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UNIDAD IIUNIDAD II
MANEJO DE LOSMANEJO DE LOS
CULTIVOSCULTIVOS
MICROBIOLOGICOSMICROBIOLOGICOS
COMPOSICIÓN QUÍMICA DECOMPOSICIÓN QUÍMICA DE
MICROORGANISMOSMICROORGANISMOS
AGUA: 80 – 90% (FORMASAGUA: 80 – 90% (FORMAS
VEGETATIVAS)VEGETATIVAS)
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(PROTEÍNAS, ÁCIDOS NUCLEICOS,(PROTEÍNAS, ÁCIDOS NUCLEICOS,
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ELEMENTOS PRINCIPALESELEMENTOS PRINCIPALES
MACROELEMENTOS: C, O, H, N, P, S,
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AUTOTROFOSAUTOTROFOS: USAN CO: USAN CO22 COMO ÚNICACOMO ÚNICA
O PRINCIPAL FUENTE DE CO PRINCIPAL FUENTE DE C
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Presentacion 2

  • 1. UNIDAD IIUNIDAD II MANEJO DE LOSMANEJO DE LOS CULTIVOSCULTIVOS MICROBIOLOGICOSMICROBIOLOGICOS
  • 2. COMPOSICIÓN QUÍMICA DECOMPOSICIÓN QUÍMICA DE MICROORGANISMOSMICROORGANISMOS AGUA: 80 – 90% (FORMASAGUA: 80 – 90% (FORMAS VEGETATIVAS)VEGETATIVAS) MATERIA SECA:MATERIA SECA: MACROMOLÉCULASMACROMOLÉCULAS (PROTEÍNAS, ÁCIDOS NUCLEICOS,(PROTEÍNAS, ÁCIDOS NUCLEICOS, LÍPIDOS, POLISACÁRIDOS)LÍPIDOS, POLISACÁRIDOS) PRECURSORES DEPRECURSORES DE MACROMOLÉCULASMACROMOLÉCULAS
  • 3. ELEMENTOS PRINCIPALESELEMENTOS PRINCIPALES MACROELEMENTOS: C, O, H, N, P, S, Ca, K, Fe, Mg OLIGOELEMENTOS: Zn, Mn, Co, Cu, Ni, Mo, Se
  • 4. AUTOTROFOSAUTOTROFOS: USAN CO: USAN CO22 COMO ÚNICACOMO ÚNICA O PRINCIPAL FUENTE DE CO PRINCIPAL FUENTE DE C HETEROTOFOSHETEROTOFOS: USAN SUSTANCIAS: USAN SUSTANCIAS ORGÁNICAS PREFORMADASORGÁNICAS PREFORMADAS REDUCIDASREDUCIDAS UTILIZACIÓN DE CARBONOUTILIZACIÓN DE CARBONO
  • 5. FACTORES DE CRECIMIENTOFACTORES DE CRECIMIENTO COMPUESTOS ORGÁNICOSCOMPUESTOS ORGÁNICOS NECESARIOS COMO PRECURSORESNECESARIOS COMO PRECURSORES QUE NO PUEDEN SER SINTETIZADOSQUE NO PUEDEN SER SINTETIZADOS AMINOÁCIDOS, PURINAS Y PIRIMI-AMINOÁCIDOS, PURINAS Y PIRIMI- DINAS, VITAMINAS (COFACTORES)DINAS, VITAMINAS (COFACTORES) SUMINISTRADOS EN MEZCLASSUMINISTRADOS EN MEZCLAS COMPLEJASCOMPLEJAS
  • 6. CULTIVO DE ORGANISMOSCULTIVO DE ORGANISMOS PROVEER UN MEDIO ADECUADO PARAPROVEER UN MEDIO ADECUADO PARA EL CRECIMIENTOEL CRECIMIENTO OBTENER UN CULTIVO PUROOBTENER UN CULTIVO PURO
  • 7. MEDIOS DE CULTIVOMEDIOS DE CULTIVO MEDIOS SINTÉTICOS O DEFINIDOS: SEMEDIOS SINTÉTICOS O DEFINIDOS: SE CONOCE LA COMPOSICIÓN QUÍMICA YCONOCE LA COMPOSICIÓN QUÍMICA Y CANTIDADES DE COMPONENTESCANTIDADES DE COMPONENTES MEDIOS COMPLEJOS: CONTIENENMEDIOS COMPLEJOS: CONTIENEN ALGUNOS COMPONENTES DEALGUNOS COMPONENTES DE COMPOSICIÓN QUÍMICA NO TOTAL-COMPOSICIÓN QUÍMICA NO TOTAL- MENTE DEFINIDAMENTE DEFINIDA
  • 9. MEDIOS COMPLEJOSMEDIOS COMPLEJOS SIMPLES: BAJOS REQUERIMIENTOSSIMPLES: BAJOS REQUERIMIENTOS ENRIQUECIDOS: ADICIÓN DE SANGRE,ENRIQUECIDOS: ADICIÓN DE SANGRE, SUERO, etc.SUERO, etc. SELECTIVOS: FAVORECEN ELSELECTIVOS: FAVORECEN EL CRECIMIENTO DE ALGUNOS TIPOS DECRECIMIENTO DE ALGUNOS TIPOS DE ORGANISMOSORGANISMOS DIFERENCIALES: DESTACAN CARACTE-DIFERENCIALES: DESTACAN CARACTE- RÍSTICAS PROPIAS DE UN ORGANISMORÍSTICAS PROPIAS DE UN ORGANISMO
  • 10. CULTIVOS PUROSCULTIVOS PUROS OBTENCIÓN DE COLONIAS AISLADASOBTENCIÓN DE COLONIAS AISLADAS PLACAS DE PETRIPLACAS DE PETRI MEDIOS SÓLIDOS: AGAR AL 1,5%MEDIOS SÓLIDOS: AGAR AL 1,5% UN ORGANISMO DA ORIGEN A UNAUN ORGANISMO DA ORIGEN A UNA COLONIACOLONIA
  • 11. SIEMBRA DE MICROORGANISMOSSIEMBRA DE MICROORGANISMOS EN PLACA POR ESTRÍAEN PLACA POR ESTRÍA EN PLACA EN SUPERFICIE O POREN PLACA EN SUPERFICIE O POR EXTENSIÓNEXTENSIÓN EN PROFUNDIDAD O POR VERTIDOEN PROFUNDIDAD O POR VERTIDO
  • 14. EFECTO DE FACTORESEFECTO DE FACTORES AMBIENTALESAMBIENTALES TEMPERATURATEMPERATURA ACIDEZ Y ALCALINIDAD (pH)ACIDEZ Y ALCALINIDAD (pH) NECESIDADES DE OXÍGENONECESIDADES DE OXÍGENO PRESIÓN OSMÓTICAPRESIÓN OSMÓTICA
  • 15. TEMPERATURATEMPERATURA INFLUENCIA VELOCIDAD DEINFLUENCIA VELOCIDAD DE REACCIONES ENZIMÁTICASREACCIONES ENZIMÁTICAS TEMPERATURAS “CARDINALES”TEMPERATURAS “CARDINALES” MÍNIMA, ÓPTIMA, MÁXIMAMÍNIMA, ÓPTIMA, MÁXIMA
  • 16. CLASIFICACIÓNCLASIFICACIÓN PSICRÓFILOS (0º - 15º - 20º)PSICRÓFILOS (0º - 15º - 20º) PSICRÓFILOS FACULTATIVOS:PSICRÓFILOS FACULTATIVOS: CRECEN A 0º, MÁXIMA ENTRE 20-30º YCRECEN A 0º, MÁXIMA ENTRE 20-30º Y RESISTEN HASTA 40ºCRESISTEN HASTA 40ºC RESPONSABLES DE PUTREFACCIÓNRESPONSABLES DE PUTREFACCIÓN DE ALIMENTOS REFRIGERADOSDE ALIMENTOS REFRIGERADOS
  • 17. CLASIFICACIÓN MESÓFILOS: RANGO ENTRE 15 Y 45ºCMESÓFILOS: RANGO ENTRE 15 Y 45ºC (MAYORÍA DE PATÓGENOS DE(MAYORÍA DE PATÓGENOS DE ANIMALES Y HOMBRE)ANIMALES Y HOMBRE) TERMÓFILOS: ÓPTIMA POR ENCIMATERMÓFILOS: ÓPTIMA POR ENCIMA DE 45ºC Y MÁXIMA SUPERIOR A 65ºCDE 45ºC Y MÁXIMA SUPERIOR A 65ºC
  • 19. ACIDEZ Y ALCALINIDAD MAYORÍA ENTRE pH 4 y 9 (ÓPTIMO 7)MAYORÍA ENTRE pH 4 y 9 (ÓPTIMO 7) HONGOS: 4,5 – 6HONGOS: 4,5 – 6 BACTERIAS ACIDÓFILAS (BACTERIAS ACIDÓFILAS (ThiobacillusThiobacillus)) y ALCALÓFILAS (y ALCALÓFILAS (BacillusBacillus)) REGULACIÓN CON BUFFERS ENREGULACIÓN CON BUFFERS EN MEDIOS DE CULTIVOMEDIOS DE CULTIVO
  • 20. RELACIÓN CON EL ORELACIÓN CON EL O22 AEROBIO ESTRICTO: DEPENDE PORAEROBIO ESTRICTO: DEPENDE POR COMPLETO DEL OCOMPLETO DEL O22 ATMOSFÉRICOATMOSFÉRICO MICROAERÓFILO: REQUIERE MENORMICROAERÓFILO: REQUIERE MENOR CONCENTRACIÓN DE OCONCENTRACIÓN DE O22 (<21%)(<21%) ANAEROBIO ESTRICTO: NO TOLERANANAEROBIO ESTRICTO: NO TOLERAN PRESENCIA DE OPRESENCIA DE O22
  • 21. RELACIÓN CON EL ORELACIÓN CON EL O22 ANAEROBIOS FACULTATIVOSANAEROBIOS FACULTATIVOS ANAEROBIOS AEROTOLERANTESANAEROBIOS AEROTOLERANTES CRECIMIENTO EN EL LABORATORIOCRECIMIENTO EN EL LABORATORIO (CULTIVOS AIREADOS, JARRA DE(CULTIVOS AIREADOS, JARRA DE ANAEROBIOS, etc.)ANAEROBIOS, etc.)
  • 22. JARRA DE ANAEROBIOSJARRA DE ANAEROBIOS
  • 23. SOLUTOS Y PRESIÓN OSMÓTICASOLUTOS Y PRESIÓN OSMÓTICA AMBIENTES DILUIDOSAMBIENTES DILUIDOS ALTA CONCENTRACIÓN DE SOLUTOS:ALTA CONCENTRACIÓN DE SOLUTOS: PLASMÓLISIS (MÉTODO DEPLASMÓLISIS (MÉTODO DE CONSERVACIÓN DE ALIMENTOS)CONSERVACIÓN DE ALIMENTOS) ORGANISMOS HALÓFILOSORGANISMOS HALÓFILOS
  • 24. CRECIMIENTO MICROBIANOCRECIMIENTO MICROBIANO CRECIMIENTO EQUILIBRADOCRECIMIENTO EQUILIBRADO:: AUMENTOAUMENTO DEL NÚMERO DE INDIVIDUOS DE UNADEL NÚMERO DE INDIVIDUOS DE UNA POBLACIÓN CONCURRENTE CON ELPOBLACIÓN CONCURRENTE CON EL AUMENTO DE SUS CONSTITUYENTESAUMENTO DE SUS CONSTITUYENTES QUÍMICOSQUÍMICOS DUPLICACIÓN DEL NÚMERO DEDUPLICACIÓN DEL NÚMERO DE CÉLULAS Y DE LA BIOMASACÉLULAS Y DE LA BIOMASA
  • 25. CRECIMIENTO MICROBIANOCRECIMIENTO MICROBIANO DIVISIÓN: FISIÓN BINARIA O BIPARTI-DIVISIÓN: FISIÓN BINARIA O BIPARTI- CIÓN (BACTERIAS) Y GEMACIÓNCIÓN (BACTERIAS) Y GEMACIÓN (LEVADURAS)(LEVADURAS) TIEMPO DE GENERACIÓN:TIEMPO DE GENERACIÓN: DUPLICACIÓN DE LA POBLACIÓNDUPLICACIÓN DE LA POBLACIÓN MICROBIANAMICROBIANA
  • 26. CURVA DE CRECIMIENTOCURVA DE CRECIMIENTO TIEMPO Log CÉL.Log CÉL. VIABLESVIABLES LATENCIA EXPONENCIALEXPONENCIAL ESTACIONARIAESTACIONARIA MUERTEMUERTE
  • 27. FASE DE LATENCIAFASE DE LATENCIA LATENCIA: ADAPTACIÓN AL MEDIO,LATENCIA: ADAPTACIÓN AL MEDIO, ORGANISMOS METABÓLICAMENTEORGANISMOS METABÓLICAMENTE ACTIVOSACTIVOS DEPENDE DE EDAD DEL INÓCULO YDEPENDE DE EDAD DEL INÓCULO Y DIFERENCIA ENTRE EL MEDIO DEDIFERENCIA ENTRE EL MEDIO DE CULTIVO DE PROCEDENCIA Y EL NUEVOCULTIVO DE PROCEDENCIA Y EL NUEVO
  • 28. FASE EXPONENCIALFASE EXPONENCIAL CRECIMIENTO EQUILIBRADO ACRECIMIENTO EQUILIBRADO A VELOCIDAD CONSTANTEVELOCIDAD CONSTANTE DEPENDE DE CONDICIONESDEPENDE DE CONDICIONES AMBIENTALES Y CARACTERÍSTICASAMBIENTALES Y CARACTERÍSTICAS INTRÍNSECASINTRÍNSECAS
  • 29. FASE ESTACIONARIAFASE ESTACIONARIA AGOTAMIENTO DE NUTRIENTESAGOTAMIENTO DE NUTRIENTES ESCENCIALESESCENCIALES ACUMULACIÓN DE PRODUCTOS DEACUMULACIÓN DE PRODUCTOS DE DESECHO METABÓLICODESECHO METABÓLICO NO SE APRECIA INCREMENTO NETO DENO SE APRECIA INCREMENTO NETO DE LA POBLACIÓNLA POBLACIÓN
  • 30. FASE DE MUERTEFASE DE MUERTE FALTA DE ENERGÍA PARAFALTA DE ENERGÍA PARA MANTENIMIENTO CELULARMANTENIMIENTO CELULAR DISMINUCIÓN DEL NÚMERO DEDISMINUCIÓN DEL NÚMERO DE CÉLULAS DEL CULTIVOCÉLULAS DEL CULTIVO VELOCIDAD EXPONENCIALVELOCIDAD EXPONENCIAL GENERALMENTE LISIS CELULARGENERALMENTE LISIS CELULAR
  • 31. CULTIVO CONTÍNUOCULTIVO CONTÍNUO POBLACIÓN MICROBIANA CRECIENDOPOBLACIÓN MICROBIANA CRECIENDO EN UN RECIPIENTE DE VOLUMENEN UN RECIPIENTE DE VOLUMEN CONSTANTE AL QUE SE AÑADE MEDIOCONSTANTE AL QUE SE AÑADE MEDIO FRESCO Y SE QUITA MEDIO USADOFRESCO Y SE QUITA MEDIO USADO QUIMIOSTATO Y TURBIDOSTATOQUIMIOSTATO Y TURBIDOSTATO
  • 32. MEDICIÓN DEL CRECIMIENTOMEDICIÓN DEL CRECIMIENTO RECUENTO DE CÉLULAS TOTALES:RECUENTO DE CÉLULAS TOTALES: CÁMARAS DE RECUENTO, RECUENTOCÁMARAS DE RECUENTO, RECUENTO ELECTRÓNICOELECTRÓNICO RECUENTO DE CÉLULAS VIABLES: ENRECUENTO DE CÉLULAS VIABLES: EN MEDIO SÓLIDO (PROFUNDIDAD OMEDIO SÓLIDO (PROFUNDIDAD O SUPERFICIE)SUPERFICIE)
  • 33. MEDICIÓN DE MASA CELULAR DETERMINACIÓN DEL PESO SECO ODETERMINACIÓN DEL PESO SECO O HÚMEDO DE LA CÉLULAS ENHÚMEDO DE LA CÉLULAS EN VOLUMEN FIJO DEL CULTIVOVOLUMEN FIJO DEL CULTIVO CENTRIFUGACIÓN O FILTRACIÓN PORCENTRIFUGACIÓN O FILTRACIÓN POR MEMBRANAMEMBRANA
  • 34. MEDICIÓN INDIRECTA TURBIDEZ: MEDICIÓN DE ABSORBANCIATURBIDEZ: MEDICIÓN DE ABSORBANCIA O DENSIDAD ÓPTICA (DO)O DENSIDAD ÓPTICA (DO) DO: PROPORCIONAL A LADO: PROPORCIONAL A LA CONCENTRACIÓN DE PARTÍCULASCONCENTRACIÓN DE PARTÍCULAS OTRAS: PRODUCCIÓN DE ÁCIDO O GASOTRAS: PRODUCCIÓN DE ÁCIDO O GAS EN ORGANISMOS FERMENTADORESEN ORGANISMOS FERMENTADORES