Inma Solís, Responsable de Microbiología de Laboratorios Iproma, expuso su experiencia en la acreditación del método SIM (Legipid Legionella Fast Detection), pormenorizando estudios y documentos con los que dan respuesta a los requerimientos que plantea ENAC, de manera ordenada y atendiendo a las guías y normativa aplicable.

1. ACREDITACIÓN DE MÉTODO SIM
(Separación Inmuno Magnética) EN
LABORATORIO: Caso Práctico.
Inma Solís

2. Legionella en 1 hora: Técnica SIM. Sevilla, 13 – Junio - 2018
Índice
Introducción
Histórico SIM - Legipid®
Legislación aplicable
Validación – Acreditación
Trabajos realizados

3. 01 Introducción
25 años de experiencia
I+D+i
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4. 01 Introducción
NECESIDAD: satisfacción cliente
Rapidez: agilidad en la toma de decisiones
Fiabilidad: técnica sensible, buena recuperación, informe de validación
Bajo coste: reactivo + tiempo de ensayo + equipamiento + entrenamiento
Acreditable: según ISO 17025 por ENAC
Adecuado al fin previsto
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5. 01 Introducción
NECESIDAD: fin previsto
Objetivo de la
técnica
Aislamiento de la
bacteria
Identificación de la
bacteria aislada
Detección rápida del
nivel en la muestra
ambiental
Target de la
determinación
Célula
cultivable
Ácidos nucleicos libres
o extraídos en células
viables y no viables
Célula intacta libre
(potencialmente
infectiva)
Estrategia de
detección
Aislar y CRECER la
bacteria en cultivo
Extraer y AMPLIFICAR
una secuencia génica
Concentrar y
CAPTURAR la célula
libre
Fin previsto
Cumplimiento
legislativo
Epidemiológico:
Confirmar la sospecha
Preventivo: evitar el
nivel infectivo
(contención primaria)
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6. 02 Histórico SIM – Legipid ®
 Año 2009 – Validación Kit
 Año 2010 – Ejercicio Intercolaborativo
 Año 2011 – Auditoría ENAC Cualitativo
 Año 2011 – Certificación AOAC
 Año 2013 – RD piscinas (RD 742/2013)
 Año 2015 – NT 32 ENAC. Método normalizado.
 Año 2017 – UNE 100030:2017
 Año 2017 - Auditoría ENAC Cuantitativo
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7. 02 Histórico SIM – Legipid ®
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0
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
Año 2010 Año 2011 Año 2012 Año 2013 Año 2014 Año 2015 Año 2016 Año 2017
L.pneu 704 840 236 385 754 776 861 4907
L.sp 663 1556 1885 3083 4619 5179 5352 10253
Nºmuestrasanalizadas
Evolución muestras Legionella

8. 02
SIM: LEGIPID
Histórico SIM – Legipid ®
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103 104
102 102

9. 03 Legislación aplicable
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10. 03
UNE-ISO
11731
OTRAS
TÉCNICAS
El laboratorio debe demostrar
conformidad con requisitos
técnicos UNE-EN ISO/IEC 17025
Los ensayos de Legionella spp.
Deben hacerse en base a la
versión en vigor de la norma
UNE-ISO 11731 o
Por técnica que presente un
protocolo validado por
organismo competente de
certificación nacional o
internacional (PCR, método
inmunomagnético, etc.)
Legislación aplicable
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11. 03
Técnicas Rápidas de Laboratorio en Legionella spp. Talavera de la Reina. Febrero-2018
Método técnicamente válido y adecuado para el
uso que se le va a dar
Validación disponible (método publicado):
Evidencias suficientes que demuestren el
cumplimiento de los requisitos particulares
para cada uso específico previsto
(clausula 5.4.5.1 de UNE-EN ISO/IEC
17025)
Norma UNE-ISO
11731
(versión en vigor)
Con protocolo validado por
organismo competente de
certificación
Técnica
alternativa
Sin protocolo validado por
organismo
competente de certificación
Validación no disponible o
incompleta:
Completar la validación de
manera interna (dedicación
intensiva de recursos)
Norma UNE 100030
Técnica de
ensayo
Conjunto de medios y productos suficiente
para un determinado fin, de tal forma que su
presentación comercial constituye un
método de análisis para su aplicación
directa
Laboratorios acreditados según Norma UNE-EN
ISO/IEC 17025
(cláusula 5.4 )
Confirmar que puede aplicar correctamente la
técnica
ISO
AOAC
AFNOR
MicroVal
NordVal
etc

12. 04 Validación – Acreditación
SIM – LEGIPID ®
Certificado AOAC nº 111101
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13. 04 Validación – Acreditación
Certificado AOAC nº 111101
Validación inicial: 2 laboratorios ISO 17025
Sensibilidad 95,3 %
Especificidad 88,4 %
Falsos positivos 11,6 %
Falsos negativos 4,7 %
Eficiencia 92,4 %
SIM – LEGIPID ®
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14. 04 Validación – Acreditación
SIM – LEGIPID ®
Certificado AOAC nº 111101
Validación inicial: 2 laboratorios ISO 17025
Estudio intercolaborativo 12 laboratorios
2 blancos
2 muestras valor
asignado 2,88 log
3 muestras valor
asignado 3,82 log
2 muestras valor
asignado 2,23 log
95,8 % concordancia 91,7 % concordancia 91,7 % concordancia100 % concordancia
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15. 04 Validación – Acreditación
SIM – LEGIPID ®
Certificado AOAC nº 111101
Validación inicial: 2 laboratorios ISO 17025
Estudio intercolaborativo 12 laboratorios
Estudio inclusividad / exclusividad
64 cepas colección y
ambientales Legionella
NO pneumophila
58 cepas detectadas
(91 % )
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16. 04 Validación – Acreditación
SIM – LEGIPID ®
Recuperación con muestras reales (sin inocular)
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
Natural M1 M2
Ɩ Legipid-Cultivo Ɩ, log CFU
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17. 04 Validación – Acreditación
SIM – LEGIPID ®
Certificado AOAC nº 111101
Validación inicial: 2 laboratorios ISO 17025
Estudio intercolaborativo 12 laboratorios
Estudio inclusividad / exclusividad
Recuperación con muestras reales (sin inocular)
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18. 04 Validación – Acreditación
SIM – LEGIPID ®
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19. 04
Legionella en 1 hora: Técnica SIM. Sevilla, 13 – Junio - 2018
Validación – Acreditación

20. 04
Cuantitativo Cualitativo
Recuperación
Reproducibilidad
Límite de detección
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Validación – Acreditación

21. 04 Validación – Acreditación
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22. 04 Validación – Acreditación
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23. 04
Cuantitativo
Recuperación
Reproducibilidad
100






XR
SR
P
100






xr
XR
R
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Validación – Acreditación

24. 04
Cálculo de Incertidumbre
2222
IrecIrutIrepIcepaI 
medidaII  2(log)exp
I cepa I recuperaciónI rutinaI repetibilidad
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Validación – Acreditación

25. 05 Trabajos realizados
Estudios en duchas y lavapies de playas antes de empezar la
temporada de baño.
Estudios aguas utilizadas en el riego de campos de golf
Estudios en hospitales, hoteles y balnearios
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