Este documento presenta los resultados de dos prácticas realizadas por estudiantes de farmacia y bioquímica. La primera práctica involucró la determinación de monóxido de carbono en sangre mediante pruebas alcalinas y de ácido tánico, mostrando resultados levemente positivos para CO. La segunda práctica buscó determinar cianuro e identificar alcoholes alifáticos como etanol y metanol en una muestra, encontrando pequeñas cantidades de metanol.

1. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA SALUD
PRÁCTICA N°5
DETERMINACIÓN DE MONÓXIDO DE CARBONO EN SANGRE Y
ACIDO CIANHIDRICO Y PRÁCTICA No.5.2 DETERMINACIÓN DE
ALCOHOLES ALIFÁTICOS. DIFERENCIACIÓN DE ETANOL Y
METANOL
INTEGRANTES
Alberco Galarza, Karina
Diaz Velazque, Renee
Hurtado Sandoval, Dhana
Machacuay Pilco, Janssen
Pizarro Martinez, Valerin
ASIGNATURA
Toxicologia y Quimica Legal
FB9M1 - A
DOCENTE
Mg. Q.F. Flores Luna, Juana Margarita
CICLO
IX
AÑO
2022-2

2. MARCO TEÓRICO
La intoxicación por gases tanto voluntaria como involuntaria presenta un
alto número de reportes, muchas veces acompañada de una alta
mortalidad que no se reporta.
La vía de entrada de los gases en el organismo es la inhalatoria, aunque
no se descarta la probable contaminación cutánea por impregnación de
la piel cuando el paciente ha estado en ambientes altamente
contaminados. Teniendo en cuenta que algunas de las intoxicaciones
producidas por gases se puede dar debido a que hay una serie de
productos químicos que en determinadas circunstancia pueden emitir
gases, que al ser inhalados ejercen su efecto tóxico, Dentro de los gases
no irritantes se encuentran el Monóxido de Carbono (CO), que es un gas
inodoro e incoloro que puede enfermar y matar repentinamente, conocido
a nivel mundial como un “asesino silencioso”. El monóxido de Carbono
se encuentra en emanaciones de combustión, tales como las producen
los carros, los motores pequeños de gasolina, cocinas, faroles, madera,
carbón encendidos, cocinas de gas y sistema de calefacción. Este gas
proveniente de estas fuentes puede acumularse en espacios cerrados o
semicerrados, las personas que se encuentran expuestas en estos
espacios pueden intoxicarse.

3. MATERIALES Y EQUIPOS
● Frasco de vidrio transparente con tapa hermética
● Equipo de toma de muestra de sangre venosa
● Un ratón pequeño
● 2 jeringas tuberculinas
● Una luna de vidrio de 20x20cm
● Guantes desechables
● Tubos de 13 x 100mm
● NaOH 10%
● Acido Tanico al 1 %
● Agua destilada

4. N° 5.1 DETERMINACIÓN DE MONÓXIDO DE CARBONO
PROCEDIMIENTO:
Se procederá a producir la muerte del ratón por asfixia para obtener sangre con
carboxi hemoglobina, posteriormente se someterá ésta muestra a diversas pruebas
(Rx. Alcalina, Rx al Ac.Tánico) contra datos de un estándar.
Producir la muerte del ratón por asfixia. (Dentro de un frasco
con tapa hermética, donde se genera CO)
Toma de muestra de sangre por punción
cardíaca.
RX- Alcalina
A un vol. de sangre agregar 4 Vol. de agua y un Vol. de NaOH 10%, anotar el
tiempo en que llega a color chocolate.
Rx del Ac. Tánico
A un vol. de sangre se le agregar 4 Vol. de agua destilada y luego 3 de Ac. Tánico
1%. Comparar los resultados contra datos de estándar.
Co + Hb.Fe.O2 ⇔Hb.Fe.CO + O2

5. CONCLUSIONES
En la primera reacción, de la muestra de sangre con agua y NaOH, al adicionar esta
última sustancia, la sangre cambió de color a ligeramente amarillo a los4.68 segundos
aproximadamente, acentuándose el color hacia los 12.6segundos. Este cambio en la
coloración en el tiempo señalado, indica la presencia mínima de Carboxihemoglobina.
La Carboxihemoglobina es una proteína resultante de la unión de la hemoglobina con
el monóxido de Carbono,esto es perjudicial, porque bajo esta forma, ya no es posible
captar oxígeno, la unión es irreversible y provoca toxicidad y muerte si la presencia
de Carboxihemoglobina llega al 70% aproximadamente.
En la reacción de la muestra de sangre con ácido Tánico, no hubo cambio en la
coloración, ni presencia de un precipitado que indique la presencia de Tánatos De
Carboxihemoglobina.
DISCUSIÓN
En la práctica se han encontrado resultados que evidencian una leve presencia de
Carboxihemoglobina en la muestra de sangre, para el caso de la prueba con Hidróxido
De Sodio. Sin embargo en la prueba con ácido Tánico el resultado fue negativo. Los
Resultados obtenidos no permiten indicar la no presencia de Carboxihemoglobina en
la sangre de la paciente, más aún conociendo de manera objetiva que la persona de
la que se recolectó la muestra vive en una zona del Callao que se encuentra expuesta
a altos niveles de congestión vehicular, y por lo cual, la emisión de gases producto de
la combustión de los vehículos es muy alta. Entre los gases de mayor cantidad
emitidos están los óxidos nitrosos NO3), monóxido de Carbono (CO), dióxido de
carbono(CO2), compuestos orgánicos volátiles, entre otras partículas.La
determinación analítica cuantitativa de COHb en sangre puede dar como resultado
niveles elevados confirmando la intoxicación; sin embargo, un valor de COHb normal
o'bajo no la descartan. Dependerá también de la técnica que se emplee para ello. Por
otro lado, la recolección de la muestra de sangre debió ser obtenida utilizando un
anticoagulante (heparina), para evitar la formación de burbujas o la entrada de aire a
la jeringa. Además, el tubo de ensayo donde se recibió la muestra en la práctica, debió
conservarse cerrado hasta su utilización. En ese sentido podemos señalar que las
condiciones de la toma de muestra y su exposición al ambiente antes de agregar el
hidróxido de sodio o el ácido Tánico, pudieron haber alterado el resultado, por lo que
se requieren nuevos ensayos.Para realizar el análisis de Carboxihemoglobina en
sangre se pudieron utilizar técnicas como: Determinación analítica, mediante ensayos
por dilución y alcalino. También utilizando el método espectrofotométrico, por
separación física, por cromatografía gaseosa, por espectrofotometría infrarroja, por
Cooximetría, entre otros.
Cuestionario

6. Fundamento de las reacciones de la práctica
Posibles interferencias de las reacciones de la práctica, procedimientos para
detectarlas CO en sangre.
Carboxihemoglobina en sangre. Es un biomarcador de exposición de alta
especificidad, refleja la dosis interna de monóxido de carbono en sangre. También se
considera un biomarcador de efecto precoz en cuanto refleja alteraciones bioquímicas
y fisiológicas en la estructura de la hemoglobina y en el proceso fisiológico de
oxigenación celular y tisular. La American Conference Governmental Industrial
Higienista, fija el valor biológico tolerable para carboxihemoglobina en sangre en 3,5
%En esta prueba se determina la cantidad sérica de COHb, el resultado es la
disponibilidad de menor cantidad de puentes de HB para combinarse con el O2.
Además cuando el CO ocupa los lugares de unión del O2 la molécula de la
hemoglobina se altera para unirse al O2 restante con más fuerza. Esta mayor afinidad
del CO por Hb y el cambio en la fuerza de unión del O2 no permite que este pase
directamente desde los hematíes al tejido. Por lo tanto se dispone de menos O2 para
la respiración celular en los tejidos dando lugar a hipoxemia.
Actividad de la enzima
arilsulfatasa A. Este es un biomarcador de susceptibilidad. La enzima arilsulfatasa A
es esencial en el metabolismo de la mielina, ya que participa en su degradación
normal e impide la acumulación de grupos sulfatides. Cuando la actividad de la
enzima arilsulfatasa A es inferior al 10 %, se produce acumulación de los grupos
sulfatídeos. Individuos que presenten una disminución previa de la actividad de esta
enzima en porcentajes entre 10 % y 30 % que no se ha expresado clínicamente, al
exponerse a monóxido de carbono, desarrollan un cuadro clínico de encefalopatía
retardada Monóxido de carbono exhalado. Marcador de exposición de alta
especificidad, que permite tener una medición de dosis interna. La American
Conference Governmental Industrial Higienista, fija su valor límite biológico en 20
partes por millón Mecanismos de reacción de las pruebas efectuadas.

7. Posibles interferencias de las reacciones de la práctica, procedimientos para
detectarlas.

8. N° 5.1. DETERMINACIÓN DE HCN Y DERIVADOS
Se procederá a realizar un machacado con las muestras problemas y
posteriormente se decantará, en el decantado se identificará la presencia de
derivados del HCN mediante.

9. CONCLUSIONES
Se utilizó para la práctica el destilado alcalino de ciruela obtenido en la práctica
anterior. Se utilizó en primer lugar el ácido Pícrico, cuyo resultado fue negativoa la
presencia de Cianuros, obteniéndose un color amarillo.-Con la misma muestra se
utilizó Sulfato ferroso, Cloruro de hierro y Ácidoclorhídrico, resultando un color
amarillo, negativo para la presencia deCianuros.
DISCUSIÓN
Para la determinación de la presencia de Cianuro se utilizó la reacción de Grignar, la
cual se fundamenta en que el ácido pícrico en presencia del HCN, liberado dela
muestra ácida, forma isopurpurato alcalino, de color rojo al rojo naranja en
eltranscurso de cinco minutos. La muestra utilizada corresponde al destilado alcalino
de ciruela. No se observó cambio en la coloración. Aunque, para ensayos mediatos,
cuando se sospecha la presencia de ácido Cianhídrico, se recomienda una
separación previa del HCN de la muestra por destilación simple o microdifusión.Según
Ramírez, V. El órgano blanco del Cianuro es el sistema nervioso, por lo que luego de
su ingestión, inhalación o contacto se presentan efectos neurotóxicos graves y
mortales en humanos y animales. La exposición laboral produce alteraciones en la
tiroides, cefalea, vértigo, vómito, náuseas, y dermatitis entre otros.
Cuestionario
Mecanismos de reacción de las pruebas efectuadas. Posibles interferencias y
procedimiento para detectarlas.

10. N° .5.2 DETERMINACIÓN DE ALCOHOLES ALIFÁTICOS.
DIFERENCIACIÓN DE ETANOL Y METANOL
Método de Nicloux o del dicromato.
Es un micrométodo se basa en la dosificación del alcohol sobre una alícuota del
producto de la destilación por oxidación con mezcla sulfocròmica en caliente.
3C2H5OH + 2K2Cr2O7+ 8H2SO4 --3CH3COOH + 2Cr2(SO4)3 + 2K2SO4+ 11H2O
PROCEDIMIENTO
Se procederà a destilar la muestra problema para obtener los alcoholes presentes,
posteriormente se les identificara y diferenciara mediante las reacciones respectivas
● Destilación de la muestra problema
● Reacción de Nicloux
*Destilado 5mL
*Mezcla Sulfocròmica 5mL
*Observar la coloración que aparece ( se puede cuantificar leyendo a 450 nm)
-Diferenciación mediante Rx con el Ac. Cromotròpico.
*A los tubos anteriores agregar 10 mg de Ac. Cromotròpico y luego H2SO4 Q.P. en
Zona.
*Observar coloración
-Comparar con los resultados de los estándares.

11. 1.5 Resultados
Interpretar los resultados de la práctica e indicar en el informe de la práctica las
ventajas y desventajas de los diferentes métodos de identificación e indicar el grado
de alcoholemia y su implicancia legal. El informe es individual.
CONCLUSIONES
Se utilizó como muestra el destilado de ciruela realizado en una práctica anterior, y
se añadió KMnO4, H2SO4, Sulfito de sodio (en zona), y ácido Cromotrópico.
Obteniéndose la formación de un anillo violeta, lo que evidencia la presencia de
metanol en pequeñas cantidades.
DISCUSIÓN
El metanol es un alcohol que no se produce en fermentación,pero si se forma a partir
de sustancias pécticas (compuestos de naturaleza vegetal). Este tipo de alcohol tiene
un punto de ebullición de 65°C, evapora antes que el Etanol y se encuentra en
cantidades importantes cuando se realizan destilados en alambiques. Los
subproductos metanol suelen ser tóxicos y pueden causar graves trastornos como
ceguera,toxicidad cerebral y nerviosa. Para llegar a la dosis tóxica o letal de ingesta
se considerará como dosis tóxica entre 10 a 30 ml, dosis letal entre 60 a 200 ml por
vía oral, y la gravedad de la intoxicación se considerará en las formas:
● Intoxicación leve: etanolemia, menor de 10 mg/dl. Con sensación de
fatiga,náusea, epigástrico, cefalea y visuales de percepción o acomodación.
● Intoxicación moderada: con melatonina entre 10 a 50 mg/dl. Con
vómitos,expresiones de embriaguez, especialmente si se combina etanol y

12. metanol,piel fría y sudorosa, visión borrosa, taquipnea, tratando de hacer
compensación respiratoria de la acidosis metabólica.
● Intoxicación severa: con metalogenia mayor de 50mg/100mg/dl, con
respiración rápida y superficial, convulsiones, cianosis periférica y
central,hipotensión y edema de papila.
● Metalonemia superiores a 100mg/dl se consideran letales.SE calcula que el
consumo de destilados adulterados es muy letal entre 60 y200ml (de 1 a 6
onzas de metanol)
Por otro lado, según Oscanoa P., en nuestra realidad, ocurre la intoxicación por
metanol, aunque generalmente se produce de manera accidental debido al consumo
de licores adulterados en varones adultos, sobre todo en personas con escasos
recursos económicos. Los síntomas más frecuentes son la alteración de la conciencia
y la visión borrosa, y el riesgo de muerte está asociado aparentemente con la
severidad de la acidosis metabólica En la práctica se realizó la identificación de un
destilado alcalino de ciruela,encontrándose presencia de pequeñas cantidades de
metanol, pero que no fue cuantificado para verificar su toxicidad.
1.6 Cuestionario
1) Mecanismo de reacción de pruebas de la práctica
Reacción de grignard
Fundamento: el ácido pícrico en presencia de HCN, liberado de la muestra ácida,
forma isopurpurato alcalino, de color rojo al rojo naranja al ser sometido al calor.
REACCIÓN QUÍMICA
CN – + OH -- → CN -- + H2O
3CN + C6H3N307 + H2O → C8H3N5O6 + NH3 +HCO

13. RESULTADO: (+) COLORACIÓN ROJO