Tópicos fundamentales de microscopia óptica, desde la microscopía de luz transmitida a técnicas avanzadas en microscopía de fluorescencia y superresolución.

1. Por Nicole Salgado Cortes (MSc)
Unidad de Microscopía Avanzada Medicina
Facultad de Medicina
Pontificia Universidad Cátólica de Chile
Una breve introducción

2. .1.
HISTORIA
.2.
LUZ Y ÓPTICA
.3.
MICROSCOPÍA DE LUZ TRANSMITIDA
.4.
MICROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA
.5.
MICROSCOPÍA CONFOCAL
.6.
MICROSCOPÍA AVANZADA

3. Zacharias Janssen
-1590-
Leeuwenhoek
-1600-
Robert Hooke
-1665-
Isaac Newton
-1750-
Ernst Abbe
-1877-
Marvin Minsky
-1957-
Betzig, Hell y Moerner
-2014-

5. REFRACCIÓN
Ley de Snell -1600-
DIFRACCIÓN
Principio de Huygens -1678-
REFLEXIÓN
Ley fundamental de la Reflexión
de Herón –70 a.C.-

6. RESOLUCIÓN
Capacidad para distinguir separadamente dos
objetos que se encuentran muy juntos.
λ
2 N.A.
R =

8. VERTICAL
Para muestras montadas en portaobjetos.
INVERTIDO
Para muestras vivas en placas Petri o placas
multipocillo.

9. FUENTE DE LUZ
CONDENSADOR
PLATINA
LENTES OBJETIVOS

10. λ
2 N.A.
R =
Baja N.A. o larga λ Alta N.A. o corta λ

11. CAMPO CLARO CONTRASTE DE FASES
CAMPO OSCURO
CONTRASTE DE
INTERFERENCIA
LUZ REFLEJADA LUZ POLARIZADA

13. FUENTES DE LUZFILTROS

14. MONOCORMATICASESPECTROS

16. Diagrama de Jablonski

17. Desplazamiento de Stoke

18. TINCIONES FLUORESCENTES
Relativa especificidad
Baja complejidad técnica
INMUNOFLUORESCENCIA
Directa o indirecta
Alta especificidad
Mediana complejidad técnica
QUANTUM DOTS
Nano cristales recubiertos
Alta especificidad

19. GREEN FLUORESCENT PROTEIN (GFP)
Extraída de la medusa Aequorea victoria
Permite la aplicación de marca fluorescente en células vivas.

20. Luz Blanca
Fluorescencia

21. Epifluorescencia
Confocal

22. POINT SCANNING
La imagen se genera punto por punto.
La señal es detectada por un Fotomultiplicador.
SPINNING DISK
La imagen se genera en un solo barrido.
La señal es detectada por una cámara CCD.

24. PHOTOACTIVATION PHOTOCONVERSION
FRET
Fluorescence Resonance
Energy Transfer
FRAP
Fluorescence Recovery
After Photobleaching

25. LIGHT SHEET MICROSCOPE TIRF MICROSCOPE
Total Internal Reflection Fluorescence
STED MICROSCOPY
Stimulated Emission Depletion
PALM MICROSCOPY
Photo Activation Localization Microscopy

26. • Molecular Expressions website http://micro.magnet.fsu.edu/primer/index.html
• Carl Zeiss Online Campus website http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/index.html
• Nikon MicroscopyU website https://www.microscopyu.com/
• Fundamentals of Light Microscopy and Electronic Imaging, 2nd Edition. Davidson and Murphy (2013)