El agar tiosulfato citrato bilis sacarosa (t.c.b.s.) es un medio selectivo y diferencial diseñado para el aislamiento de diversas especies de Vibrio, especialmente V. cholerae, V. parahemolyticus y V. vulnificus, a partir de muestras fecales y alimentarias. Este medio fomenta el crecimiento de Vibrio al inhibir la flora acompañante y utiliza indicadores de pH para la identificación de las colonias. Existen limitaciones en su uso, como la posibilidad de resultados falsos negativos y la necesidad de confirmación con otros medios de cultivo.

1. Agar T.C.B.S.
Agar Tiosulfato Citrato Bilis Sacarosa

2. Uso
 Medio selectivo y diferencial para
el aislamiento y cultivo de:
 Vibrio cholerae
 Vibrio parahemolyticus
 Vibrio vulnificus
 Otras especies de Vibrio
 A partir de heces, aguas y
alimentos.
 También es conocido con el
nombre “Agar Tiosulfato Citrato
Bilis Sacarosa”, o como “Agar
Selectivo para Vibrios”.

3. Vibrio
 Los vibrios son bacterias generalmente
halotolerantes y móviles por flagelo polar que
son habitantes naturales del agua salobre y
salada en todo el mundo.
 La enfermedad intestinal humana se ha
asociado con el consumo de agua y mariscos
contaminados. Vibrio cholerae es el agente
etiológico de una diarrea secretora (cólera),
propagada mediante la ingestión de agua y
alimentos contaminados y por la vía fecal-oral.
 Otras varias especies de Vibrio , por ejemplo, V. parahaemolyticus y V.
fluvialis, son la causa de la gastroenteritis aguda.
 Además, varias especies de Vibrio , por ejemplo, V. alginolyticus, V. vulnificus
y V. damsela se asocian con las infecciones extra intestinales, tales como
infecciones de heridas, septicemia, meningitis y otras.
 Se ha demostrado que las infecciones de lesiones con Vibrio ocurren en especial
si los pacientes tuvieron contacto con agua salada y salobre

4. Fundamento
 El extracto de levadura, la peptona de carne y la tripteína aportan los
nutrientes para el desarrollo microbiano.
 La bilis de buey, el citrato de sodio y el pH alcalino inhiben el desarrollo de
flora acompañante, favoreciendo el crecimiento de Vibrio spp.
 El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y debido a su alta
concentración también contribuye a la selectividad del medio.
 La sacarosa es el hidrato de carbono fermentable y el azul de bromotimol y
azul de timol son los indicadores de pH que en un ambiente alcalino le
otorgan al medio de cultivo el color verdeazulado y viran al color amarillo en
medio ácido (por utilización de la sacarosa).
 El tiosulfato de sodio es la fuente de azufre y junto con el citrato ferrico
permiten la detección de la producción de ácido sulfhídrico por formación de
un compuesto color negro. El agar es el agente solidificante.

5. Características del medio
 Color: Verde azulado
 pH: 8,6 +- 0,2
 Almacenamiento: 2-8°C
 Incubación: Aerobia a 35-37°C durante 18-24 horas.
 Siembra: Estría, agotando el inoculo

6. Transporte
 Este medio se utiliza para el aislamiento de las especies Vibrio a partir de
muestras fecales (en especial si los pacientes han consumido mariscos) o de
muestras clínicas extraintestinales si se sospecha la presencia de alguna
especie Vibrio.
 También se pueden utilizar muestras tales como torundas rectales, vómito y
muestras de alimentos, en especial mariscos.
 Las torundas deben transportarse en medio de transporte Cary y Blair porque
las especies de Vibrio son particularmente sensibles a la deshidratación. Todas
las muestras intestinales y muestras de alimentos pueden colocarse en tubos
con agua de peptona alcalina para evitar la deshidratación de los materiales y
deben transportarse al laboratorio sin demora.
 Los tiempos de transporte de más de 8 horas reducen la viabilidad.
 No se debe congelar las muestras.

7. Características de las colonias
 Vibrio cholerae: Crecen colonias amarillas de 2-3 mm de diámetro, de
borde traslúcido.
 Vibrio alginolyticus: Crecen como colonias amarillas mucoides.
 Vibrio parahaemolyticus: Crecen colonias con centro verde, borde
traslúcido
 Vibrio hollisae: Vibrio que no crecen en agar T.C.B.S.
 Pseudomona aeruginosa: Inhibido, si crece son colonias color verde
azulado.
 Aeromonas hydrophila: Inhibido
 Enterococcus faecalis: Inhibido, si crece son colonias pequeñas amarillas
 Escherichia coli: Inhibido, si crece son colonias pequeñas amarillas
 Proteus mirabilis: Crecimiento inhibido, si no es inhibido crecen colonias
de centro verde y bordes traslucidos

8. Vibrio cholerae
 Microorganismos fermentadores de sacarosa: colonias amarillas.

9. Vibrio parahaemolyticus
 Microorganismos no fermentadores de sacarosa: colonias del color del
medio, con centro verde.

10. Comparación de colonias

11. Limitaciones del medio
 Realizar identificación bioquímica a las colonias presuntivas de Vibrio spp.
 Se recomienda no realizar la prueba de la oxidasa a las colonias de T.C.B.S.
Medio porque pueden obtenerse resultados falsos negativos.
 Es conveniente sembrar la muestra en paralelo con un medio de cultivo
nutritivo no selectivo ya que algunas cepas de Vibrio pueden no desarrollar
satisfactoriamente en T.C.B.S. Medio.
 Algunas cepas de Vibrio cholerae pueden fermentar lentamente la sacarosa y
observarse de color verdoso a las 24 horas de incubación.
 Algunas cepas de Proteus y Enterococos pueden crecer y observarse como
colonias pequeñas.
 El cultivo en este medio no es optimo para pruebas de aglutinación con
antisuero

12. Noticias sobre el genero Vibrio
 Catalogado por la prensa como la “bacteria come carne” Vibrio vulnificus esta
causando temor en las costa de EEUU, la bacteria que vive en agua cálidas
puede penetrar al cuerpo por heridas abiertas.
 Mas información:
 http://cl.tuhistory.com/noticias/la-terrorifica-bacteria-carnivora-que-ya-
devoro-su-cuarta-victima-en-eeuu
 http://www.telemundo47.com/noticias/Temor-en-las-playas-por-bacteria-
come-carne-vibrio-vulnificus-307876201.html

13. Bibliografía
Britanialab.com
BD.com