Este documento describe un estudio que utilizó la técnica de PCR de la región espaciadora interna transcrita (ITS-PCR) para investigar el tipado molecular de aislamientos clínicos de Klebsiella oxytoca productores de citotoxina. El estudio analizó 75 aislamientos bacterianos recolectados entre 2015-2016 y encontró que 15 eran productores de citotoxina. La ITS-PCR agrupó los patrones obtenidos en 5 grupos distintos. El análisis sugiere que la ITS-PCR es un método específico

1. Diseño del título
Lorena Mazo Betancur
Estudiante Medicina UPB
Tercer semestre 2019-2

2. INTRODUCTION
• Anaerobic
• Gramm-
• Very active beta-
galactosidase
• Bacillus, comprised
by a voluminous
capsule.
• Similar to klebsiella
pneumoniae
• Opportunist
• Enterobacteria
16S – 23S
Genes with structural function.
Bio-synthesis of proteins
They are found in similar
genetic loci in prokaryotes
and are separated by non-
coding regions called the
internal transcribed spacer
(ITS).
useful for identifying
and subtyping bacteria

3. INTRODUCTION
Cytotoxin
One of the pathogenic factors
of this bacterium and one of
the important factors
involved in its virulence and
pathogenicity
Hemorrhagic colitis

4. OBJECTIVE
The objective of this study was to
investigate the molecular typing of
clinical isolates of cytoxin-producing K.
oxytoca, using ITS-PCR

5. MATERIALES Y MÉTODOS
Aislados bacterianos
X 75
2015-2016
Verificados con el
gen
poligalacturonasa
específico (pehX).
1151 4 27

6. MATERIALES Y MÉTODOS
Ensayo de producción de citotoxinas
HEp-2 Detección
Dilución 1:1 con solución
salina tamponada con
fosfatos
1x105
cells HEP-2
Incubación en
5% de CO2 a
37°C x 72 hras
CONTROL POSITIVO Y NEGATIVO
K. Oxytoca
MH43-1
K. Oxytoca

7. MATERIALES Y MÉTODOS
Buenos objetivos potenciales
para "primers" para la
amplificación de la reacción
en cadena (PCR) de
polimerasa.
ITS - PCR
El método ITS-PCR se utiliza
para investigar y evaluar la
variación genética y hacer
descripciones filogenéticas de
los grupos genéticos de las
cepas de Klebsiella oxytoca.
ITS Secuencia de la región
no funcional del ARN
localizado entre el
ARNr.
La PCR copia millones de veces
una secuencia específica de
ADN o RNA mediante catálisis
por una polimerasa para que
pueda ser sintetizada
naturalmente.
F
U
N
D
A
M
E
N
T
O
U
S
O

8. MATERIALES Y MÉTODOS
Electroforesis
se utiliza para separar,
identificar y purificar
fragmentos de ADN y ARN
Las muestras de ADN se
cargan en pozos (ranuras)
en un extremo de un gel y
se aplica una corriente
eléctrica para arrastrarlas a
través del gel que se tiñe
con un pigmento
U
S
O
F
U
N
D
A
M
E
N
T
O
UPGMA
Método que se usa para la
reconstrucción filogenética
basados en distancias cuando las
tasas de evolución son
constantes entre los linajes
U
S
O
F U N D A M E N T O

9. RESULTADOS
1
5
2
1
0
Efectos
citotóxicos
Los patrones obtenidos
se agruparon tanto para
la electroforesis como
para el dendrograma.

10. Marcador de peso
molecular
RESULTADOS
Productoras
de citotoxina

11. RESULTADOS
GRUPO I GRUPO II
GRUPO III GRUPO IV
GRUPO V
Hospitalizado
Ambulatorio
Hospitalizado
Hospitalizado
Ambulatorio
Ambulatorio
Hospitalizado
Hospitalizado
Ambulatorio
Se obtuvieron más
pacientes ambulatorios
con k. oxytoca.

12. Los patrones obtenidos se agruparon de I a V. Se
colocaron dos aislamientos en el grupo I, tres en el
grupo II, dos en el grupo III, uno en el grupo IV y uno en
el grupo V
Diferencias
genéticas
RESULTADOS

13. DISCUSSION
AUTHOR AFFIRMATION YES OR NOT
Grisold et al The results of the automated rep-PCR method, compared
with PFGE, were more accurate for the study of the
outbreak of extended spectrum β-lactamase-producing K.
oxytoca isolates.
Tsakris et al The results of ERIC-PCR showed that all isolates were
basically from a single genotype. Based on the results of
PFGE, five isolates were categorized in a single type clone
(Ia) and four other isolates in different type clones.
Krawczyk and
colleagues
Based on the results of this study, using the ITS-PCR
method, electrophoretic patterns of K. oxytoca strains
were grouped into the two main KoX1 and KoY1 clusters.
In addition, there was genetic diversity between 14 isolates
of K. oxytoca isolates (a similarity rate of >75%).

14. CONCLUSIONS
The cytotoxin analysis of k.
oxytoca promotes the prevention
in the management and cleaning
of medical instruments or
implements during
hospitalization and outpatient to
avoid future in-hospital diseases.
The ITS-PCR is a specific method to
differentiate very genetically similar
strains and thus be able to create a
mechanism that can fight cytotoxin
from the microorganism.

15. MAP
Para