consultas de Hellen Calambas

1. SISTEMATICA Y ECOLOGIA DE MICROROGANISMOS
HELEN ANDREA CALAMBAS
PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACION DE AGAR CITRATO DE HIERRO
TRES AZUCARES
FINALIDAD DE USO:
TSI AGAR CITRATO DE HIERRO TRES AZUCARES: Es un medio de cultivo
utilizado para la identificación de entero bacterias.
PRINCIPIOS: La fermentación de los azucares contenidos en el medio glucosa,
lactosay sacarosa produce una acidificación que hace que este pase de rojo a
amarillo.
Las bacterias que fermentan únicamente la glucosa se detectan al volver el medio
rápidamente a su coloración inicial en la parte superior del tubo aquellas que no
fermentan ninguno de los tres azucares no harán cambiar el color del medio. La
producción del ácido sulfhídrico se observa por la presencia de deposiciones
negras de sulfuro de hierro en el fondo de tubo producidas por la reacción del
tiosulfato en presencia del citrato férrico.
Así mismo la producción del gas en la fermentación se detecta por la aparición de
burbujas o roturas del agar.
1 .PREPARACION:
Disolver 60.1 g de medio deshidratado en un litro de agua destilada.
Llevar ebullición durante 1 a 2 minutos hasta conseguir una completa
disolución
Repartir de 5 a 6 mL en tubos de 16 por 160 mm
Esterilizar en autoclave durante°C
Inclinar los tubos para obtener un fondo y una pendiente de 3 cm de profundidad.

2. 2. COMPOSICION EN 1 g/L
Extracto de carne
3
Extracto de levadura
3
Peptona
14
Cloruro sódico
5
Lactosa
10
Sacarosa
10
Glucosa
1
Citrato férrico
0,3
Ti sulfato sódico
0,3
Rojo fenol
0,024
Agar bacteriológico
13,5
3. CONTROLES DEL MEDIO PREPARADO
Control macroscópico, medio solido de color rojizo
PH a 25 °C 7.4 ± 0,2
Control de eficacia

3. Métodos de análisis microbiológicos de alimentos.
4. CONSERVACION:
Tubos sin inclinar
Tubos inclinados
6 meses a
1 semana a 2
2
°C - 8 °C
°C - 8 °C
TINCION DE ESPORAS
TINTE PRIMARIO: Verde Malaquita, requiere calor para la penetración de este
tinte.
AGENTE DECOLORANTE: Agua, remueve el exceso de tinte, decolora la célula
vegetativa.
CONTRATINTE: Safranina, tiñe las células vegetativas.
PROCEDIMIENTO
1. Cubrir frotis con tinte verde malaquita y permita que el colorante humee,
pero no hierva.
2. Espere 5 minutos. Si durante los 5 minutos el tinte se seca añada más
tinte.
3. Enjuague la laminilla con agua destilada.
4. Coloque tinte safranina (30 seg).
5. Seque la laminilla en papel “bibulous”.
6. Observe y dibuje la coloración, morfología y arreglo de las bacterias bajo el
microscopio.
RESULTADOS

4. TINCION DE GRAM
Permite tipos distintos de células
Tinte primario cristal violeta cv tiñe la bacteria color violeta
Agente mordante yodo forma un complejo insoluble, ayuda a adherir el tinte
a la célula. Ayuda a resistir la decoloración.
Agente decolorizante: alcohol etílico al 95% sirve como solvente de lípidos
y agente deshidratante de proteínas .remueve el cristal violeta
Contra tinte safranina, tiñe de rojo la bacteria.
GRAM POSITIVO:su pared celular tiene una capa gruesa de peptidoglicano
REACCION: se basa en la diferencia en la composición química de la pared
bacteriana.
GRAM NEGATIVO: su pared celular tiene una capa fina de peptidoglicano.
FUNDAMENTOS

5. Membrana externa de las Gram es soluble en solventes orgánicos como el alcohol
la capa de peptidoglicano es demasiado delgada como para retener el complejo
cristal violeta/yodo que se formó por lo que va perdiéndose el color azul violeta.
Las Gram + no tienen su capa susceptible a la acción de solventes orgánicos se
deshidratan los poros y se cierran reteniéndose el complejo cristal violeta/yodo y
por consiguiente el color azul-violeta-

6. BIBLIOGRAFÍA
Consultado en:
MÉTODOS DE ANÁLISIS MICROBIOLÓGICOS DE ALIMENTOS
Por Corrie Allaert Vandevenne, Marta Escolá Ribes
http://academic.uprm.edu/~lrios/3725/Ejercicio4.pdf 20 febrero de 2014.