Juan Carlos Montero, del Instituto de Ciencias de La Salud de Talavera de la Reina, detalló las estrategias que han resultado más exitosas en la aplicación del método SIM (Legipid Legionella Fast Detection) en la resolución de brotes de legionella, en su experiencia como investigador ambiental de reconocido prestigio en el uso profesional de métodos rápidos desde la administración pública.

1. Juan Carlos Montero Rubio
Técnicas Rápidas en el Desempeño
del Trabajo de Salud Pública

2.  Baja Recuperación:
• El procedimiento ISO permite obtener el recuento de Legionella sp por diferentes rutas
elegidos por el analista en función de las características del agua.
El resultado final es el del procedimiento que de mayor resultado (no se hace la media).
 Tratamientos (Ácido, Calor, Sin tratamiento),
 Siembra (Volumenes, Medios)
 Concentración, Sobre membrana, Siembra Directa,
• Enmascaramiento debido a la microbiota acompañante: Crecimiento confluente o
invasivo.
 Inhibición debido a la microbiota acompañante. (Cotuk, A. et al., 2005; Amin A. et al.,
2013; Giao M.S. et al., 2011)
• Posibles células viables y no cultivables (Alleron L et al, 2008).
Juan Carlos Montero
Debilidades del Cultivo (I)
Pseudomona
aeruginosa
Legionella
pneumpophila
Pseudomona
aeruginosaLegionella
pneumpophila
Técnicas rápidas en el desempeño del trabajo de
Salud Pública
Francisco Javier Castro, LRSP Comunidad de Madrid

3.  Baja Precisión:
• Recuentos de Colonias de muy distinta
procedencia: 1 vacuola 102-3 bacterias – 1 UFC
(Berg SG, 1998).
• Δ t = 6 h; En el 52% de las muestras
diferencias ≥ 1 log10 (McCoy WF et al, 2012).
 Crecimiento lento. Resultados más allá de
una semana.
Juan Carlos Montero
Debilidades del Cultivo (II)
Rowbotham, 1983
Técnicas rápidas en el desempeño del trabajo de
Salud Pública

4. Juan Carlos Montero
Año
Valor inferior
(ufc/l)
Z-score
inferior
Valor superior (ufc/l)
Z-score
superior
Rango
2015 750 -1,9 58000 1,9 5,73E+04
2015 500 -2 41000 1,8 4,05E+04
2014 1400 -1,8 84000 1,8 8,26E+04
2014 6400 -1,9 540000 2 5,34E+05
2014 225 -2 12000 1,5 1,18E+04
2014 200 -2 10000 1,4 9,80E+03
2013 100 -1,8 50000 1,6 4,99E+04
2013 820 -2 80000 1,9 7,92E+04
2013 1040 -2 100000 2 9,90E+04
2013 2000 -1,9 98000 1,5 9,60E+04
2013 1513 -1,8 110000 2 1,08E+05
2012 250 -1,92 60000 1,25 5,98E+04
2012 238 -1,85 83000 1,29 8,28E+04
2012 300 -1,79 86000 1,48 8,57E+04
2011 200 -1,8 50000 1,27 4,98E+04
2011 100 -1,64 41000 1,63 4,09E+04
2011 22 -1,99 11000 1,71 1,10E+04
2011 300 -1,89 115600 1,51 1,15E+05
2011 258 -1,69 43182 1,35 4,29E+04
2010 500 -2 320000 1,26 3,20E+05
2010 332 -1,84 128000 1,27 1,28E+05
2010 40 -1,94 10333 1,41 1,03E+04
2010 890 -1,85 410000 1,32 4,09E+05
2010 200 -2 80000 1,3 7,98E+04
X 1,08E+05
S 1,29E+05
Rango de satisfactorios en los ensayos intercomparación participados (LICS)
Técnicas rápidas en el desempeño del trabajo de
Salud Pública

5. Juan Carlos Montero
Figura 1.- Representación de un ensayo interlaboratorios con una muestra preparada con Legionella exclusivamente.
Técnicas rápidas en el desempeño del trabajo de
Salud Pública

6. Juan Carlos Montero
Separación Inmunomagnética
(SIM)
Técnicas rápidas en el desempeño del trabajo de
Salud Pública

7. Juan Carlos Montero
Técnicas rápidas en el desempeño del trabajo de
Salud Pública

8. Juan Carlos Montero
Técnicas rápidas en el desempeño del trabajo de
Salud Pública

9. Juan Carlos Montero
Técnicas rápidas en el desempeño del trabajo de
Salud Pública

10. Juan Carlos Montero
Técnicas rápidas en el desempeño del trabajo de
Salud Pública

11. Comparar efectividad y eficiencia de los métodos rápidos de detección y
recuento de Legionella spp frente al método de la norma ISO 11731, 1998.
(Water quality - detection and enumeration of Legionella. UNE-ISO 11731,
2007) para tener elementos objetivos que permitan tomar decisiones
respecto a su implantación en un laboratorio de salud pública.
Objetivo
Juan Carlos Montero
Técnicas rápidas en el desempeño del trabajo de
Salud Pública

12. Los resultados de los métodos analizados presentan un porcentaje de
coincidencia frente a nivel de actuación cercano al 90%.
Los métodos alternativos utilizados muestran ser tanto o más efectivos para la
detección de Legionella spp. en muestras de rutina que el método de
referencia.
La elección de uno u otro se debe motivar en otro tipo de elementos tales como
coste, objetivos del análisis, disponibilidad de medios y personal o el tipo de
muestras gestionadas en el laboratorio.
Frente a muestras muy sucias el método que peor respuesta presenta es el
cultivo en placa, debido principalmente a la presencia de microbiota
interferente.
En el caso de qPCR, esta suciedad puede provocar inhibiciones en la
detección, debido a sustancias presentes en la muestra.
Conclusiones
Juan Carlos Montero
Técnicas rápidas en el desempeño del trabajo de
Salud Pública

13. Limitaciones Separación Inmunomagnética.
• La legislación para torres de refrigeración solo admite ISO (ISO
11731, 1998).
 Aunque se expresa en UFC equivalentes, los resultados no son siempre
coincidentes con el método de referencia.
• No disponibilidad de la bacteria para estudios posteriores.
• Posibilidad de fasos + en muestras coloreadas.
• Infraestimación con respecto a otras técnicas rápidas en muestras
con bacterias de Legionella sp no libres.
• Se desconocen otras hasta el momento.
Juan Carlos Montero
Técnicas rápidas en el desempeño del trabajo de
Salud Pública

14. · Inspección de las instalaciones.
· Toma de muestras ambientales.
· Ensayos.
Investigación ambiental
· L+D
· Reforma estructural
· Paralización total/parcial
Decisiones
· Acción oportuna
· Detección Rápida
· Reducir Tiempo de
exposición
Test rápido
Técnicas rápidas en el desempeño del trabajo de
Salud Pública

15. Juan Carlos Montero
1
2
3
4
5
6
7
8
9
?
Técnicas rápidas en el desempeño del trabajo de
Salud Pública

16. Juan Carlos Montero