Conjunto de técnicas y métodos de cultivo de tejidos utilizados para multiplicar plantas asexualmente en forma rápida, eficiente, libres de enfermedades y en grandes cantidades.

1. FITOGENOTECNIA
M.VERÓNICA TAIPETAIPE

2. CULTIVOS In vitro

3. CULTIVOS In vitro
Conjunto de técnicas y
métodos de cultivo de
tejidos utilizados para
multiplicar plantas
asexualmente en forma
rápida, eficiente, libres
de enfermedades y en
grandes cantidades.

4. • La micropropagación
se da gracias a la
propiedad de
totipotencia
que tienen
las células vegetales
• Totipotencia es la
capacidad de regenerar
una planta completa
cuando están sujetas a
los estímulos adecuados
• Así, las células somáticas
de cualquier tejido
podrían formar tallos,
raíces o embriones
somáticos de acuerdo al
estímulo que reciban

5. Etapas
Preparación del material vegetal
Establecimiento del cultivo
Multiplicación
Enraizamiento
Aclimatación

6. Preparación del material vegetal
(explanto)
Se elige la planta madre, se extraen los
fragmentos a partir de los cuales se
obtendrán los explantes.
Los explantes pueden ser yemas, trozos
de hojas, porciones de raíces, semillas,
etc.

7. Desinfección de los fragmentos de planta madre
Antes de extraer los explantes se hará una desinfección de los fragmentos de planta
madre, la desinfección superficial incluye varios pasos:
1. El lavado con agua corriente.
2. El lavado con etanol al 70% por 1 minuto.
3. El lavado con concentraciones variables de hipoclorito de sodio (0,5 a 1,5% de
cloro activo) con unas gotas de tensoactivos para favorecer su penetración y
actividad.
4. Enjuagados al menos tres veces con agua destilada estéril.

8. Desinfección de los explantes
A efectos de obtener las condiciones de
asepsia, se trabaja en cámara de flujo
laminar para extraer los explantes a
partir del material vegetal, los
explantes se desinfecta con hipoclorito
de sodio (agua clorada comercial), pura
o diluída durante un período de 5 a 15
minutos, seguido por 3 a 4 enjuagues en
agua esterilizada

9. Factores que influyen sobre la calidad del explanto
•El tipo de órgano que sirve como explanto
•La edad ontogénica y fisiológica del mismo
•La estación en la cual se colecta el material vegetal
•El tamaño del explanto
•El estado sanitario general de la planta donante

10. Explanto ideal
órganos
jóvenes
Yemas en
brotación
activa

11. Establecimiento del cultivo
Los explantes se introducen en un
tubo conteniendo medio de cultivo
estéril. En un período de una semana
o quince días, comienza el proceso
de regeneración de nuevos tejidos
vegetales, iniciando el ciclo de cultivo
in vitro.

12. Multiplicación
Consiste en aumentar la cantidad de brotes
para los nuevos ciclos de multiplicación y
poder destinar parte de ellos a la siguiente
etapa de producción.
En esta etapa, los medios de cultivo, los
reguladores de crecimiento como auxinas,
citocininas y ácido giberélico y las condiciones
de crecimiento juegan un papel crítico sobre
la multiplicación de los explantos.

13. Etapas de multiplicación
La etapa de multiplicación generalmente
comprende dos períodos:
1. la fase de inducción
2. la fase de multiplicación propiamente dicha

14. Fase de inducción
En esta fase se emplea concentraciones elevadas de
reguladores de crecimiento (generalmente de auxinas)
para favorecer la desdiferenciación.

15. Concentración de AUXINAS
los rangos de concentración más empleados de AUXINAS se mencionan a
continuación:
IBA (ácido 3-indolbutírico): 0,1-2 mM
2,4-D (ácido 2,4- diclorofenoxiacético): 4-35 mM
AIA (ácido 3-indolacético): 0,1-2 mM
ANA (ácido naftalenacético): 1-5 mM
Picloram: 1-10 mM

16. Fase de multiplicación
La fase de multiplicación propiamente dicha, requiere del empleo de un balance
hormonal adecuado para favorecer los procesos de diferenciación y multiplicación
celular, dependiente de reguladores del tipo de las citocininas

17. Concentración de citocininas
Los rangos de concentración más empleados de citocininas se mencionan a
continuación:
BA (N6-benciladenina): 1-20 mM
CIN (cinetina): 0,1-1 mM
ZEA (zeatina): 1-10 mM
2ip (isopentiladenina): 1-5 mM
TDZ (tidizuron): 0,01-1 mM

18. Los tipos de reguladores, sus
combinaciones y rangos de
concentraciones deben ser
optimizados para cada especie,
genotipo y etapa de multiplicación
determinada.
Los cultivos se incuban en luz a 27±2º
C con 14 horas de fotoperíodo e
intensidad lumínica moderada.

19. Enraizamiento
Busca la formación de raíces con el fin de convertir los
brotes en plántulas completas.
Para enraizar los plantines deben tener un tamaño
aproximado de 2 centímetros. Los brotes obtenidos durante
la fase de multiplicación se transfieren a un medio libre de
reguladores de crecimiento o que solo contenga hormonas
del tipo auxinas.
Algunas especies de plantas no necesitan pasar por esta
etapa y emiten sus raíces en el mismo medio de cultivo
donde desarrollan yemas nuevas, por lo tanto el proceso de
multiplicación y enraizamiento transcurren en forma
simultánea.

20. Aclimatación
Las plantas pueden adaptarse bien y lograr buena
calidad cuando tienen entre 3–5 cm. para Musa,
plantearon que la obtención de brotes mayores de 6
cm implicó plantas de muy buena calidad en fase de
aclimatización, lo que condujo a una supervivencia
superior al 95.5%.
Conociendo los gastos que se generan en esta fase se
puede ahorrar recursos si las plantas son extraídas
con el tamaño adecuado y se aclimatan mejor cuando
se mantienen 45 días bajo las condiciones climáticas
del territorio.

21. Aplicaciones
Obtención de plantas libres de patógenos
Preservación de germoplasma
Mejoramiento genético
Biosíntesis de metabolitos
Investigación básica en áreas como la genética,
fisiología y bioquímica

22. Ventajas
Producción de gran número de plantas
Obtención de plantas en cualquier época del año
Almacenamiento de plantas en poco espacio
Producción de plantas libres de enfermedades y plagas
Herramienta para el fitomejoramiento
Propagación de especies de difícil propagación por otros métodos, o en vías de
extinción

23. Ventajas
Clonación de individuos "élite", con desempeño agronómico destacado
Obtención de plantas libres de virus
Producción de semillas sintéticas
Conservación de germoplasma: material de un conjunto de individuos que
representa la variabilidad genética de una población vegetal
Obtención de metabolitos secundarios
Producción de nuevos híbridos

24. Desventajas
No todas las especies son viables de propagar in vitro
Algunas son recalcitrantes
Cada especie requiere de métodos específicos
La estandarización de protocolos resulta costosa

25. Bibliografía
• Díaz, M. y col. 2004. Biotecnología y mejoramiento genético en especies forrajeras.
https://ebookcentral.proquest.com/lib/uleamecsp/reader.action?docID=3178018&query=T
ECNICAS+DE+MEJORAMIENTO+GENETICO+EN+PLANTAS
• Sharry, S. y col. 2015. Plantas de probeta: manual para la propagación de plantas por
cultivo de tejidos in vitro.
https://ebookcentral.proquest.com/lib/uleamecsp/detail.action?docID=4499437&query=m
icropropagacion
• https://www.intagri.com/articulos/nutricion-vegetal/cultivo-in-vitro-de-celulas-y-tejidos-
vegetal
• http://jezuzvillalba.blogspot.com/2012/10/blog-post_2492.html
• https://www.intagri.com/articulos/nutricion-vegetal/cultivo-in-vitro-de-celulas-y-tejidos-
vegetal