks
148 red deer, 92 wild boar
87 cattle

a n t i g o ne
Diagnóstico en fauna: E. coli

• Gradiente N-S
• Homogenización biótica1

a n t i g o ne
1.- Olden et al. 2004
Diagnóstico en fauna: Sarna

1

Oleaga et al. 2012
Diagnóstico en fauna: Sarna
Diagnóstico en fauna: Sarna

Extracción ácaros y análisis genéticos (microsatélites)

1

Oleaga et al. 2013
Diagnóstico en fauna: Leishmania
• Fuenlabrada, Madrid: > 260 human cases1
• Linked to hunting ban  Iberian hare increase
• Hares found to be competent infecting
Phlebotomus perniciosus with L. infantum2
• L. infantum DNA is prevalent in hares: 44%3
• Leishmania-positive hares all over Spain3!

Are we ready to detect
new EID´s?
And take action?

1. http://www.promedmail.org/es; 2. Molina et al. 2012 VetPar; 3. Ruiz-Fons et al. 2013 EuroSurv
Estructura de la
presentación
 Fauna silvestre y enfermedades
compartidas

 Peculiaridades del diagnóstico en
fauna silvestre
 Ejemplos actuales
1. MERS-CoV y lengua azul
2. Tuberculosis y Escherichia coli
3. Sarna y leishmaniosis

 Conclusiones
Mensajes a recordar
Fauna diversa – Patógenos diversos

(Colaboración internacional e interdisciplinar)

Ojo a la interpretación de los resultados
(ej. resultados ELISA, SN y PCR en LA)

Combinar técnicas complementarias
(Y adaptarlas a nuestras necesidades)
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Incorporar técnicas de otros campos
(Ecología; Genética; …)

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Boadella et al. 2011 EJWR
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Diagóstico en fauna silvestre

  • 1. XVIII SIMPOSIO ANUAL Diagnóstico en FAUNA SILVESTRE Christian.Gortazar@uclm.es
  • 2. EU FP7 Health EU FP7 EMIDA ERA-NET EU FP7 KBBE Collaborating institutions - EU consortia Oklahoma State Univ. EBD – CSIC, Doñana Univ. Zaragoza SERIDA CReSA SeFas (…) Industrial partners - Ingenasa Vacunek (…) Government agencies - Ministerio de Agricultura, Alimentación y Medio Ambiente (…)
  • 3. SaBio: Model hosts, vectors & pathogens
  • 4. Estructura de la presentación  Fauna silvestre y enfermedades compartidas  Peculiaridades del diagnóstico en fauna silvestre  Ejemplos actuales 1. MERS-CoV y lengua azul 2. Tuberculosis y Escherichia coli 3. Sarna y leishmaniosis  Conclusiones
  • 7. Enfermedades compartidas The larger the difference in prevalence, the higher the risk AV antibody seroprevalence, F. Ruiz-Fons
  • 8. La frontera sur • • • • Onset at >30 kg Seasonal Highly adaptable 200% annual increase!
  • 10. Estructura de la presentación  Fauna silvestre y enfermedades compartidas  Peculiaridades del diagnóstico en fauna silvestre  Ejemplos actuales 1. MERS-CoV y lengua azul 2. Tuberculosis y Escherichia coli 3. Sarna y leishmaniosis  Conclusiones
  • 11. Diagnóstico en fauna silvestre • Diversidad de especies • Muestras limitadas en volumen y número • Complejidad logística • Calidad frecuentemente pobre (hemólisis, congelación…) • Algunas técnicas no viables, otras no validadas
  • 16. Suero: volumen y calidad de las muestras • • • • • • ELISA > SN… – pero: Ojo con los conjugados Interpretación más severa de puntos de corte Registrar calidad (hemólisis) antes de congelar Alicuotar para evitar múltiples descongelaciones Registrar el número de descongelaciones de cada alícuota
  • 17. Estructura de la presentación  Fauna silvestre y enfermedades compartidas  Peculiaridades del diagnóstico en fauna silvestre  Ejemplos actuales 1. MERS-CoV y lengua azul 2. Tuberculosis y Escherichia coli 3. Sarna y leishmaniosis  Conclusiones
  • 18. Diagnóstico en fauna: MERS-CoV • Abril 2012 primeros casos, Arabia Saudí • Hasta 11/11/2013 - 153 casos confirmados, 64 fatales (42%). • Casos en Penísula Arábiga, y casos importados en varios países, recientemente España • Origen del virus probablemente murciélagos vespertiliónidos • ¿Hospedador intermediario?
  • 19. Diagnóstico en fauna: MERS-CoV Reusken et al.
  • 20. Diagnóstico en fauna: Lengua Azul 1 Ruiz-Fons et al. 2008 & submitted, Falconi et al. 2011
  • 21. Diagnóstico en fauna: Lengua Azul 1 López-Olvera et al. 2010
  • 22. Diagnóstico en fauna: Lengua Azul
  • 23. Diagnóstico en fauna: Lengua Azul DIFICULTADES DIAGNÓSTICO • • Interpretación PCR • Ruiz-Fons et al. submitted Interpretación SN • 1 Anticuerpos maternales (…)
  • 24. Diagnóstico en fauna: TB • • • • • Cultivo y tipado  Epidemiología molecular Patología  Epidemiología y vigilancia sanitaria Serología (suidos)  Epidemiología y control Testado en vivo  Control explotaciones y traslados IDEALMENTE: combinar varias herramientas
  • 25. Diagnóstico en fauna: TB • • • • Onset at >30 kg Seasonal Highly adaptable 200% annual increase! • M. bovis infection widespread, expanding. • Up to >50% confirmed infection in Mediterranean habitats Mean 50% 1 Boadella et al. 2011 EcoHealth
  • 26. Diagnóstico en fauna: TB Distribution of the tested wild boar: green square= seronegative wild boar; red square = seropositive wild boar when using the 0.2 cut-off. Richomme C, Boadella M, Courcoul A, Durand B, et al. (2013) Exposure of Wild Boar to Mycobacterium tuberculosis Complex in France since 2000 Is Consistent with the Distribution of Bovine Tuberculosis Outbreaks in Cattle. PLoS ONE 8(10): e77842. doi:10.1371/journal.pone.0077842 http://www.plosone.org/article/info:doi/10.1371/journal.pone.0077842
  • 27. Diagnóstico en fauna: E. coli Ishii and Sadowsky, 2008 Karch et al., 2011
  • 28. Diagnóstico en fauna: E. coli Germany: Spain: Vietnam: a n t i g o ne
  • 29. STUDY AREA Coto del Rey (CR) Biological Reserve (BR) Marismillas (MA) Atlantic ocean
  • 30. Cattle share the park with wildlife Wild boar (1700) Cattle (1200) Fallow deer (800) No people… septic tanks! Red deer (600) Iberian lynx (<50) Data: EBD-CSIC, R. Soriguer
  • 31. Diagnóstico en fauna: E. coli Upstream village Water flow 9 water samples 5 septic tanks 148 red deer, 92 wild boar 87 cattle a n t i g o ne
  • 32. Diagnóstico en fauna: E. coli • Gradiente N-S • Homogenización biótica1 a n t i g o ne 1.- Olden et al. 2004
  • 33. Diagnóstico en fauna: Sarna 1 Oleaga et al. 2012
  • 35. Diagnóstico en fauna: Sarna Extracción ácaros y análisis genéticos (microsatélites) 1 Oleaga et al. 2013
  • 36. Diagnóstico en fauna: Leishmania • Fuenlabrada, Madrid: > 260 human cases1 • Linked to hunting ban  Iberian hare increase • Hares found to be competent infecting Phlebotomus perniciosus with L. infantum2 • L. infantum DNA is prevalent in hares: 44%3 • Leishmania-positive hares all over Spain3! Are we ready to detect new EID´s? And take action? 1. http://www.promedmail.org/es; 2. Molina et al. 2012 VetPar; 3. Ruiz-Fons et al. 2013 EuroSurv
  • 37. Estructura de la presentación  Fauna silvestre y enfermedades compartidas  Peculiaridades del diagnóstico en fauna silvestre  Ejemplos actuales 1. MERS-CoV y lengua azul 2. Tuberculosis y Escherichia coli 3. Sarna y leishmaniosis  Conclusiones
  • 38. Mensajes a recordar Fauna diversa – Patógenos diversos (Colaboración internacional e interdisciplinar) Ojo a la interpretación de los resultados (ej. resultados ELISA, SN y PCR en LA) Combinar técnicas complementarias (Y adaptarlas a nuestras necesidades)
  • 39. Mensajes a recordar Peculiaridades del muestreo en fauna (Muestras valiosas, escasas, calidad pobre) Incorporar técnicas de otros campos (Ecología; Genética; …) Esperar lo inesperado (Pero estar preparados: vigilancia)