LAs osteocondrodislpasias son causadas por un desarrollo anormal en el crecimiento del cartílago y hueso. Estas han sido reportadas en animales y humanos con enanismo. El dachshund es considerado una raza con enanismo desproporcionado, la causa se desconoce. Para determinar el tipo de osteocondrodisplasia de esta raza, se compararon las plazas de crecimiento de los huesos largos de un dachshund y un doberman pinscher, amvos de 2 meses de edad por medio de histopatología e histomorfometría.

1. ALTERACIONES EN LA PLACA DE CRECIMIENTO DE LOS HUESOS LARGOS
EN EL DACHSHUND DEMUESTRAN QUE ES UNA RAZA
OSTEOCONDRODISPLÁSICA
1
García Téllez Marco O.*, 1
Martínez Simón, 1
Fajardo Muñoz Raúl.
1
Centro de Investigaciones y Estudios avanzados en Salud Animal (CIESA),
Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Autónoma del Estado de
México, Carretera de cuota Toluca- Atlacomulco, Kilómetro 15.5 CP 50200, Toluca
Edo. de México. Correspondencia: comar26@hotmail.com
RESUMEN
Las osteocondrodisplasias son causadas por un desarrollo anormal en el crecimiento
del cartílago y hueso. Estas han sido reportadas en animales y humanos con
enanismo. El dachshund es considerado una raza con enanismo desproporcionado,
la causa se desconoce. Para determinar el tipo de osteocondrodisplasia de esta raza,
se compararon las placas de crecimiento de los huesos largos de un dachshund y un
doberman pinscher, ambos de 2 meses de edad por medio de histopatología e
histomorfometría. Los tejidos fueron fijados en formalina buferada 10%, embebidos
en parafina, seccionados a 4µm de espesor, teñidos con hematoxilina-eosina y
tricrómica de Masson y examinados al microscopio óptico. Los resultados
demostraron que la raza dachshund es osteocondrodisplásica, ya que presenta
alteraciones en el cartílago primario de la placa de crecimiento. Se requieren análisis
moleculares para determinar el tipo de osteocondrodisplasia presente en esta raza.
INTRODUCCIÓN
La placa de crecimiento es una estructura de cartílago especializada, importante en
el crecimiento en longitud de los huesos largos. Histológicamente se divide en 3
zonas: Reserva (ZR), Proliferativa (ZP) e Hipertrófica (ZH), cada zona tiene
morfología celular diferente. Alteraciones en diferenciación y proliferación de
condrocitos en este cartílago primario, pueden generar enfermedades como las
osteocondrodisplasias. La más estudiada en humanos es la acondroplasia, la cual
genera acortamiento severo de los huesos largos. Debido a la dificultad de estudiar
placas de crecimiento en humanos acondroplásicos, se han generado modelos
murinos con acondroplasia e histopatológicamente esta enfermedad presenta: placas
disminuidas de tamaño, acortamiento en zonas y menor número de condrocitos (ZP y
ZH), morfología condrocítica alterada e incremento vascular anormal. En animales
las osteocondrodiplasias han sido reportadas en algunas razas de perros longilíneos,
las cuales son debidas a una mutación o a herencia autosómica recesiva. Razas
como el basset hound y dachshund han sido considerados como acondroplásicos por
similaridades con el fenotipo acondroplásico humano, sin embargo no presentan la
misma mutación que en humanos. De acuerdo a las alteraciones que se presentan
en la placa de crecimiento de humanos y animales, la raza dachshund representaría
un buen modelo para entender los mecanismos de osteocodrodisplasias, ya que la
mayoría de ellas se desconoce tanto en animales como en humanos. El objetivo de
este trabajo fue, identificar las alteraciones histopatológicas e histomorfométricas de
la placa de crecimiento de los huesos largos en el dachshund.

2. REVISIÓN DE LITERATURA
La placa de crecimiento es una delgada capa de cartílago, se origina en la vida fetal
por medio del proceso de osificación endocondral, se localiza entre la diáfisis y la
epífisis de los huesos largos 1,2
. Después del nacimiento, el reemplazo de cartílago
por hueso no ha sido completado, y las dimensiones del cuerpo se determinan
principalmente por el crecimiento longitudinal de los huesos largos, que es generado
por la placa de crecimiento. Aproximadamente en la pubertad el crecimiento
longitudinal de los huesos disminuye por el reemplazo gradual de hueso en la placa
de crecimiento, finalmente el crecimiento en longitud culmina y la placa de
crecimiento se fusiona con la epífisis y la metáfisis 3
. Histológicamente, está
compuesta de 3 zonas principales: reserva, proliferativa e hipertrófica. La zona de
reserva, se encuentra debajo del hueso epífiseal y contiene condrocitos que son de
forma irregular, pueden estar solos o en pares y se encuentran esparcidos en una
matriz de cartílago abundante, estas células se encuentran en estado quiescente,
pero son capaces de generar nuevas clonas de condrocitos, los cuales pueden
organizarse en columnas alineadas paralelas al eje longitudinal del hueso. Dentro de
las columnas, las cuales se pueden localizar en la zona proliferativa, los condrocitos
tienen forma aplanada, proliferan rápidamente y de manera constante hacia la
diáfisis, después se diferencian y se agrandan, formando la zona hipertrófica. Los
condrocitos hipertróficos contribuyen sustancialmente al proceso de crecimiento,
tienen forma redonda y secretan vesículas de matriz, las cuales son depositadas en
la matriz extracelular, las vesículas sirven como sitios de mineralización. Cuando
concluye la diferenciación, los condrocitos mueren y forman lagunas condrocíticas,
las cuales inician la osificación por medio de la invasión vascular, lo cual permite el
ingreso de células del estroma como condroclastos y osteoblastos 4, 5
. Las
alteraciones en la diferenciación y proliferación de condrocitos en la placa de
crecimiento, pueden dar lugar al surgimiento de diversas enfermedades de los
huesos largos 6
. En humanos, se conoce una clasificación internacional de más de
200 alteraciones esqueléticas con 26 grupos de osteochondrodisplasias. Una
osteocondrodisplasia es definida como anormalidades en el desarrollo del cartílago y
crecimiento de los huesos. Algunas de estas enfermedades han sido identificadas a
nivel molecular, tal es el caso de la acondroplasia, enfermedad caracterizada por un
acortamiento severo de los huesos largos y que se origina de varias mutaciones en
el gen del Receptor 3 del Factor de Crecimiento de Fibroblastos (FGFR3) 7,8
. En
animales, las osteocondrodisplasias se han reportado en varias razas de perros con
fenotipo longilíneo. Varias de estas alteraciones resultan de una mutación de novo,
pero en algunos casos parecen ser debidas a herencia autosómica recesiva 9,10
.
Razas, como el Bulldog, Basset hound, Dachshund, Pekinnes y Shi-tzu, han sido
referidas como acondroplásicas, por la similitud que presentan con el fenotipo
acondroplásico humano (enanismo desproporcionado, depresión del puente nasal y
prognatismo) 11
. Sin embargo, la mutación que está involucrada en el fenotipo
acondroplásico humano, no se encuentra presente en estas razas 12
.
MATERIAL Y MÉTODO
Diseño del estudio: Observacional descriptivo y cuantitativo.
Para la caracterización histológica de las placas de crecimiento dos perros 1
dachshund y 1 doberman pinscher de 2 meses de edad, machos, clínicamente

3. sanos, alimentados en base a los Requerimientos de Energía Basal (REB), les fue
practicada la eutanasia por sobredosis de pentobarbital sódico. Los cachorros fueron
manejados de acuerdo a las normas establecidas: (NOM-069-ZOO-1999;
Especificaciones técnicas para el uso y cuidados de animales de laboratorio, NOM-
033-ZOO-1995; Sacrificio humanitario de los animales domésticos y silvestres, y a
las recomendaciones de Gauthier et al., 2005). Posteriormente la epífisis proximal de
los miembros torácicos fue obtenida realizando un corte de 5 a 10 mm proximal a la
placa de crecimiento de cada hueso. Los fragmentos fueron fijados en formalina
buferada 10% durante 3 días, después se colocaron en etanol al 70 % por 24 horas.
Fueron descalcificados colocándolos en una mezcla de Ácido fórmico y EDTA al
10% durante 4 días. Después fueron embebidos en parafina y se obtuvieron cortes
de 4 micras de espesor que contenían las placas de crecimiento. Los cortes fueron
teñidos con Hematoxilina-eosina y Tricrómica de Masson 2,4
. Fotografías
electrónicas de la placa de crecimiento del húmero, región proximal fueron
capturadas usando una cámara fotográfica acoplada a un microscopio de luz (Motic
B4 R
), las fotografías fueron tomadas utilizando objetivos 10X, 40X y 100X. La
histomorfometría fue realizada sobre las fotografías electrónicas, utilizando el
software (Motic, Image Plus versión 2.0). Los parámetros medidos fueron: 1) Altura
total de la placa de crecimiento, 2) Altura individual de cada zona y 3) Altura de los
condrocitos 14
. Para el análisis estadístico, los datos obtenidos fueron analizados con
una prueba no paramétrica de Mann-Whitney usando el software MinitabR
, versión
13.0 (Minitab, 2000). Una p ≤ 0.05 fue considerada significativa.
RESULTADOS
Histológicamente la placa de crecimiento de húmero proximal en ambas razas fue
marcadamente diferente. En el doberman, la zona de reserva (ZR) era escasa, los
condrocitos eran pequeños con formas redondas y aplanadas, se les podía encontrar
individualmente o en pares, y suspendidos en moderada matriz extracelular
interterritorial. En el dachshund, la ZR era abundante en comparación con la ZR del
doberman, los condrocitos eran grandes y la mayoría tenían formas redondas y en
menor proporción aplanadas, también se podían encontrar individualmente y en
pares, se encontraron suspendidos en abundante matriz extracelular interterritorial.
La zona proliferativa (ZP) del doberman era abundante y organizada en columnas
grandes y simétricas de condrocitos típicas apiladas entre si y dispuestas a lo largo
del eje longitudinal del hueso, con escasa matriz interterritorial entre cada columna,
los condrocitos de esta zona presentaron formas aplanadas de manera discoidal o
cuneiforme. La ZP del dachshund era escasa, contenía columnas de condrocitos de
tamaño variable y desalineadas del eje longitudinal del hueso, se observó abundante
matriz interterritorial entre cada columna. Los condrocitos presentaron formas
irregulares y se encontraron muy encimados en las columnas. En el doberman, la
zona hipertrófica (ZH) era abundante, los condrocitos presentaron formas redondas
de manera uniforme, en la parte distal de esta zona se observaron abundantes
lagunas condrocíticas y matriz extracelular interterritorial escasa. En la zona de
transición a cartílago calcificado, se encontraron osteoblastos, osteoclastos,
eritrocitos, incremento vascular, así como áreas de cartílago ocupadas por
osteoblastos, pero escasa formación de hueso primario. En el dachshund, la ZH era
escasa a diferencia del doberman, los condrocitos eran de tamaño variable y con

4. diferentes formas, en la parte distal de esta zona las lagunas condrocíticas eran
escasas y dispersas, en la zona de transición a cartílago calcificado, se observaron
condrocitos hipertróficos en apoptosis que aún no formaron la laguna condrocítica y
presentaron invasión vascular muy intensa. También se observaron abundantes
osteoblastos activos y matriz extracelular calcificada con formación de hueso
primario abundante. Los resultados de la histomorfométría corroboraron lo observado
en la histopatología, esto es: la altura total de la placa de crecimiento del dachshund
fue menor a diferencia de la del doberman, La ZR del dachshund fue de mayor
tamaño a diferencia de la del doberman, la ZP y ZH fueron de menor tamaño en el
dachshund a diferencia de las del doberman, las diferencias encontradas fueron
estadísticamente significativas (p ≤ 0.05). La altura y número de condrocitos fueron
mayores en la ZR del dachshund a diferencia de los del doberman con diferencias
significativas (p ≤ 0.05), sin embargo en la ZH fueron de menor tamaño y número a
diferencia de los del doberman, también con diferencias significativas (p ≤ 0.05).
DISCUSIÓN
Este estudio demostró que el dachshund presentó alteraciones en la placa de
crecimiento del húmero en su porción proximal, expresándose en acortamiento de la
altura total de la placa de crecimiento y en la ZP y ZH, con alteraciones en tamaño y
morfología de los condrocitos, comparadas con las del doberman. Actualmente se
desconoce como se llevan a cabo estos mecanismos, y para tratar de entenderlos se
han realizado estudios en modelos murinos con acondroplasia, donde observaron
acortamientos en las ZP y ZH, con alteraciones en la morfología de los condrocitos14,
15
. En placas de crecimiento de la raza de perros basset hound de dos meses de
edad, se reportaron alteraciones en la morfología de los condrocitos en las mismas
zonas2
, observaciones similares reportamos en este estudio, corroborando con
metodología cuantitativa a través de la histomorfometría y soporte estadístico.
Encontramos la ZR grande en el dachshund comparada con la del doberman, lo cual
se atribuyó al mayor número de condrocitos y con mayor tamaño. Estos hallazgos no
se han reportado en modelos murinos con acondroplasia, sin embargo en la raza
basset hound se reportó abundante ZR en sus placas de crecimiento, comparadas
con las de la raza doberman 2
. Se observó inminente invasión vascular prematura en
la zona de transición (parte distal de la zona hipertrófica-zona de cartílago
calcificado) en la placa de crecimiento del dachshund, lo cual podría contribuir al
acortamiento de la ZH, ya que los vasos sanguíneos invadieron en abundante
cantidad condrocitos hipertróficos que aun no formaron lagunas condrocíticas en esta
zona. Esta invasión vascular prematura podría ocasionar una subsiguiente
osificación prematura de la placa de crecimiento en esta raza, lo que explicaría el
acortamiento severo que sus huesos largos presentan 5
. En modelos murinos con
acondroplasia se ha reportado como aberración vascular al incremento en la invasión
vascular en esta zona de la placa de crecimiento 16
. En la raza basset hound se
reportó incremento vascular anormal en esta zona de la placa de crecimiento con
formación de hueso primario abundante 2
.
En conclusión, las observaciones realizadas, demostraron que la raza dachshund
presentó acortamiento de la placa de crecimiento de humero proximal, ZR grande
debido al mayor número de condrocitos y con mayor tamaño, acortamiento de las ZP
y ZH con alteraciones en el tamaño y morfología condrocítica, y la inminente invasión

5. vascular prematura. Estos hallazgos corresponden a alteraciones que se presentan
en acondroplasia, sin embargo, según los reportes previos, la raza no presenta la
misma mutación que usualmente presentan los acondroplásicos, por lo tanto se
sugiere que el dachshund sea identificado también como osteocondrodisplásica ya
que es un término general y muy usado para describir alteraciones que se presentan
en este cartílago primario.
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