La empresa castellonense de análisis de agua IPROMA S.L. presentó en el VI Congreso Nacional de Legionella, celebrado en Terrassa los días 11 y 12 de Febrero, el estudio realizado con distintas muestras de agua (agua residual regenerada, fuentes ornamentales, torres de refrigeración o baldeo de calles), para la detección de Legionella mediante técnicas rápidas, cada vez más demandadas hoy en día. Concretamente se utilizó captura inmunomagnética selectiva de la bacteria mediante el uso de Cleanpid® Legionella Fast Purification, antes de proceder a la extracción de su DNA. Cleanpid® ha sido desarrollado por BIÓTICA S.L. compañía ubicada en el Parque Científico y Tecnológico de la Universitat Jaume I de Castellón (Espaitec). Los resultados finales demuestran que el uso de este método resulta satisfactorio en la purificación de las muestras antes de proceder a la extracción de DNA y su posterior análisis por PCR (Reacción en cadena de la polimerasa). También, la facilidad de manejo y el bajo coste económico sugiere su uso en lugar de los kits de purificación habituales. De esta manera, Iproma, se desmarca de nuevo aplicando tecnologías pioneras que mejoran la detección de patógenos como la Legionella anticipando posibles focos de infección en instalaciones. http://bioti.ca/1w05eiy

1. USO DE LA CAPTURA INMUNOMAGNÉTICA
EN LA ELIMINACIÓN DE INTERFERENCIAS
EN LA DETECCIÓN DE Legionella sp POREN LA DETECCIÓN DE Legionella sp POR
PCR Y PMA-PCR.
Inmaculada Solís 1, Marta Gallén 1,
Miguel Martínez2, Guillermo Rodríguez 2
1 Iproma, S.L., 2Biótica, S.L.
1
VI Congreso Nacional Legionella y Calidad Ambiental. Terrasa 2015

2. PROBLEMA
• Resultados no concluyentes en PCR debido a la
presencia de inhibidores en las muestras reales.
• Muestras de agua regenerada, torre de refrigeración
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2
y fuentes ornamentales.
SOLUCIÓN
• Separación inmunomagnética (SIM)

3. CLEANPID
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4. VI Congreso Nacional Legionella y Calidad Ambiental. Terrasa 2015
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5. VI Congreso Nacional Legionella y Calidad Ambiental. Terrasa 2015
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6. VI Congreso Nacional Legionella y Calidad Ambiental. Terrasa 2015
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7. VI Congreso Nacional Legionella y Calidad Ambiental. Terrasa 2015
Esquema de trabajo
7Proceso de compras
RESULTADOSRESULTADOSRESULTADOSRESULTADOS

8. Referencia RECUENTO PCR
MUESTRA UFC / mL Ct
1 a 26400 38,15
1 b 26600 31,29
2 a 27400 30,59
2 b 28000 29,6
3 a 29000 Inhibición
3 b 34000 Inhibición
4 a 34000 36,74
4 b 29000 39,88
Referencia RECUENTO PCR
MUESTRA UFC / mL Ct
10 a 27000 36,33
10 b 30000 37,85
11 a 19000 36,19
11 b 21000 35,05
12 a 9700 31,79
12 b 11000 40,04
13 a 5400 34,92
13 b 6100 36,25
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8
4 b 29000 39,88
5 a 30000 37,75
5 b 27000 35,59
6 a 34000 29,38
6 b 32000 33,33
7 a 25000 27,89
7 b 27000 34,46
8 a 16000 25,86
8 b 14000 37,11
9 a 0 34,64
9 b 0 26,28
10 a 27000 36,33
10 b 30000 37,85
14 a 18000 26,51
14 b 22000 31,89
15 a 38000 Inhibición
15 b 41000 17,77
16 a 3200 37,49
16 b 2900 Inhibición
17 a 5700 26,36
17 b 6600 38,56
18 a 3400 34,23
18 b 3700 32,7
19 a 0 35,06
19 b 0 32,86
20 a 3200 Inhibición
20 b 3900 Negativa

9. PCR del
sobrenadante
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9
sobrenadante
RESULTADOS

10. Referencia PCR
MUESTRA Ct
3 a Inhibición
Inhibición
Inhibición
3 b Inhibición
Inhibición
Inhibición
9 a 34,64
Referencia PCR
MUESTRA Ct
16 a 37,49
22,70
16 b Inhibición
22,28
20 a Inhibición
Negativa
20 b Negativa
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10
9 a 34,64
41,47
19,57
9 b 26,28
37,77
19,21
15 a Inhibición
Negativa
26,97
15 b 17,77
Inhibición
26,33
20 b Negativa
Negativa
• Mejora de la detección.
• Aumento de la repetibilidad

11. VI Congreso Nacional Legionella y Calidad Ambiental. Terrasa 2015
11

12. VI Congreso Nacional Legionella y Calidad Ambiental. Terrasa 2015
MUESTRA
ORIGINAL
FILTRACIÓN
MUESTRA
PCR
12
MUESTRA
CONCENTRADA PCR, con
separación
de PM
62 muestras concentrados reales + Inoculo

13. VI Congreso Nacional Legionella y Calidad Ambiental. Terrasa 2015
62 muestras reales
13
12%12%12%12% 3%3%3%3%
SIM
Muestra nº 6
Muestra nº 16

14. VI Congreso Nacional Legionella y Calidad Ambiental. Terrasa 2015
PBS Agua
Inhibición 31,26
Inhibición 31,63
38,24 30,39
Inhibición 31,15
Inhibición 32,2
PCR
PMA - PCR
MUESTRA nº 6
14
Inhibición 32,2
Inhibición 30,18
PMA - PCR
PBS Agua
34,02 35,29
32,23 35,64
31,25 33,21
Inhibición 40,73
Inhibición 41,58
Inhibición > 42
PCR
PMA - PCR
MUESTRA nº 16

15. VI Congreso Nacional Legionella y Calidad Ambiental. Terrasa 2015
Comparativa Cleanpid Qiagen
Manipulación Baja Medio - alta
Instrumental Rack magnético Microcentrífuga
15
Coste material 3.0 – 3.5 euros 4.0 – 4.5 Euros
Interferencias 3% 12%
Repetibilidad SI Variable

16. VI Congreso Nacional Legionella y Calidad Ambiental. Terrasa 2015
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