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MICROSCOPIO
Pontificia Universidad Católica del Ecuador
Práctica de Laboratorio
Cinthya Enríquez
Jenifer Minda
César Ochoa
Karen Mora
María José Carrillo
Quito, 1 de Junio del 2017
Fundamentos de Biología
Terapia Física
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MICROSCOPIO
Índice
Introducción............................................................................................................................ 3
1. Microscopia y Tipos de Microscopio ............................................................................... 3
2. Histología de los Tejidos Musculares............................................................................... 6
Informe prácticas de laboratorio............................................................................................. 7
Resultados y Discusión ...........................................................................................................17
Tamaño de los objetos observados y documentados ................................................................17
Pregunta...............................................................................................................................19
Conclusiones...........................................................................................................................20
Bibliografía.............................................................................................................................21
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Introducción
1. Microscopia y Tipos de Microscopio
Microscopia
Es observar imágenes y estructuras diminutas por medio de técnicas para observar
objetos que no están al alcance de la visualización normal (Kremer, 2012).
Tipos de Microscopio
Microscopia Óptica
Microscopio Simple:
-Lupas
Monoculares
Se caracterizan por ser de uso portátil en el cual se usa un solo ojo y tiene un campo
bajo de visualización (Arraiza, 2008).
Binoculares
Se caracteriza por hacer un aumento en la imagen en la cual genera un aumento de
estereoscopia que se basa en observar una imagen al mismo tiempo usando los dos ojos
(Arraiza, 2008).
Microscopio Compuesto:
-Estereomicroscopio
Se caracteriza por no tener un aumento potencial, el cual está formado por
dos lupas binoculares que poseen dos prismas y objetivos. Por ende, los objetos conservan
el relieve y mantienen su posición (Arraiza, 2008).
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-De luz ultravioleta
Está formado por lentes de cuarzo, se caracteriza por visualizar las imágenes
ultravioletas solo en fotografías, fluorescencia o fotoemisión. Por ende, los objetos no
conservan su relieve y se invierte su visualización (Arraiza, 2008).
-De fluorescencia
Se caracteriza por tener un origen de luz que va hacia el ultravioleta y el
infrarrojo, posee un pasador que define la parte de excitación donde permite que pase la
fluorescencia (Arraiza, 2008).
-De contraste de frases
Se caracteriza por aprovechar los cambios en el índice de refracción gracias
a la iluminación, por lo tanto, se observa células al natural en especial células vivas de tipo
transparentes y en preparaciones húmedas (Arraiza, 2008).
-De campo oscuro
Se caracteriza por utilizar luz intensa sobre una muestra donde se observa un
fondo oscuro que resaltan partículas brillantes. Por ende, las partículas no se tiñen (Arraiza,
2008).
-De polarización
Se utiliza para poder identificar sustancias cristalinas, al colocar el
condensador intermedio entre el origen de iluminación, destilador y determinador
intermedio entre objeto y el ocular se observará una muestra brillante en una zona opaca
(Arraiza, 2008).
-Microscopia por la luz reflejada (Metalográfico)
Es manejado en minerales metálicos y opacos, se caracteriza por tener un
método de luz distinto constituido por un reflector iluminado polarizado perpendicular y un
aclaratorio de opacos para ser dirigidos verticalmente encima de la zona del mineral por
medio de la polarización de los destellos de luz. Por ende, los objetos son reflejados en
sentido contrario al lente (Arraiza, 2008).
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Microscopia Electrónica
- De Barrido (MEB) - Exploración electrónica (SEM)
Se caracteriza por tener una impresión tridimensional, el molde puede variar por
su espesor o su volumen. Tiene técnicas que lo preparan como: Desecación por
enfriamiento y secado por sitio crítico; forrando el espécimen con una cubierta de
mineral (Arraiza, 2008).
- De Transmisión (TEM)
Es un tipo de microscopio electrónico, que cuentan con lentes y condensadores
que generan iluminación sobre la muestra, los rayos de iluminación atraviesan la
muestra en el cual son enfocados por lentes de objetivo y de proyección para que la
imagen sea enfocada sobre una pantalla fluorescente de manera aumentada. El tamaño
del objeto debe ser moderado por la capacidad de la placa. Otra de sus características
principales es que debe trabajarse en condiciones de alto vacío, por razones de que el
aire imposibilita el movimiento de electrones (Arraiza, 2008).
- Microscopio confocal de barrido láser
Este microscopio consiste en la utilización de un láser como fuente de luz, en donde
se ilumina una pequeña zona denominados puntos. El termino de barrida se utiliza para
recoger un sistema de formación de la imagen en el cual se representa la unión de todos los
puntos. Tiene una alta capacidad de imagen que se encuentra en una manera fluorescente
(Arraiza, 2008).
La tecnología ayuda a que se pueda digitalizar y reconstruir de manera inmediata,
con altas resoluciones las cuales se encuentran en tres dimensiones (Arraiza, 2008).
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2. Histologíade los Tejidos Musculares
Tejidos Musculares
Musculo Esquelético
Produce movimientos voluntarios y se conectan mediante fibras nerviosas, donde se
juntan por medio de tendones hacia los huesos. Las fibras musculares o miocitos se juntan
para formar fascículos musculares responsables en la movilidad de los organismos. Estas
células están rodeadas por una lámina basal, fibras reticulares y colágeno que forman el
endomisio.
Los fascículos musculares están envueltos de conectivo denso que se llama perimisio y el
musculo formado por el epimisio. Por medio del enrollamiento del tejido conectivo se
penetran y dispersan los vasos sanguíneos y ramificaciones nerviosas la cual controlan la
contracción muscular. El tejido muscular se contrae por medio de los miocitos o fibras
musculares, que se colocan paralelamente para formar haces o láminas. (Geneser, 2003)
Tiene una longitud aproximada de mm a 30cm. Son células de dos o más núcleos
que comparten un mismo citoplasma y sus núcleos se disponen en la periferia celular. Su
forma está dada por la disposición de los filamentos de actina y miosina. (Megías,Molist
&Pombal 2017)
Las bandas oscuras son formadas entre filamentos de actina y de miosina, y las claras
compuestas solo de filamentos de actina. (Megías,Molist &Pombal 2017) (Geneser, 2003)
Musculo Cardiaco
El musculo cardiaco está constituido por células musculares mono nucleadas
(cardiomiocitos), son más cortas y más amplias. Son semejantes a las células esqueléticas
ya que presentan estrías transversales con bandas oscuras correspondientes a los hilos de
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actina y miosina, y bandas claras que corresponden únicamente a los filamentos de actina.
(Megías,Molist &Pombal 2017) (Geneser, 2003)
Musculo Liso
Las longitudes de las células lisas van entre 20 y 500 µm y su diámetro está entre 8
y 10 µm, son largas y con forma de huso, poseen un núcleo en posición central, los
organelos se encuentran con mayor disposición en el citoplasma. El músculo liso carece de
estriaciones en el citoplasma. Están rodeadas por una lámina basal. (Megías,Molist
&Pombal 2017)
Informe prácticas de laboratorio
Objetivos de la práctica
- Conocer la metodología y materiales de trabajo de laboratorio de biología
- Conocer las partes principales de un microscopio compuesto
- Aprender el uso correcto del microscopio compuesto y del microscopio de disección
- Usar las unidades de medida microscópicas.
EJERCICIOS
Ejercicio 1: Partes del Microscopio Compuesto
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El microscopio está compuesto por:
Base: Conocido también como brazo, es quien soporta todo el peso.
Lentes oculares: Son los lentes en dónde se aproximan los ojos para poder
observar.
Lentes Objetivos: Son 4 lentes de distintas magnitudes: (agua) 4x, 10x, (seco) 40x
y (aceite)100x; están ubicados en una pieza llamada revólver,
Platina: Apoyo donde se coloca la placa que está compuesta de portaobjetos,
cubreobjetos y muestra.
Luz: Ilumina la toma de la muestra.
Condensador: Regularizador de luz
Micrométrico: Permite enfocar a las magnitudes de 5x y 10x
Macrométrico: Permite dar una mayor precisión a los enfoques de 40x y 100x.
Ejercicio 2: Uso del Microscopio al lado izquierdo se encuentran las imágenes captadas en
laboratorio y al lado derecho tomadas de internet
Colocar a la placa con la muestra de frotis sanguíneo disecado en la platina.
Dar un buen enfoque de luz a la placa.
Observar en las siguientes magnitudes la muestra.
Magnitud:
4x (0.65): Se observan puntos pequeños que son los glóbulos rojos.
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https://i.ytimg.com/vi/CNSiHE_2Fa4/hqdefault.jpg
10x (0.25): Se observan los glóbulos rojos con mayor claridad.
http://edurirom.blogspot.com/2012/02/practica-no-1-puncion-capilar.
40x (0.65): Se observan los glóbulos rojos con mayor definición y adicional
encontramos el núcleo de los glóbulos blancos.
http://edurirom.blogspot.com/2012/02/practica-no-1-puncion-capilar.html
Comparación: Las imágenes de frotis sanguíneo tienen similitud a las imágenes tomadas
en laboratorio, demostrando con gran exactitud la definición de las células sanguíneas.
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Células Sanguíneas:
Glóbulos rojos: No tienen núcleo, ni mitocondrias, tienen forma de disco y su
coloración es roja.
Glóbulos blancos: Tienen núcleo y su coloración es blanca. (Mendoza, F.et al
2011)
Ejercicio 3: Observación de microorganismos en agua estancada
1. Usaremos un portaobjetos, cubreobjetos y una pipeta.
2. Con la pipeta absorbemos una gota de agua estancada, colocamos en el portaobjetos
y encima de la gota de agua colocamos el cubreobjetos.
3. Colocamos la placa con la muestra de agua estancada en la platina.
4. Utilizamos los objetivos con la magnitud de:
4x: Observamos células no tan claras, una masa color café con puntos
alrededor.
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10x: Se observar un microorganismo color verde en movimiento con
rapidez.
40x: Logramos localizar el mismo microorganismo con más exactitud, su
tamaño incrementa, su forma es más definida y se logra observa con
precisión el movimiento del microorganismo.
Observaciones: se pudo observar el microorganismo
Paramecium: seres unicelulares microscópicos de forma ovalada, están cubiertos
de cilias que los ayudan a desplazarse y obtener alimento. Miden de 0.05 a 0.35 mm
(Naitoh, Kaneko, & H 1972). Reactivated Triton-extracted models of Paramecium:
modification of ciliary movement by calcium ions. Science, 176 (4034) 523-524.)
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Ejercicio 4: Orientación de la imagen
1. Colocamos una letra diminuta recortada en el portaobjetos con una gota de agua y
encima colocamos el cubreobjetos.
2. Ponemos la placa en la platina.
3. Observamos la letra con el objetivo:
4x: Tenemos la letra n, la cual en este objetivo podemos observarle invertida
u.
Ejercicio 5: Unidades de Medida
La unidad básica de longitud que se maneja en el microscopio de luz es el micrómetro,
aunque existen otras medidas que también pueden usarse:
1 mm = 1000 µm
1 µm = 1000 nm
1 µm = 10000 Aº
Procedimientos
1. Colocamos un trozo de papel milimetrado en el portaobjetos con una gota de agua y
encima colocamos el cubreobjetos.
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2. Ponemos la placa en la platina.
3. Observamos el trozo de papel milimetrado con los objetivos:
4x: 4 cuadrados
10x: 2 cuadrados
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Ejercicios del N° 5
a) ¿Cuántos milímetros están contenidos en el diámetro del campo visual (con el
objetivo 4x)?
Esta contenido con un diámetro de 4,3mm con el objetivo 4x
b) Calcule el diámetro del campo visual (con el objetivo 4x) en milímetros.
El diámetro del campo visual con el objetivo de 4x es de 4,3mm
c) ¿Cuántos milímetros están contenidos en el diámetro del campo visual (con el
objetivo 10x)?
En el campo visual con el objetivo de 10x es de 2mm
d) Calcule el diámetro del campo visual (con el objetivo 10x) en milímetros.
El diámetro del campo visual de 10x es de 2mm
e) Calcule el diámetro del campo de visión cuando está usando el objetivo de 40x,
usando la fórmula.
Diámetro campo 1 x Magnificación 1 = Diámetro campo 2 x Magnificación 2
𝟒, 𝟑 × 𝟒 = 𝒙 × 𝟒𝟎
𝒙 =
𝟒, 𝟑 × 𝟒𝟎
𝟒𝟎
𝒙 = 𝟎, 𝟒𝟑𝒎𝒎
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Ejercicio 6: El Microscopio de Disección
En este microscopio la distancia entre el objetivo y la muestra es mayor que en el
microscopio de luz y la iluminación es desde abajo y de arriba.
1. Colocamos una letra diminuta recortada en el portaobjetos con una gota de agua y
encima colocamos el cubreobjetos.
2. Ponemos la placa en la platina del microscopio de disección.
3. Observamos:
La letra completa, su orientación se mantiene igual y a la letra se la puede
ver con claridad y mayor exactitud.
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Ejercicios del N° 6
a) Describe la orientación de la letra como se ve del microscopio. ¿Se mantiene
igual o cambia?
La orientación de la letra se mantiene igual, no varía.
b) Compare la magnificación de la letra con la magnificación en ejercicio N° 4.
La magnificación en el microscopio de disección es mucho más exacta y
clara mientras que la magnificación del primer microscopio no es tan
determinada hasta lograr definirla con el micrómetro y macrómetro.
c) Escribe 2 diferencias entre un microscopio compuesto y un microscopio de
disección.
En la orientación de la imagen el microscopio compuesto tiene como
característica un lente convexo, donde la luz atraviesa la muestra, luego pasa
al lente objetivo y por último a la zona focal; la diferencia entre estos
microscopios es que al colocar el objeto en la platina se encuentra en una
posición y al visualizarla se muestra una imagen invertida; mientras que el
estereomicroscopio carece de un condensador, el cual es encargado de
concentrar la luz por lo tanto la imagen se encuentra en la misma posición y
con aumento (Arraiza, 2008).
La magnificación máxima de los objetos del microscopio compuesto es de
100x mientras que en el microscopio de disección tiene una magnificación
máxima de 4.5x. (Kremer, 2012).
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Resultados y Discusión
Tamaño de los objetos observados y documentados
No poseemos la suficiente información para realizar el cálculo con algunas de las
formulas encontradas en internet por lo tanto estimamos y comparamos con fuentes de
libros el tamaño de los objetos
Glóbulos Rojos
6 a 8 micrómetros
(Naitoh, Kaneko, & H 1972).
Paramesium
0,5 milímetros
(Naitoh, Kaneko, & H 1972).
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Pregunta
¿Por qué los microscopios compuestos tienen una orientación de imagen distinta a los
estereomicroscopios?
El microscopio compuesto tiene como característica un lente convexo, donde la luz
atraviesa la muestra, luego pasa al lente objetivo y por último a la zona focal; la diferencia
entre estos microscopios es que al colocar el objeto en la platina se encuentra en una
posición y al visualizarla se muestra una imagen invertida; mientras que el
estereomicroscopio carece de un condensador, el cual es encargado de concentrar la luz
por lo tanto la imagen se encuentra en la misma posición y con aumento (Arraiza, 2008).
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Conclusiones
Al utilizar una muestra de sangre se pudo observar que con el lente 4x (0.65), se
visualiza puntos rojos de pequeña miniatura, al utilizar el lente 10x (0.25) ya se logra
observar glóbulos rojos con una coloración más fuerte, y por último con el lente 40x (0.65)
se logra observar el núcleo de los glóbulos blancos.
Con la muestra de agua estancada, al utilizar el lente 4x (0.65) se observa una masa
de color café con puntos alrededor, con el lente 10x (0.25) se observar un microorganismo
de color verde en movimiento y al utilizar el lente de 40x (0.65) logramos localizar un
microorganismo con más exactitud con una forma más definida, logrando apreciar el
movimiento del microorganismo.
Al colocar una letra de un tamaño diminuto y la cubrimos con una gota de agua
podremos observar que con el lente 4x (0.65) la forma de la letra se invertirá.
Colocando un trozo de papel milimetrado en el portaobjetos con una gota de agua y
encima, podremos observar que con el lente 4x (0.65) se podrá ver 4 cuadrados, con el lente
10x (0.25) nos fijaremos que hay 2 cuadros, por medio del uso de la formula podremos
calcular en milímetros el diámetro de campo.
Mediante el estudio realizado sobre los tipos microscopios, podemos destacar que
no existe uno solo y que cada microscopio depende del lente que tiene y la magnificación
del microscopio.
Llegamos a la conclusión que se puede observar con los diferentes microscopios y
encontramos un funcionamiento diferente, también se pudo saber la histología de los tejidos
musculares, los glóbulos rojos, blancos, y por último los pequeños microorganismos que se
encuentran localizados en este caso en el agua estancada, ya que no solo existe un tipo de
microorganismo existen diferentes y se logró comparar con el más parecido.
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Bibliografía
Arraiza,N.V. (2008). Manualde Microscopia.
Geneser,F.(2003). Histología. Montevideo,Uruguay:MedicaPanamericana.
Kremer,B.(2012). ManualdeMicroscopia. Barcelona:Omega.
Megías, M. P. (Enerode 2017). Atlas de Histología Animaly Vegetal:.Obtenidode Atlasde
HistologíaAnimal yVegetal :http://mmegias.webs.uvigo.es/indice.html
Megías, M. P. (Enero de 2017). Atlas de Histología Animal y Vegetal:. Obtenido de Atlas
de Histología Animal y Vegetal : http://mmegias.webs.uvigo.es/indice.html
Mendoza, F. Á., Cantú, E. T., Lazcano, D., Setser, K. W., & Deloya, E. M. (2011).
Morfología de las células sanguíneas y perfil leucocitario de Crotalus polystictus (Cope
1865). CIENCIA-UANL, 14(1), 53-59
Carranza, M., Ferraris, M. E., Actis, A. B., & Simbrón, A. (1997). Diferenciación
anatómica e histológica de los componentes tisulares de la articulación temporomandibular
(ATM). Acta odontol. venez, 35(1), 41-5.
Geneser, F. (2003). Histología. Montevideo, Uruguay: Medica Panamericana . (Mendoza,
F. Á., Cantú, E. T., Lazcano, D., Setser, K. W., & Deloya, E. M. (2011))
Reactivated Triton-extracted models of Paramecium: modification of ciliary movement by
calcium ions. Science, 176 (4034) 523-524.)