O CULTIVOS IN VITRO

1. AUTORES:
Mero Pinargote Natacha Liceth
Meza Chávez Erika Vanessa
Meza Paladines Cirio Ronaldo
Orjuela Quiroz Johan Francisco
Pazmiño Farías Mónica Vanessa
Pita Landivar Cristian Javier
Quimis Laborde Bryan Joel
Ramos Casique Ana Gabriela
Rivero Moreira Arnaldo Andrés
Rojas Armijos Cristiam Ricardo
TEMA:
Micropropagación
CURSO:
7MO. “B”
DOCENTE:
Ing. Verónica Taipe

2. Contenido
1. INTRODUCCIÓN........................................................................................................3
2. OBJETIVOS.................................................................................................................4
2.1. Objetivo General...................................................................................................4
2.2. Objetivo Específico ...............................................................................................4
3. MARCO TEÓRICO......................................................................................................5
3.1. Fases oetapas de la micropropagación...................................................................5
3.1.1.1. FASE 0: Preparación del material Fisiología vegetal.....................................6
3.1.1.2. FASE 1: Establecimiento del cultivo..............................................................7
3.1.1.3. FASE 2: Multiplicación de los brotes.............................................................7
3.1.1.4. FASE 3: Enraizamiento y aclimatación..........................................................8
4. CONCLUSIONES........................................................................................................9
5. RECOMENDACIÓN....................................................................................................9
6. BIBLIOGRAFÍA........................................................................................................10

3. 1. INTRODUCCIÓN.
La principal característica de la Micropropagación es que consiste en la dispersión de
plantas en un ambiente artificial controlado, manejando un medio de cultivo adecuado.
Sin lugar a duda, es una de las técnicas más empleadas en la actualidad con fines
comerciales, para multiplicar de manera ilimitada plantas de calidad, resistentes a
enfermedades, con un mejor estado sanitario y además con una alta rentabilidad para
quien las produzca.
Siendo ésta una herramienta muy ventajosa en los programas de mejoramiento, ya que
tiene el potencial de producir plantas eficaces a escala comercial, a partir de un genotipo
selecto. De tal modo que podamos identificar la viabilidad de conservar la integridad
genética a través de una propagación clonal.
El objetivo de este trabajo es conocer las fases de la micropropagación y su importancia.
Ya que se necesita tener claro que la composición del medio depende de la especie
vegetal y de la etapa del proceso de micropropagación.

4. 2. OBJETIVOS.
2.1. Objetivo General.
o Conocer las fases de la Micropropagación y su importancia.
2.2. Objetivos Específicos.
o Definir las ventajas y desventajas de la micropropagación.
o Detallar las fases de la micropropagación.
o Establecer los pasos de obtención de los explantes.

5. 3. MARCO TEÓRICO.
Los primeros resultados obtenidos en el cultivo de tejidos se describen en 1902 pero fue
en 1922 cuando se alcanzó el primer resultado exitoso utilizando germinación de
semillas de orquídeas in vitro. Desde entonces Los cultivos in vitro reúnen gran
cantidad de técnicas destinadas a multiplicar, regenerar, multiplicar, recursos o
materiales de origen animal, vegetal en condiciones controladas y con altos niveles de
asepsia. Por ello los cultivos in vitro constituyen la base para la obtención y
regeneración de plantas genéticamente modificadas (JASNETH1973, 2014).
Esto es posible gracias a la propiedad de totipotencia que tienen las células vegetales,
esto es la capacidad de regenerar una planta completa cuando están sujetas a estímulos
adecuados. Así las células somáticas de cualquier tejido podrían formar tallos, raíces o
embriones somáticos de acuerdo con la competencia que posean y al estímulo que
reciban (Flores, 2017).
La Micropropagación o propagación clonal, se inicia con la extracción de pequeños
fragmentos de tejido tomados de diversas partes de la planta, tales como hojas, raíces,
segmentos nodales y gemas axilares, gemas florales y apicales. Una vez limpios y
desinfectados, los explantes son transferidos en condiciones asépticas a un medio de
cultivo adecuado. Subcultivos periódicos de dichos explantes permiten la amplificación
del material y, más tarde, su diferenciación de modo de generar una planta completa.
(Malajovich, 2017).
Dependiendo de las características de la planta que se pretenda propagar y del
objetivo perseguido, la micropropagación puede realizarse a través de tres vías de
regeneración: brotación de yemas adventicias preexistentes, producción de yemas de
novo y embriogénesis somática (Sofía Olmos, 2010).
3.1. Fases o etapas de la micropropagación
 Preparación del material fisiología vegetal.
 Establecimiento del cultivo.

6.  Multiplicación de los brotes
 Enraizamiento y Aclimatación
3.1.1.1. FASE 0: Preparación del material Fisiología vegetal
Para obtener explantes con un nivel nutricional y un grado de
desarrollo adecuado, es recomendable mantener a las plantas madre,
es decir la planta donadora de yemas, durante un período de tiempo
que puede oscilar entre unas semanas o varios meses en un
invernadero bajo condiciones controladas. En ese ambiente se cultiva
la planta en condiciones sanitarias óptimas y con un control de la
nutrición y riego adecuados para permitir un crecimiento vigoroso y
libre de enfermedades (Castillo, 2010).
El empleo de explantos que se encuentran expuestos a bajos niveles
de patógenos puede resolver el problema de la contaminación por
hongos y bacterias durante el establecimiento del cultivo in vitro.
Los factores que influyen sobre la calidad del explanto son:
 El tipo de órgano que sirve como explanto
 La edad ontogénica y fisiológica del mismo
 La estación en la cual se colecta el material vegetal
 El tamaño
 El estado sanitario general de la planta donante.
La planta donante debe elegirse sobre la base de una selección masal
positiva para las características agronómicas deseables. Una vez
seleccionados los individuos, es preciso definir el tipo de explanto a
establecer en condiciones in vitro.
En general, los órganos jóvenes o bien rejuvenecidos son los que
tienen mejor respuesta en el establecimiento que los obtenidos a partir

7. de materiales adultos. Se recomienda colectar explantos primarios a
campo durante la estación primaveral y estival, cuando existe una
brotación activa de las yemas, ya que el empleo de yemas en estado
de dormición ocasiona serios problemas de contaminación (Galdeano,
2015).
3.1.1.2. FASE 1: Establecimiento del cultivo
El objetivo de esta etapa es establecer cultivos viables y axénicos. El
éxito está determinado por la edad de la planta donante, la edad
fisiológica, el estado de desarrollo y el tamaño del explanto.
Los materiales que muestran tener mayor capacidad regenerativa son
los obtenidos de tejidos meristemáticos jóvenes, sean yemas axilares o
adventicias, embriones o semillas en plantas herbáceas y tejido
meristemáticos que como el cambium determinan el crecimiento en
grosor de las plantas leñosas. Las yemas adventicias (yemas formadas
de novo) tienen una mayor tasa de variación somaclonal en cultivo.
Para asegurar las condiciones de esterilidad del cultivo se pueden
hacer a priori análisis que detecten patógenos (ELISA, PCR). En el
momento de manejar el explante se procede a la desinfección del
mismo (etanol, hipoclorito de Na). Una vez establecido el cultivo, la
aparición de hongos y bacterias puede hacer necesario la utilización
de fungicidas y antibióticos (Flores, 2017).
3.1.1.3. FASE 2: Multiplicación delosbrotes
El objetivo de esta etapa es mantener y aumentar la cantidad de brotes
para los nuevos ciclos de multiplicación sucesivos y poder destinar
parte de ellos a la siguiente etapa de producción (enraizamiento,
bulbificación, etc.). La metodología de multiplicación para cada
genotipo dependerá de los protocolos que se hayan desarrollado para
el mismo. El desarrollo de estos protocolos es un proceso empírico,

8. pues no todos los genotipos responden de igual modo en un mismo
medio de cultivo. Es importante señalar que en esta etapa, cualquiera
que sea la vía de regeneración empleada, es conveniente evitar la
formación de callo para disminuir el riesgo de variación somaclonal
(Picó, 2015).
3.1.1.4. FASE 3: Enraizamiento yaclimatación.
En algunos protocolos se obtiene plantas ya enraizadas durante la
fase de multiplicación. Sin embargo, en numerosas ocasiones la
formación de raíces requiere de la transferencia de las plantas a un
medio de cultivo distinto que contenga reguladores de crecimiento, de
tipo auxina, que induzcan la formación de las raíces. También, en
algunos casos las plantas no enraizadas de la fase multiplicativa
pueden enraizarse durante el proceso de aclimatación en túneles de
enraizado, en los que se utilizan auxinas en la solución de riego. Las
plantas enraizadas necesitan de un proceso de aclimatación que es
clave para concluir con éxito el proceso de propagación. La
transferencia directa de una planta cultivada in vitro a las condiciones
de crecimiento in vivo supondría la muerte de la planta, pues las
plantas cultivadas in vitro se mantienen en condiciones muy
controladas de humedad y temperatura y se les proporciona todos los
requerimientos nutricionales. La fase de aclimatación consiste en el
cambio de condiciones ambientales y nutricionales de manera
paulatina, para que la planta vaya aumentando su capacidad
fotosintética, ejerza la regulación estomática y se vaya fortaleciendo.
Tras este proceso, se podrá cultivar la planta en condiciones estándar
de campo o invernadero (Domenech, 2011).

9. 4. CONCLUSIONES
Actualmente la micropropagación ha cobrado un mayor interés debido a las
expectativas que se tiene en cuanto a la biotecnología. He aquí también su
importancia en el medio, dado que esta técnica logra aumentar las ganancias de las
industrias agrícolas, mejorar el rendimiento en siembras y cultivos, entre otros. Sin
embargo, esta técnica al igual que las otras, tiene sus ventajas y desventajas.
Dentro de las ventajas más significativas están:
 Utilización de pequeños inóculos de plantas para producir una gran
cantidad de plántulas, que pueden almacenarse en espacios reducidos.
 Las plantas producidas generalmente están libres de hongos y bacterias,
en algunos casos hasta de virus ya que es una técnica que requiere de
mucha asepsia.
 Los niveles de nutrientes, la luz, la temperatura y otros factores, pueden
ser fácilmente controlados para acelerar su multiplicación.
 Los clones pueden ser propagados en cualquier época del año.
 Permite la aplicación de la base genética de una especie.
Por otra parte, también nos encontramos con ciertas desventajas, como:
 Costos elevados al requerir la implementación de infraestructura y
equipos.
 Requiere de especial cuidado, ya que al haber un manejo de material
genético se podrían presentar problemas durante el proceso, como
contaminación o excesiva producción de callos.
5. RECOMENDACIÓNES.
 Usar explantes debidamente seleccionados de plantas madres sanas para tener un
desarrollo adecuado de los mismos.
 Establecer los explantes para su reproducción en una habitación libre de
contaminación, con control de temperatura y humedad.
 Cumplir las normas de desinfección de los explantes para evitar la reproducción
de organismos patógenos en la etapa de multiplicación.

10. 6. BIBLIOGRAFÍA
Castillo,A.(2010). www.inia.uy.Obtenidode
http://www.inia.uy/Publicaciones/Documentos%20compartidos/11121922080710241
7.pdf
Domenech,G.(14 de Febrerode 2011). Obtenidode https://riunet.upv.es/handle/10251/9798
Flores,J.(Noviembre de 17de 2017). es.slideshare.net.Obtenidode
https://es.slideshare.net/JoseFloresMayori/micropropagacion-81724000
Galdeano,E.(2015). www.chilebio.cl.Obtenidode https://www.chilebio.cl/wp-
content/uploads/2015/12/Parte_IV.pdf
JASNETH1973. (07 de Noviembrede 2014). biotecnologia1unad2015296.wordpress.com.
Obtenidode https://biotecnologia1unad2015296.wordpress.com/2014/11/07/histioa-
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Malajovich,M. A.(2017). bteduc.com.Obtenidode
https://bteduc.com/artigos/13_Micropropagacion_laboratorio_educacional.pdf
Picó,M. B. (Enerode 2015). riunet.upv.es.Obtenidode
https://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/51895/Gisbert%20and%20Pico_2015%
20micropropagaci%F3n.pdf?sequence=1
Sofía Olmos,G.L. (Enerode 2010). www.researchgate.net.Obtenidode
https://www.researchgate.net/publication/304459382_IV_Capitulo_1_Micropropagac
ion
Varela,F.(07 de Mayo de 2018). tecnoagro.com.mx.Obtenidode
https://tecnoagro.com.mx/no.-124/etapas-de-micropropagacion