1) El documento describe las características y métodos de identificación de las enterobacterias, en particular del género Salmonella. 2) Entre las características más importantes de las enterobacterias se encuentran que son bacilos gram negativos, aerobios o facultativos, móviles o inmóviles, y fermentan hidratos de carbono produciendo ácido y gas. 3) La identificación de enterobacterias requiere pruebas bioquímicas y el uso de medios selectivos como agar MacConkey y XLD después del aislamiento

1. METODOS Y TECNICAS DE
MICROBIOLOGIA I
Clase 11

2. ENTEROBACTERIAS
• Gran familia de bacilos o cocobacilos Gram-
Aerobios y/o Anaerobios facultativos.

3. CLASIFICACION
• Familia (Sección VIII): Enterobacteriaceae y
Vibrionaceae, normalmente la clasificación esta
en función de los caracteres en las pruebas
bioquímicas.
• Así como su propiedades antigénicas.
• Las CARACTERÍSTICAS mas importantes son:
1. Bacilos o cocobacilos Gram –
2. Aerobios y Anaerobios facultativos

4. 3. De 1 a 4 micra de longitud.
4. Pueden ser móviles (peritrica) o inmóviles
5. No producen Citocromo Oxidasa
6. Fermentan de los hidratos de carbono en todos los
casos, presentan metabolismo fermentativo-
oxidativo.
7. Reducen los nitratos a nitritos
8. Fermentan otros azucares y alcoholes produciendo
acido y gas.
9. Pueden producir algunos SH2 (Proteus)
10. Otros producen Indol como la E. coli (Identificación)
11. Semejante a las Vibrionaceae
12. Pueden producir gran cantidad de fermentos
(gelatinasas, descarboxilasas, ureasas, galactoxidasas
y desaminasas).

5. Donde las encontramos:
• Huéspedes normal del tracto gastrointestinal
• Algunos son patógenos de virulencia variable
• Son saprofitos de la flora gastrointestinal y
cuando el huésped se lo permite convirtiéndose
en oportunistas.
• En algunas también se les puede encontrar en el
agua, plantas y en el suelo.

6. CARACTERISTICAS ANTIGENAS
• Se sabe que existen distintos antígenos
asociados.
• Antígeno somático o antígeno O, son
termoestables ligados a la pared de la bacteria,
esta es una endotoxina (poder antígeno)al igual
que la parte lipídica responsable de la toxicidad.
• Antígeno capsular o antígeno K, se encuentra en
la capsula con propiedades antifagocitarias
• Antígeno flagelar o antígeno H, en cepas
móviles, de carácter proteico que le da el carácter
bacteriano.

7. • ENDOTOXINA: Son productos toxicos que no
son vertidos al medio externo pero son
responsables en muchos casos de alteraciones
vasculares y fiebre.
• ENTEROTOXINAS: Son productos tóxicos que
son vertidos al medio externo ejerciendo una
acción altamente toxica y directa sobre las
células, ejm. Shigella y E. coli responsable a
nivel de epitelio intestinal.

9. ESPECIE EFECTO PATOGENO HABITAT
Shigella sonnei Disentería bacilar Hombre
Escherichia coli Patógeno producción de
diarrea
Hombre
Salmonella tiphy Fiebre tifoidea Hombre
Salmonella enteritidis Gastroenteritis Hombre
Klebsiella sp. Patógeno oportunista Hombre
Enterobacter aerogenes Patógeno oportunista Hombre
Citrobacter sp. Patógeno oportunista Hombre
Serratia Patógeno oportunista Hombre

10. FLORA ENTERICA: E. coli, Klebsiella, Proteus,
Enterobacter.
PATOGENOS PRIMARIOS
 INFECCIONES SISTEMICAS: Yersenia pestis
Salmonella
 ENTERITIS: E. coli
Salmonella
Shigella
 INFECCIONES URINARIAS: E. coli, Klebsiella, Proteus
 HERIDAS: E. coli, Klebsiella
 RESPIRATORIAS: Klebsiella pneumoniae
INFECCIONES NOCOSOMIALES: Enterobacter, Serratia y
E. coli.

11. CAPACIDAD DE LA FERMENTACION DE
LA LACTOSA
ENTEROBACTERIAS FERMENTADORAS RAPIDAS
(COLIFORMES) :
• Escherichia, Enterobacter y Klebsiella
ENTEROBACTERIAS FERMENTADORAS LENTAS DE
LACTOSA (COLIFORMES)
• Citrobacter, Yersenia, Hafnia y Shigella sonnei
ENTEROBACTERIAS NO FERMENTADORQS (NO
COLIFORMES)
• Salmonella, Shigella, Proteus, Morganella,
Providencia y Edwardsiella.

12. MODOS DE IDENTIFICACION DE
ENTEROBACTERIAS
• Es necesario partir de pruebas directas, un
aislamiento en medio de cultivo y una
identificación bacteriana a través de pruebas
bioquímicas.
• Tras recoger la muestra se realiza una prueba
directa como la TINCION GRAM que en caso sea
positivo deberá ser Gram –
• Luego pasamos a cultivos específicos que incluye
medios selectivos que inhiban el crecimiento de
bacterias Gram +

13. MEDIOS USADOS PARA
ENTEROBACTERIAS
a) Medio EMB (eosina azul de metileno)
b) Medio agar o caldo de McCONKEY
c) Medio XLD (xilosa-lisina-desoxicolato)
patógenos
d) Medio Wilson-Blair para salmonella
e) Medio SS (aislamiento de salmonella
Shigella)
f) Medio agar lactosado con purpura de
bromocresol (aislar coliformes)

14. g) Medio caldo bilis y verde brillante (aislar
coliformes).
h) Medio agar desoxicolato-citrato-lactosa-
sacarosa (DCLS) (aislar salmonella-shigella)
i) Agar desoxicolato-citrato para
enterobacterias patógenas.
j) Medio agar endo y Medio agar Hektoen
(aislar enterobacterias patogena).
k) Caldo selenito F, (aislar salmonella)

15. Agar Sulfito Bismuto : SB Agar Salmonella-Shigella : SS
Agar Xilosa, Lisina, Desoxicolato: XLD
Agar XLD

16. Agar Eosina Azul de Metileno: EMB. Agar Rojo de Violeta con Bilis
y Dextrosa,: VRBD.
Agar Mac Conkey: MC

17. Las pruebas bioquímicas de enterobacterias
oxida
sa
Indol Rojo
metilo
Citrato SH2 Ureasa Mov.
22ºC
Gela
-tina
Lisina Argini-
na
Escherichia - + + - - - +/- - d d
Shigella - +/- + - - - - - - +/-
Edwardsie lla - + + - + - + - + -
Salmonella - - + d + - + - + +
Arizona - - + + + - + + + +
Citrobacter - - + + +/- d + - - d
Klebsiella - +/- - + - + - - + -
Enterobacter - - - + - - + +/- + -
Serratia - - +/- + - d + + + -
Proteus
vulgaris
- + + d + + + + - -

18. Orniti
na
Fenila
lanina
Gas Sorbi
tol
Lacto
sa
Inosi
tol
Rafio
sa
Ram
nosa
Arabi
nosa
Mani
tol
Escherichia D - + + + - D D + +
Shigella D - - D - - D D D +/-
Edwardsiella + - + - - - - - - -
Salmonella + - + + - D - + + +
Arizona + - + + D - - + + +
Citrobacter D - + + D - D + + +
Klebsiella - - + + + + + + + +
Enterobacter + - + + + + + + + +
Serratia + - + + +/- D - - - -
Proteus
vulgaris
- + +/- - - +/- - - - d

20. GENERO SALMONELLA
• Características:
a) Son GRAM -
b) Móviles con flagelación peritrica (no pertenece al
grupo de los coliformes)
c) No fermenta la lactosa
d) No produce desaminasas
e) Carácter mas o menos patógeno.
f) Forma bacilar.
g) Provoca infecciones febriles de carácter entérico,
tipo gastrointestinal o enterocolitis , fiebre tifoidea
o paratifoideas.

21. ACCION PATOGENA :
• El genero Salmonella es característico el antígeno
de pared o antígeno O, al antígeno H o flagelar y
el antígeno VI que es un antígeno termolábil de la
S. typhy y s. paratyphi, le confiere un poder
protector frente a los ácidos y antifagocitarias.
• Presentan ENDO Y EXO toxinas responsables de
efecto irritante y citotóxico sobre el tracto
intestinal.

22. • GENEROS SALMONELLA PATOGENOS AL
HOMBRE:
S. typhi
S. Paratyphi A y B
S. enteritidis
 QUE GENERAN:
• Infecciones entéricas, tipo fiebres tifoideas o
paratifoideas, que pueden producir septicemias y
se localizan en las vísceras.
• Infecciones gastrointestinales, tipo gastroenteritis
o enterocolitis.

23. TEST DE WIDAL PARA SALMONELLA
• La reacción de Widal demuestra la presencia
de anticuerpos aglutinantes (aglutininas)
contra los antígenos H (flagelar) u O
(somático) de la Salmonella typhi en el
suero de los pacientes con fiebre tifoidea.
• Los anticuerpos contra el antígeno
O aparecen luego de 6 a 8 días de iniciada
la enfermedad y
desaparecen posteriormente entre 3 y 6
meses.

24. • Los anticuerpos contra el antígeno
H aparecen a los 8 a 12 días,
alcanzando títulos más elevados con
respecto a los anti-O y pueden persistir
por más de 1 año. Los anticuerpos contra
el antígeno Vi aparecen más tardíamente,
a la tercera semana, sin embargo lo hacen
en títulos bajos 1:10-1:20 con respecto a
los previos

25. INTERPRETACIONES CLINICAS DE LAS
REACCIONES DE WIDAL
• Un diagnóstico de fiebre tifoidea puede
considerarse si los títulos iniciales se cuadruplican
entre una y cuatro semanas. Sin embargo,
el clínico no puede esperar este tiempo para
establecer un tratamiento.
• En general, hay que tener en cuenta la fiebre
tifoidea con títulos:
Anti-O≥1:160-200 y/o H≥160-200 en zonas
endémicas;
Anti-O ≥1:50-100 en zonas no endémicas, se debe
pensar con títulos más bajos .

26. REACCIONES SEROLOGICAS
Reacciones
bioquímicas
Reacciones
serológicas
Interpretación
TIPICA Antígeno O, VI o H
positivo
Cepas consideradas
como salmonella
TIPICA Todas las reacciones
positivas
TIPICA No probada Puede ser Salmonella
REACCIONES ATIPICAS Antígeno O, VI o H
positivo
REACCIONES ATIPICAS Todas las reacciones
negativas
No debe ser
consideradas salmonella

27. ENREQUECIMIENTO SELECTIVO DE
MEDIOS PARA SALMONELLA
• El enriquecimiento selectivo está destinado a
inhibir la flora acompañante. Al estar
adicionados de substancias químicas
inhibidoras y sumado a los tiempos y
temperatura de incubación óptimas permite su
desarrollo por sobre otros microorganismos, lo
que se confirma en los medios selectivos
elegidos o por otras pruebas de identificación.
• Normalmente el rango de Tº de incubación va
de 35ºC a 43ºC por períodos de 16 a 24 h.

28. • Comúnmente los
caldos selectivos
usados son selenito
con cistina (SC),
verde brillante,
tetrationato (TT), y el
caldo cloruro de
magnesio-verde
malaquita (RV)

29. COLONIAS TIPICAS DE SALMONELLA EN MEDIOS SOLIDOS SELECTIVOS
MEDIO SELECTIVO COLOR ANTES DE LA
INOCULACION
CARACTERISTICA DE LAS COLONIAS
Agar Verde Brillante
(VB)
Oscuro, color marrón Rosas o rojas pueden ser transparentes,
rodeadas de medio enrojecido. Las
bacterias fermentadoras de lactosa son
amarillas
Agar sulfito Bismuto
(SB)
Opaco, verde pálido Café, grises o negras; con o sin brillo
metálico . Algunas veces presencia de
halo café o negro
Agar Xilosa Lisina
(XLD)
Claro, color rojo brillante Rosas o rojas pueden ser transparentes,
con o sin centro negro. En algunos casos
completamente negras
Agar para salmonella
y Shigella (SS)
Claro, color rosa Translúcidas en ocasiones opacas.
Algunas con centro negro. Las colonias
fermentadoras de lactosa son rojas.
Agar entérico de
Hoktöen
Oscuro, color verde Verdes o azul verdes con o sin centro
negro. En algunos casos completamente
negras

30. IDENTIFICACION
• En los procedimientos de identificación
final es recomendable que los cultivos con
colonias poco aisladas o con variedad de
flora realizar un re-aislamiento en un agar
nutritivo y posteriormente sembrar en TSI
y LIA además de MIO.
• En general Salmonella es negativa a las
pruebas de, ureasa, indol, lactosa y sacarosa
y positiva a las pruebas de descarboxilación
de lisina y ornitina,

31. • También como generalmente producen H2S, pero
existen variantes atípicas con reacciones
positivas a lactosa o no descarboxilación de
lisina.

32. Identificación bioquímica de salmonella
MEDIO RESULTADO COLOR ANTES DE
INOCULAR/INCUBAR
COLOR DUSPUES DE
INOCULAR/INCUBAR
Klinger F. glucosa + NARANJA Fondo tubo amarillo crecimiento
Klinger F. Lactosa - NARANJA Pico de flauta naranja
crecimiento
Klinger GAS + NARANJA Salvo S. typhi presencia de gas
Klinger SH2 + NARANJA Ennegrecimiento crecimiento
Agar Lia F.glucosa + PURPURA SUAVE Fondo tubo amarillo crecimiento
Agar Lia H2S + PURPURA SUAVE Ennegrecimiento crecimiento
Medio SIM: Indol - AMARILLO TENUE
semisólido translucido
Con reactivo de Kovac’s
formación de anillo rojo superf.
Medio SIM: H2S + AMARILLO TENUE
semisólido translucido
Ennegrecimiento crecimiento
Medio SIM
movilidad
+ AMARILLO TENUE
semisólido translucido
Crecimiento en superficie y
picadura, turbiedad/difusion
fuera de la picadura

33. MEDIO RESULTAD
O
COLOR ANTES DE
INOCULAR/INCUBAR
COLOR DUSPUES DE
INOCULAR/INCUBAR
TSI FERMENTACION
GLUCOSA
+ ROJO/ROSADO amarillo en el fondo por
acidificación del medio
TSI
FERMENTADORA
LACTOSA
- ROJO/ROSADO Se observa un rojo mas intenso
por la no fermentación
TSI
FERMENTADORA
SACAROSA
- ROJO/ROSADO Se observa un rojo mas intenso
por la no fermentación
TSI H2S + ROJO/ROSADO Se observa cambio de color a
amarillo con colora
ennegrecida a lo largo de la
punción
PRUEBA DE
URERASA
+ ROJO/ROSADO Vire a purpura

35. FACTORES QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO,
MUERTE Y/O SOBREVIVENCIA DE
SALMONELLAS
El mínimo de pH es de 3.8. Cuando el pH excede el
óptimo, el crecimiento disminuye.

36. SOBREVIVENCIA DE LA SALMONELLA
• Aún cuando no forman esporas ellas sobreviven
largos períodos en alimentos y otros sustratos.
• En mantequilla mantenida entre temperatura de -
23ºC puede sobrevivir más allá de 10 semanas.
• En leche almacenada a temperatura ambiente
puede sobrevivir 6 meses.
• En vegetales sobrevive 28 días a 2º-4ºC y mucho
más a temperatura ambiente.
• Su sobrevida en chocolate deshidratado con aw
entre 0.32-0.41 puede prolongarse por meses y
sobrevive bien en superficies como cerámica,
vidrio y en la piel.

37. LACTOSA + Coliforme Prueba
IMVIC
Enterobacterias:
GRAM –
OXIDASA – LACTOSA -
O/F +. Medio McConkey o SS
• KLINGER
• FAD(Fenilalanina-desaminasa)
ONPG - + PROTEUS
(BETA GALACTOSIDASA)
Posible salmonella

38. Estudien para que no se extingan