La PCR es una técnica que permite obtener múltiples copias de una secuencia de ADN específica. El proceso implica la desnaturalización del ADN, la hibridación de cebadores y la extensión de la cadena de ADN por una ADN polimerasa. Mediante múltiples ciclos de calentamiento y enfriamiento, la PCR puede amplificar una secuencia de ADN de manera exponencial para producir millones de copias en unas pocas horas.

1. QUÉ ES PCR?
PCR ("Polymerase Chain Reaction": La Reacción en Cadena de la
Polimerasa) es una técnica que permite conseguir muchas copias de ADN . Este
procedimientos es uno de los mas relevantes de la actual revolución en genética
molecular. Actualmente la PCR permite obtener rutinariamente copias de ADN
provenientes de muestras muy pequeñas.
En una célula, la doble cadena de ADN es abierta por enzimas para
permitir su replicación.
En la PCR, las hebras simples de ADN se obtienen calentando fragmentos
del mismo a 95°C. La muestra es luego enfriada para permitir que los "primers"
complementarios se "anillen" a la hebra original de ADN. De esta manera la ADN
polimerasa puede "pegarse" e iniciar la copia de cada hebra. con calentamientos y
enfriamientos repetidos se pueden producir millones de ADN en unas pocas
horas.
El descubrimiento de bacterias extremófilas que soportan temperaturas
alrededor de los 100 ºC permitió aislar sus ADN polimerasas, las cuales son
funcionales a esa temperatura. Las ADN polimerasas aisladas de estas bacterias
permitió el desarrollo de "cicladores" automáticos que no necesitan que se
agregue ADN polimerasa a la muestra luego de cada ciclo.
Para obtener solamente la porción de ADN necesaria para la identificación
bacteriana se utiliza como "primers" oligonucleótidos que anillan específicamente
a la región que flanquea al gen del ARN ribosómico 16S.
QUE ES PRIMERS?
Fragmento corto de ácido desoxirribonucleico (ADN) o de ácido
ribonucleico complementario de una secuencia de ADN dada. Actúa como punto
en el cual puede tener lugar la replicación, como en el caso de la reacción en
cadena de la polimerasa.

2. Los "primers" o cebadores son pequeñas piezas de ADN que anillan a
secuencias específicas, en este caso se usan dos primers el 27F y el 1525R, que se
"pegan" a los extremos opuestos del gen del ARN ribosómico 16S, uno en cada
hebra de ADN. Una vez que los "primers" se anillan la ADN polimerasas extiende
e ADN desde el extremo 5' hasta el 3' final. Los primers se seleccionan en manera
tal que, cuando se forman las dos nuevas copias ellos se superponen ("overlap")
en la región de interés.
Estos "primers" son universales, es decir que anillan ( y por lo tanto
permiten la copia...) del gen del ARN ribosómico 16S de cualquier bacteria
(excepto quizás las mas inusuales). Esto es porque las secuencias a los cuales se
"pega" el primer son extremadamente similares entre las especies bacterianas
(secuencias altamente conservadas).
CUALES SON LOS PASOS PARA REALIZAR UNA PCR LA TECNICA PCR
El método se basa, en su forma más simple en la realización de tres
reacciones sucesivas llevadas a cabo a distintas temperaturas. Estas reacciones se
repiten cíclicamente entre veinte y cuarenta veces.
1ª Desnaturalización del ADN doble cadena
2ª Hibridación de los iniciadores a la zona 3´ específica de cada una de las hebras
3ª Extensión del cebador por actuación de la DNA polimerasa
En la primera etapa (desnaturalización) la doble hélice de ADN se separa en dos
hebras. Para ello se realiza una incubación de la muestra a altas temperaturas
(93-97ºC). La renaturalización se producirá cuando la temperatura disminuya.
En el segundo paso (hibridación) los cebadores se unen a las zonas 3´
complementarias que flanquean el fragmento que queremos amplificar. Se realiza
gracias a la bajada de la temperatura (50-65º C)

3. En la tercera etapa (elongación) se produce la síntesis de una cadena sencilla
(produciéndose un fragmento de doble cadena por la complementariedad) en la
dirección 5´-> 3´ mediante la enzima DNA polimerasa, la cual incorpora los
desoxinucleótidos fosfato presentes en el medio siguiendo la cadena molde.
PARA QUE SIRVE?
• Huella genética
• Test de Paternidad
• Diagnóstico de enfermedades hereditarias
• Clonación de genes
• Mutagénesis
• Análisis de ADN fósil
• Genotipo de mutaciones específicas
BIBLIOGRAFIA
 Diccionario Mosby medicina, enfermería y ciencia de la salud. Quinta
edición © 2000 Ediciones Harcourt, S.A.
 http://www.cienciahoy.org.ar/hoy23/reaccion.htm
 http://free-news.org/cjohns02.htm
 http://es.wikipedia.org/wiki/Cebador
 http://www.biologia.edu.ar/bacterias/identificacion/2.htm