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Juan José Cárdenas Gómez
Semestre III
Molecular Biology
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Introduction:
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Materiales y metodos
 PCR: Reaccion en cadena de la polimerasa
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termoestable, la Taq polimerasa, y requiere de
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For example, IL-10 can
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Rodrigo
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we found that treatment
with
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Conclusion
 The study concluded that the maresin1 have anti
inflammatory effects decreasing the levels of CXCL1 which
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phagocytosis.
 the maresin1 proves their effects regulating the
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  • 1. Juan José Cárdenas Gómez Semestre III Molecular Biology UPB
  • 2. Introduction: Aspergillus saprophyte Local and superficial infections Invasive infecctions Maresin 1 DHA Inhibit neutrophil recruitment Stimulates macrophage phagocytosis
  • 3. IL-10 Cytokine with the most powerfull anti inflammatory effect Decrease the activity of linfocites T and macrophages Suppression of Th1 cells Neutrophil First in inflammatory response Phagocytosis and pinocytosis Granules (MPO, Peroxide, etc…)
  • 4. Seminar objective • How Maresin1 regulates neutrophil recruitment and IL-10 expression in Aspergillus fumigatus keratitis
  • 5. Materiales y metodos  PCR: Reaccion en cadena de la polimerasa La reacción en cadena de la polimerasa, o PCR, es una técnica para hacer muchas copias de una determinada región de ADN in vitro. La PCR depende de una ADN polimerasa termoestable, la Taq polimerasa, y requiere de cebadores de ADN diseñados específicamente para la región de ADN de interés. B actinina, CXCL1, IL10
  • 6.  Western Blot Western blot es una técnica de laboratorio utilizado para detectar una proteína específica en una muestra. El método implica el uso de electroforesis en gel para separar las proteínas de la muestra. Las proteínas separadas se transfieren del gel a la superficie de una membrana. La membrana se expone a un anticuerpo específico contra la proteína en estudio. La unión del anticuerpo se detecta usando un marcador radiactivo o químico. IL10, CXCL1, GSK3B, B actinina
  • 7.  Inmunofluoresencia Técnica que se utiliza para la detección de estructuras subcelulares que nos permiten estudiarlas con la utilización de anticuerpos acoplados a fluoróforos. NIMP-R14 en las corneas de los ratones pruebas
  • 8.  Cuantificacion Neutrofilos • Cantidad de neutrófilos en el recuento total de globulos blancos • MPO • 3 días
  • 10.
  • 11.
  • 12.
  • 13. Discusión Li proved that maresin1 could improve survival rates and mitigate inflammation in a sepsis model. TRUE H. Ghasemi For example, IL-10 can inhibit the production and release of many cytokines such as IL-1 and TNF-a, and can suppress a Th1 type immune response TRUE Rodrigo et al we found that treatment with maresin1 inhibited the influx of neutrophils into the corneal stroma during A. fumigatus infection. TRUE
  • 14. Conclusion  The study concluded that the maresin1 have anti inflammatory effects decreasing the levels of CXCL1 which is a proinflammatory molecule and increasing levels of IL- 10 which is a molecule that stimulates macrophages phagocytosis.  the maresin1 proves their effects regulating the inflammatory process in Aspergillus fumigatus keratitis regulating the neutrophil recruitment. This can be used in possible future treatment for various inflammatory procceses

Notas del editor

  1. la PCR utiliza altas temperaturas repetidamente para desnaturalizar el molde de ADN o separar sus cadenas. En cada reacción de PCR se utilizan dos cebadores que están diseñados para flanquear la región blanco En la PCR, la reacción se somete repetidamente a un ciclo de cambios de temperatura que permiten la producción de muchas copias de la región blanco.
  2. En la muestra tratada con maresina1, 3 días después mostro una disminución en la cantidad de neutrófilos los cuales fueron marcados con NIMP-R14, la muestra que no recibió tratamiento con maresina sino que solo se le fue agregado pbs siguió mostrando una cantidad elevada de neutrófilos
  3. EN AMBAS GRAFICAS FUE USADA LA B ACTININA COMO CONTROL B: en la grafica B se observa que el tratamiento con maresina 1 induce en la expresión de IL-10 la cual es una molecula anti inflamatoria, a comparación de la muestra con pbs, la muestra con maresina al 1dia y al 3dia mostraban altas cantidades de IL-10, con un pico max al tercer dia, al 5dia se vio una disminución de la inflamación y por ende de la IL-10 D: en la grafica B se observa que en el dia 1, las cantidades de CXCL1 eran iguales en las 2 muestras, la tratada con maresina y la que no, la diferencia se empieza a ver desde el 3 dia, en el cual la muestra sin maresina mostro una producción de CXCL1 mayor a la muestra que si tenia maresina, al dia 5 las cantidades de CXCL1 disminuyeron en las 2 muestras en comparación con el dia 3, las cantidades de CXCL en la muestra tratada con maresina 1 volvieron a valores aproximados a los del dia 1 mientras que la muestra con pbs disminuyo a comparación con el dia 3 pero seguía con una expresión alta
  4. B ACTININA USADA COMO CONTROL LAS MUESTRAS “N” SON MUESTRAS A LAS CUALES NO SE LES PUSO NI EL HONGO ASPARAGILLUS FUMIGATUS, NI TAMPOCO FUE AGREGADO PBS NI MARESINA1 B: en la grafica B se observa que en la muestra a la cual solo se le agrego el hongo mostro una gran producción de CXCL1, otra muestra a la cual fue agregada el hongo y pbs mostro prácticamente los mismos niveles de CXCL1 que la muestra con solo el hongo por lo cual la pbs no afecta en la producción o no de esta molecula, en otra muestra a la cual se le agrego el hongo y también maresina1 como pretratamiento mostro que las cantidades de CXCL1 producido fue menor a la mitad que las 2 muestras anteriores D: en la muestra a la cual se le agrego el hongo y se le hizo pretratamiento con maresina1 mostro valores de IL-10 de casi el doble a comparación de las muestras a las que solo se les agrego el hongo o el hongo con pbs, mostrando los efectos antiinflamatorios de la maresina
  5. Maresina 1 estimula producción de p-GSK3B, usada para choques isquémicos, glucógeno sinstasa kinasa, glucógeno sintasa