Este documento describe los diferentes tipos de medios de cultivo celular, incluyendo medios definidos, medios suplementados con suero, y las propiedades físico-químicas importantes como pH, CO2, amortiguadores y temperatura. Explica que un medio de cultivo completo contiene soluciones salinas equilibradas, aminoácidos, vitaminas, suplementos orgánicos, factores de crecimiento del suero y antibióticos para prevenir la contaminación.

1. Medios de Cultivo
Técnicas de Cultivo
Celular

2. Medio definido
Desarrollo de medios
 Medios naturales
extractos de tejidos, fluidos corporales
suero, linfa
 Líneas celulares-medios químicamente definidos
Eagles Basal Medium 1955
Eagles minimal Essential Medium MEM 1959
 Medios suplementados
suero, proteínas, extracto de embrión

3. Medios definidos
 Medios especializados–tipos de células
RPMI1640 limfoblastoides
Leibovitz L15 elimina añadir CO2 y
NaHCO3

4. Tipos de medio de cultivo
 Definidos (sin suero): compuesto por elementos cuya
composición química y concentración están perfectamente
determinados. Medio solo o con agregados de formulaciones
especiales.
 MEM: medio esencial mínimo, 27 factores esenciales para el
crecimiento celular.
 DMEM: medio esencial mínimo modificado.
 HamF12: MEM + albúmina, transferrina, insulina y piruvato de
sodio

5. Tipos de medio de Cultivo
 No definidos (con suero o hidrolizados proteicos):
tienen componentes cuya composición química y
concentración no están determinados.
 Medios de mantenimiento: células con metabolismo
basal (MEM + 2% de suero)
 Medios de crecimiento: activación del ciclo celular
(MEM + 10% de suero)

6. Medio definido y suplementado
El medio de cultivo estará formado por cuatro
elementos :
 La naturaleza del sustrato o fase en que crecen las
células.
 Las condiciones físico-químicas y fisiológicas del
medio.
 La naturaleza y composición de la fase gaseosa.
 Las condiciones de incubación, especialmente la
humedad y la temperatura

7. Propiedades Fisicoquímicas
 pH
 CO2 y Bicarbonato
 Amortiguadores
 Oxigeno
 Osmolaridad
 Temperatura
 Viscosidad
 Tensión superficial

8. Propiedades Fisicoquímicas
pH
 Líneas celulares pH 7.4
 Líneas fibroblasto pH 7.4 - 7.7
 Líneas células transformadas pH 7.0-7.4
 Células epidermales pH 5.5

9. Propiedades Fisicoquimicas
pH
 Indicador de pH Rojo fenol
 Color apreciación subjetiva
 Sistema de estándares
 Concentración, botella, espacio de aire

10. CO2 y Bicarbonato
 El bióxido de carbono juega un papel en el
medio, debido a que influye en la cantidad de
CO2 disuelto, el pH y la cantidad de
iones HCO3-

11. CO2 y Bicarbonato
 CO2 en fase gas se disuelve en el medio
establece equilibrio con HCO3-
 La tensión superficial del CO2 regula la
concentración del CO2 disuelta y produce
H2CO3
 H2O + CO2 <=> H2CO3 <=> H+ + HCO3-

12. CO2 y Bicarbonato
 Ión bicarbonato HCO3-
 Aumento en CO2 atmosférico, baja el pH y
es neutralizado por aumento en bicarbonato.
 NaHCO3 Na+ + HCO3-

13. CO2 y Bicarbonato
 Para establecer un pH determinado se debe
tener en cuenta especialmente los niveles de
bicarbonato sódico y la tensión de CO2.
 Cada medio tiene una concentración
recomendada de bicarbonato y tensión de
CO2 para alcanzar el pH correcto

14. CO2 y Bicarbonato
 Se emplean amortiguadores en la
formulación de muchos medios en la
actualidad, lo que permite una estabilidad
superior del pH en el medio, así como una
mayor capacidad amortiguadora
 Good's buffers : HEPES, Tricina,.. (Good et
al., 1966)).

15. Fase gaseosa Fase líquida
Dióxido de
ión bicarbonato HEPES
carbono
atmosférico 4 mM 10 mM
2% 8 mM 20 mM
5% 24 mM 50 mM

16. Amortiguadores
 Se requieren en: platos abiertos, sobrepoblación de
células transformadas
 Más utilizado ión bicarbonato
baja toxicidad
bajo costo
beneficios nutricionales
 HEPES amortiguador fuerte a pH 7.2-7.4

17. Oxígeno
 Células en cultivo principalmente glucólisis
 Tensión de O2 evita toxicidad
 Cultivos de órgano, embriones y células adultas
requieren 95% en fase gaseosa
 Cultivos de células dispersas requieren
concentraciones más bajas

18. Osmolaridad
 Cultivos toleran un gran alcance de presión
osmótica
 Osmolaridad 260-320mosmol/Kg. mayoría
de las células
 Adición de HEPES y drogas pueden afectar
osmolaridad

19. Temperatura
 Depende del cuerpo de origen 37oC
homeotérmicos, 38.5 pájaros
 Poiquilotérmicos 15-26 oC
 Líneas mutantes sensitivas a temperatura
 Afecta crecimiento, pH y solubilidad de CO2

20. Viscosidad
 Influenciada por el suero
 Importante en disociación celular

21. Tensión de superficie
 Denaturación de proteínas puede aumentar
la tensión y ocasionar riesgos de
contaminación

22. Composición del medio
 Todo medio de cultivo está formado por los
siguientes elementos :
 Soluciones salinas equilibradas (BSS)
 Aminoácidos
 Vitaminas
 Otros suplementos orgánicos de bajo peso
molecular
 Hormonas y factores de crecimiento (suero).
 Inhibidores del crecimiento de los contaminantes
(antibióticos y antifúngisidas)

23. Soluciones salinas equilibradas (BSS)
 Es una mezcla de sales inorgánicas,
incluyendo usualmente bicarbonato sódico, y
suplementada con glucosa. Se usan para
diluir medios más completos, o para
incubaciones cortas que requieren un medio
isotónico no completo nutricionalmente.

24. Medio Completo
 Medio definido y suplementos como suero,
factores de crecimiento y hormonas
 Medio definido amino ácido, vitaminas,
sales, glucosa, suplementos orgánicos

25. Medio Completo
 Suero
factores de crecimiento proliferación
factores de adhesión adhesión celular
minerales
lípidos
hormonas

26. Medios Completo
 Antibióticos
 Reducen la contaminación
 No incluido en la mayoría de los medios
 Desventajas: resistencias, micoplasma
efectos anti-metabólicos