Este documento describe las pruebas bioquímicas utilizadas para identificar Enterobacterias. Explica pruebas como Agar de MacConkey, Kligler Hierro Agar, Simmons Citrato Agar, Medio de Urea, SIM, MIO, RM VP y Lisina, detallando los fundamentos y lectura de cada una. El objetivo es clasificar y diferenciar las Enterobacterias utilizando sus características metabólicas y enzimáticas.

1. MD. Galo García Ordóñez.

2. PRUEBAS
BIOQUÍMICAS DE
IDENTIFICACIÓN
DE LAS
ENTEROBACTERIAS

3. * Identificar los diferentes tipos de pruebas
bioquímicas de reconocimiento de
Enterobacterias.
* Determinar los fundamentos de cada prueba.
* Realizar una correcta lectura e interpretación
de lo que se observa.

5. * Clasificación de Murray:
- Bacilos Gram Neg.
- Fermentación de Lactosa: FRL, FLL, NFL.
* Saprófitos: E. coli.
* Patógenos: Salmonellas y Shigellas.
* + 25 grupos y 110 especies.

6. Características Específicas:
* Mayoría móviles: flagelos perítricos.
* Fermentación de glucosa: ácido y gas o solo
ácido.
* Oxidasa –
* Reducen Nitratos a Nitritos.
* Catalasa +

8. *Medios de
Cultivo.*Agar de MacConkey:
*Medio diferencial.
*Peptona: nutrientes
*Lactosa: E. coli (FRL) – diferencial.
*Sales biliares y Cristal violeta: restringe
Gram Positivo

9. *Medios de
Cultivo.*Peptona: nitrógeno y carbono para las Lac -.
*Lactosa :fuente de carbono para las Lac +.
*Sales biliares :inhibe Gram +.
*Cloruro sódico : mantener la tonicidad
* Rojo neutro : indicador
*Cristal violeta :la selectividad del
* medio.
*Agar-agar : da consistencia

10. *Medios de
Cultivo.*Agar de MacConkey:
* Cultivo:
- FRL: 18- 24hs a 37°C.
- FLL: 36- 48hs a 37°C.
*Lac +: ácidos derivados de la
fermentación: rosáceo
*Lac -: el medio se basificará por uso de
la peptona : amarillo.

12. Colonias lactosa (-): incoloras (= no hay fermentación de la Lactosa). Salmonella,
Shigella, Pseudomonas
Colonias lactosa (+): rosa/rojo ladrillo rodeadas de un halo de sales biliares
precipitadas. E. coli (rosa/roja), E. aerogenes (rosa y mucosa)

13. *EMB:

15. Sirven para:
*Identificación de características
metabólicas.
*Identificación de movimiento.
*Identificación de enzimas.
*Identificación de productos del
metabolismo.

16. Kligler
Hierro Agar
Simmons
Citrato Agar
Medio de
Urea
SIM
LISINA
RM VP
MIO

17. Kligler Hierro Agar
FUNDAMENTO:
*Diferencia fermentación (rojo de fenol: pH)
*Glucosa: botón
*Lactosa: pico de flauta
*Producción de H2S
*Tiosulfato de sodio, citrato de hierro y amonio
*Produce sulfuro de hierro : NEGRO
*Producción de GAS
*Incubar durante 24 horas a 37°C

18. L
g gGG
H2S
H2S
L
L
L

19. Simmons Citrato
AgarFUNDAMENTO:
*Bacterias: citrato permeasa.
*Contiene: citrato de sodio y fosfato de amonio
como fuentes de carbono y de nitrógeno
respectivamente y azul de bromotimol como
indicador de pH.
LECTURA:
*Positivo: Azul (pH alcalino).
*Negativo Verde
*Incuba a 37°C por 48 horas

21. Medio de Urea
*Medio Nutritivo contiene Urea (H2N-CO-
NH2)
*Indicador pH el rojo de fenol.
*Identifica la hidrólisis de la urea (Ureasa).
*LECTURA:
*Positivo: rosado (medio alcalino)
*Negativo: amarillo
*Incubar a 37°C hasta por 72 horas

23. SIM:
*Sulfuro de Hidrógeno
*Indol
*Producen triptofanasa:convierte el Trp en
indol
*Reactivo de Kovacs o de Erlich:
dimetilaminobenzaldehído.
* Movilidad (turbidez).
*Incubar por 18-24 horas a 35-37 °C

24. M

25. MIO
*Movilidad
*Indol
*Ornitina
*Presencia de ornitina descarboxilasa.
*Indicador: púrpura de bromocresol :
- medio alcalino: púrpura.
- medio ácido:amarillo.
*Incubar por 18-24 horas a 35-37 °C

26. + -

27. RM VP Medio:
*Rojo de metilo
*Glucosa productos finales ácidos (ácido láctico,
ácido acético, ácido fórmico)
* Indicador de pH: producción Ac: vía de
fermentación Ac-mixta.
*Voges Proskauer:
*Vía Fermentación Glucosa: Butanodiol:
Acetoína: diacetilo: rojo.
*Incubación en aerobiosis, a 35-37°C por 3 días

29. Lisina.
*Descarboxilación de lisina:
* Descarboxilasas: diferenciación de
enterobacterias.
* aa pierden el grupo carboxilo convierten en
aminas.
* Indicador: púrpura del bromocresol: vira a
violeta,

31. * Se debe realizar una correcta lectura e
interpretación de las pruebas para poder
precisar cual es el agente causal más
probable.
* Cada bacteria tiene características de
identificación propias y también otras
comunes que las hacen únicas.

32. BIBLIOGRAFÍA:
• Madigan M.T., Martinko J.M. y Parker J.
(2004) Brock: Biología de los
• Microorganismos – 10ma Edición –
ISBN:84-205-3679-2 Prescott L.M., Harley
J.P. y Klein D.A. (2003) Microbiología –
4ta Edición – ISBN:84-486-0261-7.
• http://edicion-
micro.usal.es/web/identificacion/AyudaPr
uebas.html