Introducción a las técnicas directas de Biología Molecular destinadas a "manipular" ADN

1. TÉCNICAS DE BIOLOGÍA
MOLECULAR

2. Las Técnicas de Biología Molecular se
usan para “manipular moléculas
biológicas”

3. • Se abordan exclusivamente las técnicas
destinadas a “manipular” el ADN.
• Estas técnicas se fundamentan en:
 Complemetariedad de bases
Replicación de ADN

4. Extracción de ADN
Se pueden tomar diferentes fuentes para extraer
ADN : fluidos biológicos, muestras biopsias de
órganos/tejidos, material cadavérico, etc.
Se separa el ADN de otras fases orgánicas
celulares.

5. Almacenamiento y conservación de
ADN
• El ADN purificado refrigerado a 4°C se
conserva hasta un máximo de 3 años.
• Aquellas muestras que necesitan mantenerse
más de 3 años deberán congelarse a 70°C

6. Técnicas directas
- Southern Blot (E. Southern 1975)
- PCR (K. Mullis 1983)
- Secuenciación (F. Sanger 1977)

7. Southern Blot
• Sirve para detectar por hibridación la
presencia de una porción de ADN en una
muestra.
• Fundamento: complementariedad de bases,
• Se diseña una sonda de nucleótidos marcados
que sean complementarios al sector marcado
de ADN.
• Se puede utilizar para el diagnóstico molecular
de patologías genéticas.

8. PCR:
Reacción en cadena de la polimerasa
• Amplificación de un gran número de copias a
partir de un fragmento molde de ADN,
utilizando una reacción enzimática simple de
polimerización in vitro.
• Fundamento: Replicación del ADN,
complementariedad de bases.
• Se puede utilizar en diagnósticos, filiación,
investigaciones forenses, etc.

9. Secuenciación
método enzimático
• Determinación del orden de nucleótidos en un
fragmento de ADN.
• Fundamento: replicación del ADN,
complementariedad de bases.
• Permite identificar mutaciones, secuencias
repetitivas, genes saltarines, etc.

10. Fuentes
• Alzogaray, Raul 2008. Una tumba para los
Romanov: y otras historias con ADN. Ed. Siglo
XXI (B)
• Oro, Bernardo 2008 Técnicas de Biología
Molecular Seminario de técnicas de Biología
Molecular. UBA (B).