1. CINÉTICA DE ENZIMAS

2. Parámetros enzimáticos
1. Km (constante de Michaelis-Menten para cada enzima) =
concentración de S a la que la V es 1/2 Vmax. Es una medida de
la afinidad del enzima por el S. Cuanto menor es Km, mayor es
la afinidad del enzima por el S.
2. Kcat (constante para cada enzima) = número de recambio =
número de moléculas de sustrato convertidas en producto por
molécula de enzima y unidad de tiempo, en condiciones de
saturación de sustrato.
3. Vmax = velocidad máxima teórica = la velocidad cuando todos los
centros activos están ocupados con sustrato (nunca alcanzada
en la realidad)
4. Unidad de enzima = cantidad de enzima que transforma 1 µmol
de sustrato por min = una forma común de expresar la
velocidad
5. Actividad específica = unidades por mg de proteína total de la
preparación enzimática. En el caso de enzimas en suero:
unidades/L = U/L. Unidad más moderna: kat = nmoles de

3. Cinética de enzimas
El estudio de una actividad enzimática puede hacerse a través de
modelos matemáticos que permiten describir el comportamiento de una
reacción, considerando parámetros de concentración de sustrato, de
enzima y participación de moduladores (activadores o inhibidores).
Una reacción enzimática más simple contempla la unión de la enzima a
su sustrato para formar un complejo enzima-sustrato:
Cada etapa de la reacción está gobernada por constantes cinéticas o
constantes de velocidad: k1, k2, k3, k4
Pueden ser enzimas con uno o más sitios activos.
E + S ES E + PE + S ES E + P
k1 k3
k2 k4

4. Michaelis y Menten describieron un modelo cinético que describe una
curva parabólica de velocidad de reacción, en relación a la concentración
de sustrato.
En este tipo de curva de reacción, la enzima presenta una primera
componente que es proporcional a la concentración de sustrato (parte
lineal de la curva V/[S]) y una segunda componente que tiende hacia su
Vmax, donde la velocidad se hace independiente de la [S] (plateau de la
curva)

5. Ecuación de Michaelis-Menten
Cuando la [S] es <<< Km la velocidad de la reacción es proporcional a la [S]:
V0 =
Vmax
Km
x [S]
Cuando la [S] es >>> Km la velocidad de la reacción se acerca a la Vmax:
V0 = Vmax
Parte lineal de la curva
Plateau de la curva

6. No todas las enzimas cumplen con esta cinética michaeliana. Existen
otras cuya velocidad de reacción describe una curva sigmoidea que indica
que:
La unión de una molécula de sustrato en un sitio activo influye en la unión
de otra molécula de sustrato en un segundo sitio activo y así
sucesivamente.

7. Para enzimas con unión de moduladores:
Una enzima con cinética sigmoidea puede pasar a cinética
michaeliana en presencia de activadores o acentuar su
comportamiento original en presencia de inhibidores.

11. Ecuación de Lineweaver-Burk
Gráfico de dobles recíprocos

12. Gráfico de dobles recíprocos 1/V versus 1/[S]

13. Inhibiciones de la actividad enzimática
Inhibición competitiva
El inhibidor se une al sitio activo de la enzima, compitiendo con el sustrato e
impidiendo su unión. Si se aumenta la concentración de sustrato, el inhibidor
puede ser desplazado del sitio activo. Por lo tanto, se afecta la Km de la
enzima y la Vmax se mantiene.

14. Inhibición competitiva en un gráfico de dobles recíprocos.
Km aumenta
Vmax se mantiene

15. Inhibición acompetitiva
El inhibidor se une a un sitio diferente al sitio activo afectando la catálisis.
La Km se mantiene y la Vmax disminuye.

16. Inhibición acompetitiva en un gráfico de dobles recíprocos.
Km se mantiene
Vmax disminuye

17. El inhibidor, I, se puede unir ya sea a E o a ES. Varía tanto Km
como Vmax
Inhibición Mixta