El documento describe los métodos para la extracción de ADN, incluyendo la homogenización de la muestra, la separación y purificación para eliminar proteínas u otros contaminantes, y la precipitación del ADN. Tres métodos comunes son el fenol-cloroformo, el Chelex y el salting out, los cuales varían en su toxicidad y capacidad para prevenir la degradación del ADN.

1. BIOLOGIA MOLECULAR
EXTRACCIÓN DE ADN

2. El DNA, está constituido por dos
cadenas de nucleótidos, formando una
doble hélice, su estabilidad se debe a la
formación de puentes de hidrogeno,
además existe la presencia de enlaces
entre bases nitrogenadas (A-T; G-C) y
enlaces disulfuro.
Las características de un organismo
están especificadas en su información
genética, la cual está representada
como una secuencia de ácidos nucleicos,
donde la suma total de esta secuencia es
lo que conforma el genoma.
mitocondria
Las estructuras de ADN se
pueden extraer de muestras
de piel, sangre, cabello,
saliva o semen

3. Extraer la sangre utilizando vacuteiner con
anticoagulante EDTA y homogeneizar
correctamente la muestra para evitar la
hemólisis y/o coagulación, y la contaminación
bacteriana. Una vez obtenida la muestra es
importante evitar movimientos bruscos
durante el transporte.

4. HOMOGENIZACIÓN
Permite la
de la estructura
y tisular, para
salida de los ácidos
nucleicos.
SEPARACIÓN Y
PURIFICACIÓN
Permite la
eliminación
progresiva de
proteínas y otros
contaminantes
celulares, y la
obtención de un
material genético
cada vez mas
PRECIPITACIÓN
Permite la
obtención de un
acido nucleico
para ser
almacenado o
diluido en la
concentración
deseada para su
análisis. Se suele
utilizar etanol o
isopropanol.

5. MÉTODOS
DE
EXTRACCI
ÓN ADN
SALTING
OUT
CHELEX
FENOL-
CLOROFORMO

6. FENOL-
CLOROFORMO
CHELEX SALTING
OUT
TÉCNICA orgánico inorgánico inorgánico
 Péptidos y proteínas son
extraídas en la fase
(Fenol), después se realiza
digestión con proteinasa K.
 El cloroformo permite que
todo el fenol pueda ser
lavado.
 Previene la
degradación del ADN
por quelación de los
iones metálicos
durante la ebullición
5%.
 Tiene copo limeros
estireno dibenzeno-
inones
iminodiacetato.
 No se pierde ADN.
 Permite
visualizar la
malla del
TOXICIDAD
DE
REACTIVOS
 Alto  No son toxico  Bajo

8. LISIS DE LA CÉLULA
DEGRADACIÓN DE LA FRACCIÓN
PROTEICA
Las sales cao trópicas ayudan a
romper la estructura
tridimensional de
macromoléculas como las
proteínas o los ácidos nucleicos
consiguiendo su
desnaturalización.
Se consigue mediante la
adición de una proteasa
Precipitación
del ADN
El ADN es insoluble en
alcohol, por lo que se
puede precipitar en
etanol frío o isopropanol.
LAVADO DEL PELLET
Resuspencion
Se realiza con Buffer
lisis frio, volviendo a
centrifugarse
El sedimento se
puede resuspender
en agua o tampón
Tris tras ser secado
completamente.

9. LISIS DE LA CÉLULA
Extracción de sangre
El EDTA elimina el
calcio de la sangre e
impide la acción de
las enzimas
necesarias en la
coagulación.
Lisis Buffer
Frio
homogenización
El SDS es un detergente
iónico que desnaturaliza
las proteínas pero
también inhibe la PCR a
concentraciones
mínimas.
La proteinasa K tiene la
función de degradar las
proteínas y/o enzimas
que potencialmente
pueden degradar al ADNseparación purificación
Fenol: desnaturaliza las
proteínas contaminantes de la
muestra.
Cloroformo: permite la
separación de 2 fases; el ADN
queda en la fase acuosa y en
la fase orgánica quedan las
proteínas y otros
contaminantes.
Etanol e isopropanol:
precipitan los ácidos
nucleicos.
precipitación

10. GRACIAS