Guillermo Rodríguez, Director Científico de la firma Biótica, presentó los beneficios del uso de la tecnología SIM en el campo de la determinación rápida de Legionella. La jornada también presentó un equipo automatizado, fruto de un proyecto europeo del programa Horizonte 2020 (No 726499), integrando todo el proceso de preparación y ensayo de muestra, que hará posible el análisis in situ de Legionella spp en edificios, industrias, piscinas, y otras fuentes de riesgo.

1. Guillermo Rodríguez Albalat
Director de I+D+i
Legipid®Legionella
Fast Detection
cuantificando Legionella spp en
1 hora

2. Bacteria y enfermedad
Legionella
Instalación
Aerosol
Persona
Legionelosis
Montagna, Maria Teresa, et al. "Control and prevention measures for legionellosis in
hospitals: A cross-sectional survey in Italy." Environmental Research 166 (2018): 55-60.
720
hospitales
62 %
> 1000 cfu/L

3. Enfermedad e impacto
- Mortalidad 10-15% (5-30%)
- Hospitalización 10.3 días
- 20300 – 28800 €/paciente
Pierre DM, Baron J, Yu VL, Stout JE. Diagnostic testing for Legionnaires’ disease. Annals of Clinical
Microbiology and Antimicrobials. 2017;16:59.
Farnham A, Alleyne L, Cimini D, Balter S. Legionnaires’ Disease Incidence and Risk Factors, New York, USA,
2002–2011. Emerging Infectious Diseases. 2014;20(11):1795-1802.
Beauté J, on behalf of the European Legionnaires’ Disease Surveillance Network. Legionnaires’ disease in
Europe, 2011 to 2015.Eurosurveillance. 2017;22(27):30566

4. Titular de la
instalación
Profesional de
mantenimiento
Autoridad de
Salud Pública
Paciente y
ciudadano
Salud Pública
Enfermedad e impacto
1151 M€ - EUROPA
367 M€ - EEUU

5. Bacteria y enfermedad

6. Bacteria y enfermedad
Changes on both concentration
and physiological status of
Legionella can occur over short
and unpredictable periods of
time.
Zähringer U. , Knirel YA, Lindner B. et al. The lipopolysaccharide of Legionella pneumophila serogroup 1
(strain Philadelphia 1): chemical structure and biological significance. Prog Clin Biol Res 1995; 392: 113—139
Ragull S, Garcia-Nuñez M, Pedro-Botet ML, et al. Legionella pneumophila in Cooling Towers:
Fluctuations in Counts, Determination of Genetic Variability by Pulsed-Field Gel
Electrophoresis (PFGE), and Persistence of PFGE Patterns. Applied and Environmental
Microbiology. 2007;73(16):5382-5384.
Stout, Janet E, et al. Environmental culturing for Legionella: Can we build a better mouse
trap? American Journal of Infection Control. 2010; 38(5): 341 – 343.
Lp Otras legionelas

7. Viva
VC
Sí
Transiciones
Envoltura
muy
dañada?
Crece
¿?
No
Sí
VBNC
No Muerta
NV
Ruina celularRecuperables
Bacteria y enfermedad

8. Viva
VC
Sí
Transiciones
Envoltura
muy
dañada?
Crece
¿?
No
Sí
VBNC
No Muerta
NV
Ruina celularRecuperables
Infeccioso No infeccioso
Cultivo
SIM
Bacteria y enfermedad

9. • Las matrices ambientales son:
• heterogéneas
• complejas
• cambiantes
• Influyen en la detectabilidad:
•Microbiota
•Interferentes químicos
Bacteria y enfermedad

10. Separación
de la
bacteria
Métodos
rápidos
Métodos
convencionales
Detección Identificación
RIESGO DAÑO
Matriz ambiental
Matriz limpia
Necesidad analítica

11. ESTO ES LA BACTERIA
Los métodos: ventanas de
información
Bacteria e información

12. Métodos

13. 1-2 d
Limitaciones actuales
Muestreo Transporte

14. 10-12 d
Limitaciones actuales
Preparación Cultivo
• Escaso valor preventivo
• Tiempos de incubación largos
• Pobre recuperación
• Intensidad de plaqueo
• Dedicación instrumental alta

15. Anticuerpo
Poliestireno
Magnetita
reconocimiento
anclaje
0.9 μm
Tecnología SIM

16. SIM
Métodos
rápidos
Métodos
convencionales
Detección Identificación
RIESGO DAÑO
Matriz ambiental
Matriz limpia
Tecnología SIM

17. ¿Qué és Legipid®?
• Método rápido para determinar Legionella spp. en
aguas.
• Utiliza partículas magnéticas y anticuerpos contra
Legionella spp.
• Patentado, Validado y Certificado (AOAC-RI)
• Contemplado en la UNE 100030:2017
• Acreditable (ej. ENAC, ACCREDIA, NATA, UKAS…)
Qué es Legipid®

18. • Separación inmunomagnética y enzimoinmunoensayo
Principio del test Legipid®

19. Principio del test Legipid®

20. 20
Útiles para Legipid®

21. Filtración Análisis Resultado
•Captura
•Marcaje
•Colorimetría
•(Prefiltro)
•Filtro membrana
•Frasco de elución
• Visual
•Colorímetro
• UFC eq
Etapas del test Legipid®

22. Es la cantidad de UFC que se esperaría en un cultivo
de la misma muestra ambiental concentrada, en
condiciones de máxima cultivabilidad.
Células capaces de crecer y
accesibles
Sin interferentes
UFC equivalentes
Resultado de Legipid®

23. • Célula contenida
• Célula intacta
• Célula no infectiva
• “Realidad aumentada” del
cultivo
25 vesículas/1 día x (20-100
células)/vesícula x 10 días =
5000-50000 células.
Berk et al. (1998)
Amoeba
Legionella
Legionella no accesible

24. PARTÍCULA
MAGNÉTICA
CÉLULA DE
LEGIONELLA
Legionella libre

25. ALIVE INJURED DEAD
DAMAGEA B C
A B C
FUERZA DE
INTERACCIÓN DAÑO
VIVA DAÑADA MUERTA
Captura de célula intacta
Legionella libre

26. La “caja de herramientas”

27. • Resultados el mismo día
• Detección de viables y VBNC
• Útil incluso en matrices complejas
• Bajo coste
• CFUeq vs CFU
• Fácil implementación
• Evidencia peer-reviewed disponible
• Validado y Certificado (AOAC)
• Cumple norma UNE100030:2017
• Útil en rutina y brote
• Beneficio para la salud pública
Beneficios de Legipid®

28. Documentos técnicos

29. • La validación la realiza y certifica un organismo
independiente y competente
o La validación es proporcionada por el fabricante
o El usuario no valida métodos
 El usuario verifica su desempeño del método
 El usuario necesita un guía de acreditación
Validación y certificación

30. • Organismos de certificación: ISO, AFNOR, AOAC,..
• The AOAC Research Institute (RI) pertenece a AOAC
INTERNATIONAL.
o Es un organismo tercero e independente:
o certifica métodos
o desarrolla protocolos de validación
o desarrolla estándares.
o Los métodos son publicados en el Journal of AOAC
Validación y certificación

31. Ficha técnica y Certificación Internacional
Validación y certificación

32. 32
Method modification of the Legipid® Legionella fast detection test kit.
Guillermo Rodríguez Albalat, Begoña Bedrina Broch, Marisa Jiménez Bono
J AOAC Int. 2014 Sep-Oct; 97(5): 1403–1409. doi: 10.5740/jaoacint.14-029
Comparing methods of determining Legionella spp. in complex water
matrices Álvaro Díaz-Flores, Juan Carlos Montero, Francisco Javier Castro,
Eva María Alejandres, Carmen Bayón, Inmaculada Solís, Roberto
Fernández-Lafuente, Guillermo Rodríguez
BMC Microbiol. 2015; 15: 91. Published online 2015 Apr
29. doi: 10.1186/s12866-015-0423-7
Publicaciones peer-review

33. • Legipid® cumple la Norma UNE-100030:2017
(complementaria al RD865/2003)
oMétodo certificado AOAC-RI
oKit in situ según norma UNE-ISO 17381
• Legipid® dispone de una autorización del Ministerio
de Sanidad para su uso en piscinas, jacuzzis y spas
de acuerdo con el RD742/2013
Marco normativo

34. • Soporte técnico-científico
oConsultoría
o Training y formación
• Soporte documental
o Validación y certificación
o Control de calidad
o Acreditación
Soporte de Biótica

35. Training, formación

36. Más allá de Legipid®
Ultra Legionella Inmunoanalysis System for Early Sensing
(ULISENS)
“This project has received funding from the European Union’s
Horizon 2020 research and innovation programme under
grant agreement No 726499”.

37. Solución Ulisens
www.ulisens.com

38. Filtración
Análisis
Reactivos
Resultado
Solución Ulisens

39. Solución Ulisens
“This project has received funding from the European Union’s Horizon
2020 research and innovation programme under grant agreement No
726499”

40. El futuro

41. • Sistema de alerta temprana/monitorización continua
• Análisis rápido (1-2 horas), fiable y de valor
• Limpieza + Desinfección inteligentes
• Uso a pie de instalación
• Desarrollo de redes de vigilancia y control
Beneficios Ulisens/Legipid

42. Legionella es una bacteria patógena de transmisión ambiental (aerosol),
cuya concentración y composición en el agua es fluctuante
La célula infectiva está libre en el agua y puede no ser cultivable
La separación inmunomagnética (SIM) separa la bacteria de su entorno
complejo y la lleva a un medio de detección de composición constante
Legipid es un test validado y certificado por AOAC-RI, basado en SIM,
que permite realizar de forma manual hasta 20 reacciones por plataforma
en 1 hora
ULISENS es una gama de equipos basados en SIM que incorporan la
automatización completa del análisis de Legionella
Un resultado rápido y fiable habilita una decisión oportuna, ahorra costes
y protege nuestra salud.
Conclusiones

44. Gracias
w w w . b i o t i c a . e s
i n f o @ b i o t i c a . e s
w w w . l e g i o l a b . c o m
w w w . u l i s e n s . c o m