Este documento presenta información sobre dos métodos de tinción parasitológica: azul de metileno (PAM) y Sudan III. Describe el historial, propósito, muestra requerida, materiales, equipo, procedimiento, fuentes de error, forma de reporte, ventajas y desventajas de cada método. El azul de metileno se usa para identificar procesos virales o bacterianos contando leucocitos en muestras líquidas. Sudan III tiñe lípidos de rojo para detectar esteatorrea en heces.

1. UNIVERSIDA DR. ANDRES
BELLO
MATERIA:
DIAGNOSTICO PARASITOLOGICO.
DOCENTE:
LIC. CECILIA MORALES.
TEMA:
METODO DE SUDAN III Y PAM.
NOMBRE
FRANCIA TAMARA NAJARRO LÓPEZ.

2. AZUL DE METILENO (PAM).

3.  El azul de metileno se sintetizó originalmente en 1876 como un
tinte a base de anilina para la industria textil (Berneth, 2008),
pero científicos como Robert Koch y Paul Ehrlich se dieron
cuenta rápidamente de su potencial para usarlo como tinción
en microscopía.
 La observación de la tinción selectiva e inactivación de especies
microbianas condujo a hacer pruebas con tintes a base de
anilina contra enfermedades tropicales. El azul de metileno fue
el primer compuesto de este tipo que se administró a humanos,
y se demostró que era efectivo en el tratamiento de la malaria.
El azul de metileno también fue el primer compuesto sintético
usado como antiséptico en la terapia clínica, y el primer
colorante antiséptico que se usó terapéuticamente. De hecho, el
uso del azul de metileno y sus derivados fue generalizado antes
del advenimiento de las sulfonamidas y la penicilina
HISTORIA.

4.  Es la búsqueda de leucocitos polimorfonucleares y
mononucleares en una muestra líquida coloreada
 con azul metileno lo que permite identificar si se
trata de un proceso viral o bacteriano.
PROPOSITO.

5.  5gr. de heces frescas y líquidas, instruir al paciente
sobre la forma de colectar la muestra.
MUESTRA REQUERIDA.

6.  - Lámina portaobjeto.
 - Aplicadores de madera.
 - Aceite de inmersión.
 - Papel filtro.
 - Embudo.
 - Bandeja o soporte de coloración.
 - Colorante de azul metileno 0.1%.
 - Guantes descartables.
 - Marcador de vidrio.
 - Papel toalla.
 - Fósforos.
 - Papel lente.
MATERIALES Y REACTIVOS.

8.  - Contador diferencial de células.
 - Microscopio.
 - Mechero.
EQUIPO.

9.  - Filtrar el colorante antes de utilizar.
 - Identificar el portaobjeto a utilizar.
 - Realizar el extendido de muestra en las dos terceras partes de la
lámina.
 - Dejar secar a temperatura ambiente.
 - Fijar al calor pasándolo rápidamente sobre la llama de un mechero
tres veces en forma
 horizontal.
 - Cubrir la lámina con azul de metileno de 30 a 60 segundos.
 - Eliminar el azúl de metileno tomando el portaobjeto por el
extremo numerado inclinándolo
 hacia delante, y lavar dejando caer una corriente de agua a baja
presión sobre la parte en
 que no hay extendido, la que escurrirá suavemente sobre la película.
 - Dejar secar a temperatura ambiente.
 - Observar al microscopio con objetivo de inmersión 100x.
 - Contar 100 células blancas o leucocitos diferenciando los
polimorfonucleares de los
 mononucleares.
PROCEDIMIENTO.

10.  - Extendidos gruesos.
 - Fijación con excesivo calor.
 - Láminas sucias o grasosas.
 - Arrastrar la prepración con un lavado brusco
FUENTES DE ERROR.

11.  Reportar el porcentaje de leucocitos encontrados con el
predominio del que tenga mayor
 porcentaje.
 Polimorfonucleares ................................... por ciento.
 Mononucleares .................................. por ciento.
 Interpretación:
 Predominio de polimorfonucleares se asume que existe un
proceso infeccioso de origen
 bacteriano.
 Predominio de Mononucleares se asume que el proceso
infeccioso es de origen viral.
FORMA DE REPORTE.

12. SUDAN III.

13.  El Sudán III es un tinte diazol del tipo lisocromo
 Utilizado para el reconocimiento de lípidos, porque es
insoluble en agua y en cambio es soluble en las grasas.
 Se basa en el método de Drummey para la detección
cualitativa de grasas neutras (triglicéridos). Es una
técnica utilizada generalmente para demostrar la
presencia de triglicéridos u otros lípidos y
lipoproteínas mediante una tinción.
 Cuando se efectúa el procedimiento de búsqueda de
lípidos: tiñe las grasas de color rojo-anaranjado
SUDAN III

14.  Cuando se efectúa el procedimiento de búsqueda de
lípidos: tiñe las grasas de color rojo-anaranjado

15.  La tincion de heces con Sudan III es una prueba
cualitativa, sencilla, rápida y muy económica para
la detección de esteatorrea.
 Cuando se efectúa adecuadamente presenta
unasensibilidad del 80% - 90% para detectar la
presencia de esteatorrea clínicamente significativa.
 En las heces de las personas normales es posible
observar siempre una pequeña cantidad de grasa,
que es de origen endógeno, formada por las
bacterias y las células epiteliales exfoliadas.
VENTAJAS

16.  La cantidad de grasa en la dieta puede afectar el
resultado de esta prueba; personas normales que
ingieren alimentos ricos en grasas pueden tener una
cantidad elevada de grasa neutra en esta prueba;
 Esta es una prueba de tamizado bastante confiable
para descartar esteatorrea en la mayoría de casos; sin
embargo, puede ocurrir un resultado negativo en una
persona con malabsorción si está ingiriendo muy
poca grasa en su dieta
DESVENTAJAS

17. Heces fresca , congelada o
refrigerada en recipiente apropiado.
Lamina laminilla y Palillo de
madera.
Reactivo , sudan III
MUETRAS.

19.  En la lamina portaobjetos agregar 2 gotas de sudan
III.
 Tomamos con un palillo de madera o aplicador
una pequena muestra de heces y se mezcla.
 Colocamos una laminilla cubreobjetos .
 Se observa al microscopio.
PROCEDIMIENTO.

20. MICROSCOPICAMENTE.

21.  En niños y adultos la presencia de 5 gotas o mas
por campo microscopico de 40x se concider
patologico.
INTERPRETACION DE
RESULTADOS.

22. Manual de procedimientos tecnicos de laboratorio
clinico del primer nivel de atencion, (2007) de agosto
,pp 13-14.
BIBLIOGRÁFIA.