seminario biologia molecular

1. Maria Camila Thowinson Hernandez.
Giliana Paola Velásquez Londoño.

2. Cancer
 Cancer is the set of diseases characterized by
abnormal cell growth and tissue colonization.
 Human cells grow and divide to form new cells when
the body needs them. When normal cells age or
become damaged, they die. However, in cancer, this
orderly process is out of control. When the cells
become older and more abnormal,cells survive when
they should die, and new cells form when they are
not needed.

3. Cancer can be caused by:
1.Hereditary causes
2.Errors in the cell cycle
3.DNA damage
Colorectal
Mammary
Ovarian
Prostate

4. Colorectal cáncer (CRC)
 The majority of these cancers are adenocarcinomas (In cells that produce mucus and other
liquids)
 It begins as polyps (abnormal growth of mucous cells usually benigne) which can become
cancerous.
 We can prevent CRC founding and eliminating polyps
 In Colombia, 5600 cases of crc are reported in a year

5. OXAPLATINUM
• Its a drug that we can use as treatment of crc and gastric cáncer
• Its a platinum- based compound that exerts anti tumoral effects
causing the assembly of platinum to dna chain , inhibiting gene
transcription.
• The most common secundary effects are: peripheral neurophaty
(cold intolerance) ,low blood cell count, vomit, etc.

6. B7H3
 Is an important immune checkpoint member of the B7 and CD28 families.
Induced on antigen-presenting cells, B7-H3 plays an important role in the
inhibition of T-cell function.
 Is highly overexpressed on a wide range of human solid cancers.
 Is found on osteoblasts, fibroblasts, fibroblast-like synoviocytes, and epithelial
cells as well as in human liver, lung, bladder, testis, prostate, breast, placenta, and
lymphoid organs.

7. Cancer
Colorectal
cáncer
Oxaliplatin
B7H3
Is a protein expressed in
cells T
Its
overexpression
generates
overexpression of
XCCR1
One of his types is
The treatmen is
Resistance against

8. OBJECTIVE
The principal objective for this study was to shed light of
mechanisms underlying B7-H3-induced oxiplatin resistance in
CRC Cells.

9. WESTERN BLOOT
Es una técnica utilizada para detectar y cuantificar ciertas
proteínas especificas dentro de un grupo mayor de
proteínas utilizando marcadores (anticuerpos )
Pasos:
1. Electroforesis
2. Transferencia de gel resultante
3. Se detecta proteína de interés agregando el anticuepo
4. Se analizan los resultados.
En este estudio lo utilizamos para detectar y cuantificar la
presencia de la proteína B7H3.

10. PCR EN TIEMPO REAL
 Se realiza en un termociclador con capacidad de
detectar la fluorescencia emitida por el fluorocromo.
 1. Separación de la doble cadena
 2. Alineamiento de los cebadores al DNA molde
 3. DNA polimerasa.
 En este estudio se utilizó para identificar el mecanismo
mediante el cual la B7-H3 reduce el daño del DNA en las
células cancerosas causado por oxaliplatino. Revisando
la expresión de XRCC1 en las distintas líneas celulares.

11. RNA DE INTERFERENCIA (iRNA)
1.se incorpora dsRNA
2. en citoplasma es reconocida por la enzima que la hidroliza en
pequeños fragmentos llamados siRNA
3. el siRNA se incorpora en un complejo multiproteico llamado RISC
(RNAi silence complex) que separa las dos hebras y se queda con una
sola
4. La hebra molde de RNAi sirve para reconocer al RNAm de interés.
5. Si hay complementariedad de base, RISC hidroliza el RNAm. Si no la
hay, igual se impide la unión del ribosoma al RNAm.
En este estudio el RNA de interferencia se utilizo para silenciar los genes
que codificaban la proteína B7H3 en ciertas células y poder hacer la
comparación entre las células que expresaban la proteína y las que no la
expresaban.

12. VIABILIDAD CELULAR
 Se utiliza para medir la proporción de células, el método empleado fue CellTiter-Blue que es
homogéneo y fluorescente.
 Implica la adición de un solo reactivo directamente a las células cultivadas en medio
suplementado con suero. El ensayo se basa en la capacidad de las células vivas para convertir un
colorante redox (resazurina) en un producto final fluorescente (resorufina). Las células no viables
pierden rápidamente la capacidad metabólica, no reducen el colorante indicador, y por lo tanto
no generan una señal fluorescente.
 Fue utilizado en este estudio para estudiar la resistencia al oxaliplatino en células con
sobreexpresión de B7H3 y en aquellas con B7H3 silenciado.

13. INMUNOFLUORESCENCIA
 Es una técnica de marcación que hace uso de anticuerpos marcados
con sustancias fluorescentes (fluorocromos) y sirve para determinar
la presencia de determinada molecula.
1. Se marca el anticuerpo especifico con fluorocromo escogido para
cada situación
2. Se añade a la mezcla de proteínas de las cuales queremos
identificar la presencia de una y se incuban.
3. Se expone la placa a luz ultravioleta y se observa al microscopio
los resultados
 En este estudio se utilizo para revisar la presencia de proteínas
como la XCCR1 y hacer el análisis respectivo.

14. RESULTADOS
RESULTADOS

18. AUTHOR Says that… ¿is according to the study?
Zang Et Al
“B7H3 is positively related to the
degree of tumor malignancy and
participates in the process of tumor
cell escape”
Yes
T Zhang, b jiang , S.T Zou, F.Liu, D.Hua
“the expresión of B7H3 has also been
linked to resistance to
chemotherapeutic agents”
Yes
R.S. Tebbs, M.L. Flannery, J.J.
Meneses, A. Hartmann, J.D. Tucker,
L.H. Thompson, J.E. Cleaver, R.A.
Pedersen, J. Moser, H. Kool, I.
Giakzidis, K. Caldecott, L.H.
Mullenders, M.I. Fousteri.
“XRCC1 is a key mediator of single-
strand breaks DNA repair, which
includes both base excision and
nucleotide excision repair
mechanisms”
Yes
[M. Toulany, K. Dittmann, B.
Fehrenbacher, M. Schaller, M.
Baumann,H.P. Rodemann.
“XRCC1 expression is regulated by
PI3K/AKT and MAPK-ERK1/2
pathways”
Yes
DISCUSSION

19. CONCLUSIONS
1. Colorrectal cáncer can be treated in a better way if we inhibiate the expression of
B7H3 protein before begins the treatment with oxiplatinum
2. The treatment with oxiplatinum can be replaced with another drug than be more
efective.
3. Overexpression of B7-H3 acts as a protetive factor for cáncer Cells because its
provides resistance to oncological drugs.
4. B7H3 regulates the expression of XRCC1 through the pathway PI3K/AKT.