Este documento describe diferentes técnicas para esterilizar materiales y equipos utilizados en cultivo celular. Explica que el método de esterilización depende de la estabilidad del material a altas temperaturas y describe métodos como calor seco, calor húmedo, irradiación, filtración y químicos. Se enfoca en detalle en el uso del autoclave, un equipo que utiliza vapor de agua a alta presión y temperatura para esterilizar de forma efectiva líquidos, equipos y materiales estables al calor h

1. Esterilización Técnicas de Cultivo Celular

2. Esterilización Todos los materiales, equipos y líquidos Matar microorganismos y eliminar esporas resistentes Método depende de la estabilidad del material a altas temperaturas

3. Esterilización Calor seco Calor húmedo Irradiaciones Química Filtración

4. Calor seco Estables al calor Instrumentos metálicos Envolturas para no estar expuestos

6. Calor húmedo Líquidos estables al calor: agua soluciones salinas algunos plásticos silicone polipropilenos

7. Calor húmedo Autoclave Esencial en laboratorio de cultivo Uso de vapor bajo presión Aumento en presión aumenta el punto de ebullición del agua y produce vapor a altas temperaturas

8. Calor húmedo Condiciones estándar son 15 psi 121 ˚ C por 15 min psi= presión “pounds per square inch” La efectividad del calor TDP, “thermal death point” el menor es 10min

9. Autoclaves Funcionamiento * purgado calentamiento de agua, produce vapor y desplaza aire saliendo por válvula * Esterilización alcanza temperatura y esteriliza * Descarga deja de calentar, se deja de producir vapor y baja presión y temperatura poco a poco.

12. Autoclaves Autoclaves de mesas Programación automática, reloj programable y cerrado seguro Selección para vaciar cámara pre y post esterilización GLP “Good laboratory program” Varios ciclos “Wet” ”Dry” Utiliza agua deionizada o tratada por osmosis al reverso

18. Autoclaves Monitoreo y validación Cintas adhesivas Papel indicador-químicos Tubos sellados con pastillas sensibles al calor

19. Botellas autoclaveadas con indicadores de esterilización.Las primeras botellas tapadas no están estériles. No entró el vapor. Requieren que las tapas estén sueltas

20. Irradiación Radiación gama plásticos, reactivos Rayo de electrones requiere fuente alta de energía Microonda soluciones acuosas y gel, agar UV-onda corta 254nM,10-100W

23. Filtración Filtros con porosidad 0.1-0.2-um Diferentes materiales: PES polyethersulfone nilón Celulosa Filtración por: presión positiva, bomba peristáltica

26. Químicos Óxidos de etileno Hipoclorito Alcohol 70%