1. Guía Práctica BIOLOGÍA GENERAL
PRÁCTICA N°3
MICROSCOPIA
I. OBJETIVOS
Identificará y distinguirá las partes del miscroscopio
Desarrollará las habilidades y destrezas en el manejo de microscopio
Aprenderá las técnica de montaje para observer en el microscopio
II. FUNDAMENTOS
1. MANEJO DEL MICROSCOPIO:
Limpieza de lentes: Antes de comenzar a trabajar con un microscopio, debe
realizarse una inspección del estado de limpieza: lente frontal de cada objetivo,
lente superior del ocular, condensador y espejo.
Aumentos a emplear: Los aumentos comúnmente empleados para estos
trabajos son de 10X y 40X. Es conveniente recordar que no por ver las cosas
muy aumentadas, se ven mejor. La nitidez e intensidad de la imagen y la
extensión abarcada en el campo de la preparación son mayores empleando
objetivos débiles que fuertes. Por lo que emplearemos habitualmente el de 10X
para el examen general de la preparación y el de 40X, solo si queremos
apreciar mejor algún detalle de la misma.
Enfoque:
o Iluminación: En general se utilizara el espejo cóncavo para la
iluminación artificial. El espejo plano suele utilizarse para la luz natural.
escampo del microscopio.
Reactivos: Emplearemos reactivos de dos tipos:
o Aclarantes: Facilitan la observación microscópica de los elementos en
estudio, por hacerlos más transparentes:
Agua
Glicerina
Hidrato de cloral
Mezcla aclarante
o Colorantes: Hacen más patentes determinadas estructuras, parte de
ellas o contenidos celulares, bien por ser tenidos selectivamente del
color del propio reactivo o bien por dar lugar a nuevas coloraciones
distintas a la del reactivo:
Los colorantes son compuestos aromáticos solubles en agua
(generalmente en forma de sales), que contienen un ión orgánico
coloreado y otro ión inorgánico.
Pueden dividirse en dos grupos: Ácidos y básicos.
El colorante es ácido si la porción coloreada tiene carga negativa, es
decir, si tiene un anión coloreado, siendo en este caso repelido por
estructuras de la célula que presenten la misma carga, como es el caso
de la superficie bacteriana. El colorante se denomina básico si la
porción coloreada es el catión, cargado positivamente y con afinidad por
estructuras de la célula con carga negativa, como es la superficie
celular.
2. PREPARACIONES FIJADAS Y COLOREADAS
En la mayoría de los casos, los pasos a seguir son los que se indican a continuación:
Realizar una extensión con el asa de siembra esterilizada: para ello se toma una
pequeña gota de cada uno de los cultivos y se extiende en un portaobjetos limpio. Si
el cultivo procede de un medio sólido, se coloca una gota de agua en el portaobjetos
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2. Guía Práctica BIOLOGÍA GENERAL
y se mezcla con una pequeña porción de la muestra hasta formar una suspensión
homogénea, extendiéndola con el fin de obtener una fina película. Posteriormente,
se deja secar al aire o en la parte alta de la llama del mechero, pero no se debe
eliminar el líquido calentando el portaobjetos a la llama porque pueden
distorsionarse las células.
Fijar la muestra: La fijación tiene como finalidad coagular el protoplasma de las
células y hacer que se adhieran al portaobjetos, siendo el calor el método más
utilizado para la fijación, aunque pueden utilizarse otros agentes, como el alcohol
(metanol) u otros compuestos químicos. La fijación con calor se recomienda cuando
se trabaja con muestras de un cultivo sólido; en muestras obtenidas de un cultivo
líquido es mejor hacer la fijación con metanol ya que se retienen en el portaobjetos
un mayor número de células. Es necesario que la extensión se haya secado antes
de proceder a la fijación, por ello se debe esperar hasta que el líquido de la misma
se evapore. La fijación por calor se lleva a cabo pasando varias veces la preparación
seca a través de la llama de un mechero, con la extensión hacia arriba. El calor
desnaturaliza las proteínas y suele matar al microorganismo. Es importante no
excederse en este proceso, para evitar que las bacterias se deformen o se rompan,
siendo suficiente que el portaobjetos se note caliente sobre el dorso de la mano,
pero no demasiado.
Realizar la tinción: Para ello es necesario cubrir la preparación con abundante
colorante y dejarlo actuar durante algún tiempo.
Pasado ese tiempo: Lavar con agua las preparaciones teñidas para eliminar el
exceso de colorante, dejando caer con suavidad el agua sobre un extremo del
portaobjetos, que se mantendrá inclinado durante este proceso. No se debe dirigir el
agua con demasiada fuerza sobre la preparación para no arrastrar la muestra.
Eliminar el exceso de agua: Del portaobjetos golpeándolo ligeramente con cuidado
por el canto. Permitir que se seque la preparación, bien utilizando un papel secante,
sin frotar o bien dejándola secar al aire, aunque lleva más tiempo.
Examinar la preparación al microscopio: con el objetivo de inmersión (100x),
colocando, previamente, una gota de aceite de inmersión sobre la preparación
III. MATERIALES Y MÉTODOS
Microscopio
Láminas portaobjetos
Cubreobjetos
Solución fisiológica
Azul de metileno
Safranina
Aceite de inmersión
Agua destilada
Cristal violeta
Alcohol 90º
Yodo en cristales yoduro de potasio
IV. PROCEDIMIENTOS
Bacterias bucales: Realizar un hisopado bucal, colocar en el porta objetos, fijar
realizar la tinción de gram y observar
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Células vegetales: extraer con una pinza la delgada capa “piel” que cubre las hojas
blancas de una cebolla, colocarla sobre un portaobjeto, cubrir con cubreobjeto y
observar al microscopio óptico. Dibujar. Realizar el mismo preparado y observarlo.
Micología: Por lo general se realizan dos pruebas Exámen directo con KOH 10% o
azul lactofenol. El primero se coloca una gota de KOH al 10% en un portaobjeto y
mezclar con una pequeña cantidad del material a examinar, colocar un cubreobjetos
sobre la gota.
V. TRABAJO
1. Describa la clase práctica y grafique lo observado
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