BIOLOGÍA

1. Reacción en
cadena de la
Polimerasa
MARIA FERNANDA YARICAHUA
4B

2. Datos
Nombres
Apellidos
Maria
Fernanda
Yaricahua
Mendoza
Grado
Sección
4 ¨B¨
Curso
Biología
Profesores
01
- Felix Alvarez
- Mary Junchaya
02 03 04

3. Propósito
Explica, en base a fuentes
científicas,la reacción en
cadena de la polimerasa ,
desde un punto de vista
objetivo y subjetivo.

4. ¿Qué es?
Es mejor llamado como PCR o ¨fotocopiado
molecular¨ la reacción en cadena de la polimerasa es
una técnica rápida y económica utilizada para
"amplificar" - copiar - pequeños segmentos de ADN.
Debido a que se necesitan considerables cantidades
de una muestra de ADN para análisis moleculares y
genéticos, los estudios de segmentos aislados de ADN
son casi imposibles sin la amplificación por RCP.

6. Fundamento
PCR
01.

7. El elemento principal en la PCR es el
ADN, cuya naturaleza química ofrece
ventajas para su manipulación. En la
PCR, el templado son las cadenas de
ADN que se separan y funcionan
como molde para que la enzima
sintetice las nuevas cadenas que
llevan la secuencia blanco de interés.
¿Qué elementos
químicos se necesitan?

8. ¿Cómo
funciona?

9. Pasos
Las cadenas de ADN son
calentadas y separadas a una
temperatura de 95 °C durante 20-
30 segundos; el tiempo depende
de la secuencia del templado, si
la cantidad de G-C es alta, se
necesita más tiempo para romper
sus uniones debido a que el
apareamiento de estas bases está
formado por tres enlaces.
Los primers se alinean al
extremo 3’ del templado
previamente separado e
hibridan con su secuencia
complementaria. Para que se
forme el complejo templado-
primers, es importante que
la temperatura de
hibridación o temperatura
melting sea la óptima; ésta
generalmente oscila entre
50-60 °C.
La Taq polimerasa actúa
sobre el complejo
templado-primers y
empieza su función
catalítica a una velocidad
muy rápida, para crear
las cadenas completas de
ADN.
Desnaturalización Hibridación Extensión

11. TIPOS

12. PCR con transcriptasa
inversa (RT-PCR) PCR anidada
Es una variante de la PCR en la
que usamos ARN como molde
inicial en vez de ADN, y emplea una
transcriptasa inversa (como Tth)
para realizar la síntesis de un ADN
complementario al ARN (ADNc). De
esta forma, el desarrollo inicial de
una RT-PCR sería:
● 1.er paso:
retrotranscripción a
partir del ARN.
● 2.º paso: amplificación a
partir de la primera hebra
de ADNc.
● 3.er paso: PCR estándar.
Técnica muy sensible en la que el
producto de una amplificación es
utilizado como molde para
realizar una segunda
amplificación con cebadores que
se ubican dentro de la primera
secuencia amplificada. Este tipo
de PCR tiene la ventaja de
brindar alta sensibilidad y
especificidad.

13. PCR de extensión solapada
Se introducen cambios de secuencia dentro de
fragmentos clonados de ADN. Se requieren 2
cebadores (primers) mutagénicos y otros 2. Se
amplifica un fragmento 5' y un fragmento 3' que se
solapan portando ambos la mutación. Se usan los
productos en otra reacción para producir el ADN
mutado de longitud completa.

14. PCR in situ
Consiste en una reacción de PCR en secciones
histológicas o células, donde los productos generados
pueden visualizarse en el sitio de amplificación. Es
realizada sobre preparaciones fijas en un portaobjetos.
En la técnica de PCR in situ se realiza una primera
amplificación de ADN blanco y luego detección
mediante hibridación in situ convencional con sondas
de ADN/ARN. De esta manera pueden detectarse
cantidades pequeñísimas de genoma. Esta tecnología
es de gran alcance en la capacidad de amplificar
específicamente una población de secuencias de menor
representación.

15. USOS Y/O
APLICACIONES

16. Investigación
Una aplicación de la PCR es la clonación de secuencias de
ADN en vectores, como pueden ser los plásmidos. Para
ello, se emplean cebadores que contienen en su extremo 5'
una corta secuencia que permite la interacción posterior
con otra complementaria situada en el vector de clonación
a emplear. Otro método asimilable a esta vía es el empleo
de la recombinación dirigida; esto es, se adapta al 5' de los
cebadores una secuencia que faculta a una recombinasa
la recombinación dirigida con un vector dado.

17. Medicina
- El diagnóstico de
enfermedades
hereditarias presentes
en el genoma.
- Permite el genotipar la
especie o especies que
provocan un determinado
cuadro infeccioso: para
ello, se amplifica una zona
del genoma bacteriano.

18. BIBLIOGRAFÍAS
- https://www.genome.gov/es/about-
genomics/fact-sheets/Reaccion-en-cadena-de-
la-polimerasa
- https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-
2013/ir132d.pdf
- https://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_
en_cadena_de_la_polimerasa#Tipos_de_PCR

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