Metodo

1. IMPLEMENTACIÓN DE LA TÉCNICA DE FOLCH PARA LA EXTRACCIÓN DE
GRASAS EN FRÍO.
Ayala Torres A.; Hernández Zarazúa I. L.;
Aguilera Barreyro A.
Facultad de Ciencias Naturales
Universidad Autónoma de Querétaro
RESUMEN
Las grasas y los aceites constituyen una clase de compuestos orgánicos de importancia biológica,
llamados lípidos. Estos se caracterizan por la presencia de ácidos grasos o sus derivados, y por su
solubilidad en solventes como acetona, alcohol, éter y cloroformo. Los lípidos representan una
fuente extraordinaria de energía al cuerpo, además son constituyentes esenciales de prácticamente
todas las células animales y vegetales.
El objetivo fue aprender e implementar la técnica de Folch para la extracción de grasas en frío, lo
que garantizará que estos compuestos no pierdan sus propiedades naturales.
La técnica se aplicó en 30 muestras de carne de bovino en frío y en 10 muestras de dieta casera
para perros.
El resultado obtenido fue el esperado, ya que se extrajo la grasa exitosamente por medio de los
pasos de: homogeneización, extracción con solución Folch, filtración, separación de la fase no
polar y evaporación de solventes para recuperación de grasa con hexano. Cabe señalar que la
técnica de Folch no cuantifica resultados específicos, sólo muestra la grasa extraída sin señalar
sus componentes, por lo que es necesario llevar a cabo técnicas posteriores de saponificación,
metilación y por último la cuantificación de los ácidos grasos por cromatografía de gases, lo cual
no fue realizado en este trabajo de verano.
Pudimos comprobar que la técnica de Folch es útil y eficaz para realizar la extracción de grasa en
frío, lo que ayuda a mantener todo el contenido de lípidos, tal cual se encuentran en la muestra,
sin alterar su cantidad o calidad, como se haría con la técnica convencional en caliente de
Soxleth.
INTRODUCCIÓN
Las grasas y los aceites comunes constituyen una clase de compuestos orgánicos de importancia
biológica. El término general para todos estos materiales es el de lípido. Los lípidos se
caracterizan por la presencia de ácidos grasos o sus derivados, y por su solubilidad en solventes
como acetona, alcohol, éter y cloroformo. Estos compuestos representan una fuente
extraordinaria de energía al cuerpo, además de ser constituyentes esenciales de prácticamente
todas las células animales y vegetales. En el cuerpo humano se concentran en las membranas
celulares, en cerebro y en tejido nervioso (Champe et al., 2006).
Químicamente los lípidos están formados por cinco elementos principales: carbón, hidrógeno,
oxígeno y, a veces, nitrógeno y fósforo. En la actualidad no disponemos todavía de un método
aceptado generalmente para clasificar los lípidos. Algunos esquemas los dividen en lípidos
simples, lípidos compuestos y esteroides, pero una clasificación más práctica puede ser:
• Grasas: Ésteres de ácidos grasos y glicerol.
• Fosfolípidos: Compuestos que contienen fósforo, ácidos grasos, glicerol y un compuesto
nitrogenado.
1

2. • Esfingolípidos: Compuestos que contienen un ácido graso, ácido fosfórico, colina y un
aminoácido, esfingosina.
• Glucolípidos: Compuestos de un carbohidrato; un acido graso y un alcohol amínico.
• Esteroides: Alcoholes cíclicos de alto peso molecular.
• Ceras: Ésteres de ácidos grasos con alcoholes que no son glicerol.
• Vitaminas liposolubles: A, D, E y K (Roskoski, 1998)
Los ácidos grasos, aunque no lo son realmente, a veces se consideran derivados de los lípidos, ya
que son constituyentes de todos los tipos antes señalados de lípidos. Los ácidos grasos que
existen en la naturaleza tienen un número par de átomos de carbono en sus moléculas. Suelen ser
ácidos orgánicos de cadena recta que pueden ser saturados o insaturados.
Los ácidos grasos saturados más importantes son el palmítico y el esteárico. Forman parte de casi
todas las grasas animales y vegetales.
Los ácidos grasos no saturados son constituyentes característicos de los aceites. El ácido oleico es
el ácido graso insaturado más común.
Los ácidos grasos no saturados presentan isomería cis-trans.
Las prostaglandinas son ácidos grasos, cíclicos que se encuentran en el plasma del semen y en
otros tejidos. Derivan de ácidos grasos poliinsaturados, como el araquidónico (Burton et al.,
1986).
En el presente trabajo el objetivo fue aprender e implementar la técnica de Folch para la
extracción de grasas en frío, así como para familiarizarnos con el laboratorio y los instrumentos y
materiales que son utilizados en dicha técnica.
METODOLOGÍA
Se implementó la técnica de Folch para la extracción de grasas y se aplicó en 30 muestras de
carne de bovino en frío y en 10 muestras de dieta casera para perros (Folch et al., 1957).
RESULTADOS
Se prepararon los reactivos a utilizar:
• Reactivo de Folch: 1 volumen de metanol más 2 volúmenes de cloroformo.
• NaCL 0.73%. Pesando 7.3 g de NaCl y aforando a 1 litro.
• NaCL 0.58%. Pesando 5.8 g de NaCl y aforando a 1 litro.
La metodología implementada de la técnica de Folch es la siguiente:
1. Pesar 10 g de muestra (de músculo y de dieta para perro), y colocarlos en un matraz
Erlenmeyer de 250 ml.
2. Mezclar con 60 ml de reactivo de Folch y homogeneizar.
3. Filtrar con vacío en un embudo Buchner (Figura 1).
Figura 1. Mecanismo de filtración al vacío.
2

3. 4. El residuo se mezcla con 50 ml del reactivo de Folch y se homogeneiza de nuevo.
5. Volver a filtrar en vacío.
6. Lavar el residuo con 50 ml del reactivo de Folch, limpiando muy bien el matraz
7. Volver a filtrar en vacío.
8. Los filtrados (60+50+50ml) se mezclan en un embudo de decantación y se agrega 40 ml
de cloruro de sodio al 0.73%, se agita enérgicamente y se deja decantar una noche.
9. A la mañana siguiente, la fase inferior (orgánica) (F1) se decanta y se filtra por medio de
sulfato de sodio anhidro. El filtrado se recupera en un matraz redondo de fondo plano
(Figura 2).
Figura 2. Decantación y Filtración.
10. La fase superior (F2) se lava con 50 ml de una mezcla del 20% de NaCl (0.58%) y 80%
de reactivo de Folch. Agitar y dejar reposar por 2 horas.
11. Decantar y filtrar sobre sulfato de sodio anhidro obteniendo F3.
12. Se mezclan F1 y F3 para evaporarse en seco en el rotaevaporador en el caso de las
muestras de carne, y para las muestras de dietas para perro se guardaron en refrigeración
para posteriormente determinar vitaminas liposolubles por cromatografía de líquidos a
alta presión (Figura 3).
Figura 3. Rotaevaporador.
13. Para las muestras de carne, el residuo se pesa y el contenido de lípidos totales se debe
saponificar y metilar para determinar los ácidos grasos libres por cromatografía de gases.
Si las muestras no se saponifican y metilan inmediatamente, guardar la grasa recuperada
3

4. (agregando hexano como solvente, para que se evaporare rápidamente) (Figura 4) en
frascos ámbar y congelar para su uso próximo (Figura 5).
Figura 4. Recuperación de grasa con hexano. Figura 5. Grasa recuperada en frasco ámbar.
DISCUSIÓN
Observamos que la técnica tuvo un buen funcionamiento, ya que el objetivo planteado fue
cumplido, y aunque no pudimos observar los resultados finales, sabemos que gracias a ella no se
alterará la cuantificación de los ácidos grasos libres de las muestras de carne y de vitaminas
liposolubles en dietas para perros.
Nos familiarizamos con material de laboratorio de uso común: Matraces redondos de fondo plano
de 250 ml, matraces Erlenmeyer de 250 ml, soportes y pinzas, embudos, papel filtro, etc. Además
aprendimos a manejar otros equipos y materiales un tanto menos conocidos, tales como:
Homogeneizador, vidriería esmerilada para rotaevaporador, rotaevaporador, embudos de
decantación, embudos de filtración Buchner, matraces Kitazato, bomba de vacío y gendarmes.
CONCLUSIÓN
A través de toda la metodología realizada, pudimos comprobar que la técnica de Folch es útil y
eficaz para realizar la extracción de grasa en frío en muestras de carne y dietas para perro, lo que
ayuda a mantener todo el contenido de lípidos tal cual se encuentran en la muestra, sin alterar su
cantidad o calidad, como se haría con la técnica convencional en caliente Soxleth.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Burton D. J. y Routh J. L. “Química orgánica y Bioquímica”. Nueva Editorial Interamericana.
México, D. F. 1986.
Champe P.C., Harvey R. A. y Ferrier D.R. “Bioquímica”. Mc. Graw-Hill Interamericana.
México, D.F. 2006.
Folch J., Lee M. y Sloane Stanley G.H. “A simple method for the isolation and purification of
total lipids from animal tissues”. J. Biol. Chem. 1957.
Roskoski R. “Bioquímica”. Mc Graw-Hill Interamericana. México, D.F. 1998.
4