Este documento compara la expresión de los genes p53 y mdm2 en pacientes con mucosa oral normal, leucoplasia oral simple, leucoplasia oral no simple y cáncer de leucoplasia. Los resultados mostraron que la expresión de ARNm de p53 y mdm2 aumenta a medida que la lesión progresa de leucoplasia simple a no simple y finalmente a cáncer, lo que sugiere que estos genes juegan un papel en la carcinogénesis oral. La citometría de flujo también encontró un aumento de las proteínas p53 y mdm

1. ANDREA CAROLINA VARGAS OLMOS
CARMEN SOFIA TORRES DAZA
MEDICAL STUDENTS

2. INTRODUCTION
The mutant P53 gene and mdm2 gene are found in the majority
of human tumor tissues.
In this study were compared the mRNA of p53, mdm2 in
patients with normal oral mucosa, simple oral leukoplakia,
no-simple oral leukoplakia and leukoplakia cancer, to
explore their role in the carcinogenesis of oral leukoplakia.

3. CANCER
Cancer is a disease caused by a group of cell that proliferating
uncontrollably and autonomously, invading other tissues locally
and remotely.

4. LEUCOPLAKIA
They are patches on the tongue, in the mouth or on the inside
of the cheek that occur in response to prolonged irritation.
Occurs in the epithelial surface.
is an injury related to the use of
cigarettes, alcohol or HIV.

5. p53
• The p53 gene, also called the "guardian of the genome",
encodes a nuclear transcription factor(The transcription factor
p53)
• p53 is crucial in multicellular organisms, where it regulates
the cell cycle and, this functions as a tumor suppressor that is
involved in preventing cancer

6. The transcription factor p53 has several important functions:
•It can activate DNA repair proteins.
•It can initiate apoptosis (the programmed cell death).
•Cell cycle arrest in the G1/S o G2/M phase.
activation signal is damaged DNA

7. mdm2
• Mdm2 protein is an important negative regulator of the p53
tumor suppressor.
• can activate p53 degradation by the ubiquitination system.
• the ubiquitin, works as a signal for protein destruction.

8. P53, mdm2 and cáncer
• In the normal cells:
• In the DNA damage:
p53 is low, because it is
associated to the mdm2 protein,
which induces its ubiquitination
and destruction(by the
proteosome)
to prevent the
proliferation of cells
with damaged DNA
CANCER

10. • Mutations in p53, can generate cancer(like leukoplakia cancer)
• about 50% of all human tumors contain mutations in p53.

11. OBJECTIVE
To study the relationship of the expressions of p53 and mdm2 in
leukoplakia cancer.

12. MATERIALES Y METODOS
DATOS CLINICOS
110 Pacientes con
leucoplasia
69 hombres 41 mujeres
edad 23-83 años, con un
curso de la enfermedad de
2 meses a 10 años

13. REACTIVOS
•Trizol
•Isotiocianato de fluoresceína
•medio de separación de linfocitos
•El anticuerpo monoclonal de ratón
anti-humano p53
•El anticuerpo monoclonal de ratón
anti-humano mdm2
•Kit de reactivos de RT-PCR
•PCR termociclador
•Citometría de flujo

14. MUESTRA
Dos días después de la admisión, se tomaron muestras de
sangre venosa del antebrazo en ayunas y se colocaron en tubos
heparinizados.
HEPARINA: Anticoagulante.

15. PCR
• amplificación in vitro
• incremento del numero de copias de una secuencia particular
de ADN.

16. 1. ADN plantilla
2. Primer´s
3. DNTp´s
4. Buffer
5. MgCl2
6. DNA polimerasa

17. APLICACIONES
Clonación de fragmentos de DNA
Secuenciación de ácidos nucleídos
Establecimiento de polimorfismos
Rastreo de mutaciones
Diagnostico de enfermedades
genéticas
Detección de células tumorales
DIFICULTADES DIAGNOSTICAS
Falsos positivos por contaminación
costos
La interpretación clínica es difícil
Falta de estandarización
Falta de control de calidad

18. RT-PCR
Reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa
inversa :
generar una gran
cantidad de copias
de ADN:"amplificación".
generar una gran
cantidad de copias
de ADN:"amplificación".
una hebra de ARN es
retrotranscripta
en ADN complementario
usando
una enzima: transcriptasa
inversa.
una hebra de ARN es
retrotranscripta
en ADN complementario
usando
una enzima: transcriptasa
inversa.

19. RT-PCR se utiliza para detectar cualitativamente la
expresión de genes a través de la creación de ADN
complementario

20. DETECCION CON RT-PCR DE
LA EXPRESION DE P53 Y
MDM2
ARN fue extraído mediante la
introducción de trizol
Se utilizaron los siguientes
primers:
Primer de p53= 409pb
Primer de mdm2= 450pb
Actina-β como referencia= 330pb
“la amplificación por la PCR”

21. Electroforesis:
• Presencia de banda en: 409pb, 450pb,
330pb
• No presencia de bandas en: 409pb,
450pb,330pb
El contenido relativo de la expresión de ARNm de p53 y mdm2
Se obtuvo gracias a la densidad óptica.
La expresión era “+”
para ARNm de p53,
mdm2 y actina-β.
La expresión era “+”
para ARNm de p53,
mdm2 y actina-β.
La expresión era “-”
para ARNm p53, mdm2
y actina-β.
La expresión era “-”
para ARNm p53, mdm2
y actina-β.

22. PROPORCION DE P53, MDM2 EN
SANGRE PERIFERICA
PBS, linfocitos
Centrifugación= 1000rpm,
eliminación
de sobrenadante
Dilución 1:100 anticuerpo
monoclonal de ratón
anti-humano mdm2,
p53(100µl)
Temperatura ambiente
durante 30 min.
Bañados PBS ( dos veces)Descartar
sobrenadante

23. 37°C por 30min,
descartar
sobrenadante,
bañado en PBC
+1ml de PBS. paso por
la malla filtradora (400
veces)

24. • “la proporción del p53 y mdm2 fue detectado por citometría
de flujo”

25. RESULTADOS
- P53:

26. RESULTADOS

27. Mdm2
Mucosa oral
normal
Leucoplasia oral
simple
Leucoplasia oral
no simple
cáncer
0,0 % 6,8 % 11.1 % 37,8%
RESULTADOS
Las diferencias en la expresión de RNAM de p53 y mdm2 fueron:
Estadísticamente significativas = (P < 0.05)
No significativas estadísticamente = ( P > 0.05)

28. RESULTADOS
Figura 1. Resultado de RT- PCR.
•P53: 409 pb
•Mdm2: 450 pb
•β-actina : 330 pb

29. PROPORCIÓN DE P53 Y MDM2 EN SANGRE PERIFERICA EN CADA
GRUPO FUERON DETECTADAS CON CITOMETRIA DE FLUJO
Mucosa oral
normal
Leucoplasia
oral simple
Leucoplasia
oral no simple
Cáncer
P 53 ( 0.3 ± 0.1) % ( 1.6 ± 0.9) % ( 1.9 ± 1.1)% ( 3.4 ± 1.8 ) %
Mdm2 ( 0.1 ± 0.1) % ( 0.8 ± 0.6) % ( 1.2 ± 0.8)% ( 1.2 ± 0.8 ) %
Las frecuencias de p53 y mdm2 fueron:
RESULTADOS

30. RELACIÓN DE P53, MDM2 Y CARACTERÍSTICAS CLÍNICAS
PATOLÓGICAS DE PACIENTES CON CÁNCER DE LEUCOPLASIA
RESULTADOS

31. DISCUSSION
MAN ¿WHAT DID HE SAY? YES or NO
Kovesi
Consider that the
different expression of
p53 in oral leukoplakia
showed the increased
genomic instability is
consistent with the oral
leukoplakia cancer
clinical manifestations.
Liu
confirmed that p53 gene
mutation has a
correlation with the
ocurrence and
development of oral
precancerous lesions.

32. MAN WHAT DID HE SAY? YES or NO
Jiang et al, li
Reported mdm2 play an
important role in the
ocurrence and
development of tumors,
there was a correlation
between them.
wang
Confirmed that p53 ,
mdm2 protein
expression are closely
related to the ocurrence
and development of oral
lichen planus and oral
squamous cell
carcinoma.
DISCUSSION

33. CONCLUSION
• The p53 tumor suppressor gene is the most important
regulator in DNA damage because this gene generates
mechanisms involving growth arrest and apoptosis. Mutation
in this gene is associated with the development of malignant
disease.
• Nowadays, To study the interaction between p53 and MDM2
has become an important target for cancer therapy and other
studies.

34. • flow cytometry is important in determining the
proportion of p53 and mdm2 cells in peripheral blood,
this last, can determine the possibility of developing
cancer.
• The RT-PCR Is widely used in the diagnosis of genetic
diseases and is using in cancer detection to help
improve prognosis.

35. Andrea Vargas

36. • M.O.N = Mucosa Oral Normal
• L.O.S = Leucoplasia Oral Simple
• L.O.N.S = Leucoplasia Oral no Simple
• C.P.L= Cancer por Leucoplasia Sofía Torres

37. “All you need is LOVE” GRACIAS