Ley de Beer

1. Departamento de Biotecnología y Ciencias Alimentarias
Comprobación Experimental de la Ley De Beer Y Selección
De Longitud De Onda De Análisis Por Espectrofotometría.
M. En C. Roberto García Rodríguez
Martes/ 10:00am – 1:00pm
Equipo #4:
Jesús Córdova 163563
Hildeliza Vega Vega 166037
David Fragozo 159144
Marisol Badilla 164898
Bernardo Flores 165174
Ana
19/09/2017Ciudad Obregón, Son, Mex.

2. Objetivo
• Aprender el Manejo de un espectrofotómetro determinando la
longitud de onda de análisis, para obtener una curva de calibración
de un sistema coloreado para comprobar la ley de Beer, en
diferentes analitos de interés.

3. Introducción
• La ley fundamental que rige la fotometría de la absorción se le
llama ley de Beer.
• Cuando un haz de luz monocromática que se transmite en planos
paralelos, penetra a un medio absorbente ángulos rectos con las
superficies planas y paralelas al medio, la disminución de su poder
de radiación con respecto al trayecto lumínico b, con la
concentración del material absorbente c, sigue una proyección
exponencial.
T= Transmitancia
A= Absorbancia
P= Energía restante al pasar
el material absorbente.
P0 = Energía de un haz de
energía(rayo incidente).

4. Ley de Lambert-Beer
• La Absorbancia de una especie en solución homogénea es
directamente proporcional a su actividad óptica, longitud del paso
óptico y su concentración. Es una relación empírica que relaciona
la absorción de luz con las propiedades del material atravesado.
Establece que la absorbancia es proporcional al número de
moléculas absorbentes.
A= 3CI
• A= Absorbancia
• C= Concentración
• I= Longitud de la Celda.
• 3= Coeficiente de extinción o absortividad molar.

5. Materiales y Reactivos
Materiales Reactivos
1 gradilla
12 tubos de ensayo 18x150 mm
4 pipetas graduadas de 1 ml
1 pipeta graduada de 5 ml
2 pipetas graduadas de 10 ml
1 vaso de precipitado de 250 ml
1 vaso de precipitado de 150 ml
1 probeta de 50 ml
1 matraz Erlenmeyer de 250 ml
1. matraces volumétricos de 100 ml
1 matraz volumétrico de 500 ml
1 matraz volumétrico de 1000 ml
1 embudo de vidrio
1 agitador de vidrio
1 espátula
1 tripié
1 tela de asbesto
1 mechero Bunsen
1 papel filtro Watman No. 1
5 tiras de papel indicador
1 Espectrofotómetro
2 celdas de vidrio
0.0702 g sulfato ferroso amoniacal
0.2 ml ácido sulfúrico
10 g clorhidrato de hidroxilamina ó de
ácido ascórbico
16.5 g acetato de sodio
11.5 ml ácido acético glacial
0.5 g orto-fenantrolina.
1 ml Hidróxido de amonio (1:10)
5 g de fenol
50 ml de ácido sulfúrico
5 g de ácido dinitrosalicílico
100 ml de hidróxido de sodio 2N (8 g )
150 g de sal de Rochelle

6. Procedimiento
Pesar 0.1520g de cal
Se calienta hasta sequedad en
una campana
Se solubiliza el residuo con 40 ml
de agua destilada y se filtra en
papel de poro mediano
Realizar 3 lavados y agregarlos al
filtrado
Transferir a un vaso de precipitado
de 150 ml y añadir unas gotas de
HCL

7. Medir el PH que debe ser entre 5
y 7 aproximadamente
Se afora a 100 ml, transferir una
alícuota de 10 ml a un tubo de ensaye
La solución obtenida anteriormente y la serie de soluciones tipo se
tratan con 0.2 ml de solución amortiguadora , 0.2 ml de solución
reductora y 0.2 ml de solución de fenantrolina 1-10
Se agitan los tubos después de añadir los reactivos y
se deja reposar 10 minutos.
Se procede a obtener las lecturas de las soluciones
con el espectrofotómetro previamente calibrado
con la solución de 0 mg de Fe.
Con la solución de menor concentración medir la
absorbancia contra la longitud de onda entre el rango
de 400-600 nm en el espectrofotómetro

8. Cálculos y Resultados
• Concentración (Ppm):
0.01mg de Fe/ml = C1 = Solución
Patrón
V1·C1 = V2·C2
C2 = V1·C1/ V2
Ppm = mg/L = (mg/ml)(1000)
Ppm = (C2)(1000)
Ppm = (V1·C1/ V2)(1000)
V1 V2 Concentración
1ml 10ml 1ppm
2ml 10ml 2ppm
3ml 10ml 3ppm
4ml 10ml 4ppm
5ml 10ml 5ppm
6ml 10ml 6ppm
7ml 10ml 7ppm
8ml 10ml 8ppm
9ml 10ml 9ppm
10ml 10ml 10ppm

9. Estimación de longitud de onda de la solución estándar
A, 0.048
A, 0.11
A, 0.139
A, 0.174
A, 0.206
A, 0.22 A, 0.215
A, 0.121
A, 0.06
A, 0.027
A, 0.017
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600
A
Λ
PICO DE LONGITUD DE ONDA
A

10. Comprobación de la Ley de Lambert-Beer con solución estandar
0.271
0.531
0.77
1.015
1.274
1.448
1.32
y = 0.1959x + 0.1634
R² = 0.92384
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
1.6
1.8
1ppm 2ppm 3ppm 4ppm 5ppm 6ppm 7ppm
A
Λ
ABSORBANCIA CONTRA
CONCENTRACIÓN
Series1
Linear (Series1)

11. Concentración de cal
λ = 510nm
Con. = 0.152g/100ml
Ppm = C·1000
Ppm = (0.00152g/ ml)(1000)
Ppm = 1.52ppm
A A prom. Conc.
0.170
0.1583 1.520.155
0.150

12. Conclusiones
Se logró el objetivo de la práctica , construir una curva
de calibración de la absorbancia contra la
concentración para comprobar la ley de Beer.
Así mismo, se aprendió a utilizar el espectrofotómetro
que nos ayudo a obtener la longitud de onda máxima
de un analito.

13. Bibliografía
• https://es.slideshare.net/jasd27/ley-de-beer