2. INSTITUTO NACIONAL DE CIENCIAS MÉDICAS Y NUTRICIÓN
(SALVADOR ZUBIRÁN) “LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA”
Objetivo
Conocer las características que debe reunir un laboratorio, para poder emplear
las técnicas y procedimientos básicos para la aprobación de dicho recinto, así
como el manejo que se le da en cada área de investigación y las medidas de
precaución que se deben de tomar en cada una de ellas.fig1.1
Introducción
Las personas que trabajan en laboratorios preparan muestras y realizan
pruebas, reacciones y análisis para investigaciones y para la detección de
enfermedades y patógenos. Trabajan con sustancias químicas, enseres de
vidrio, llamas y equipos de laboratorio manuales y automáticos. Aunque los
trabajadores de laboratorios hacen experimentos con muestras y reactivos, la
seguridad en el laboratorio no debe ser una incógnita.
El laboratorio constituye el lugar de trabajo, en enseñanza e investigación, es
preciso conocer las características que debe de reunir, no importando si su
importancia, sea en investigaciones a escala industrial o en cualquiera de sus
especialidades, ya sea química, dimensional, electricidad, biología.
fig 1.1
El Instituto Nacional de
Ciencias Médicas y
Nutrición pudimos observar
que se encuentra ubicado
estratégicamente al sur de la
Ciudad de México

3. El laboratorio debe ser un lugar seguro para trabajar. Para ello se deben tener
siempre presente los posibles peligros asociados al trabajo con materiales
peligrosos, aunque el trabajo en el laboratorio también requiere la observación
de una serie de normas de seguridad que eviten posibles accidentes debido al
desconocimiento de lo que se está haciendo o a una posible negligencia de las
personas que estén en un momento dado, trabajando en el Laboratorio. fig 1.2
Así entonces deberán conocerse las características que debe reunir un
laboratorio para su buena acreditación como son:
 Localización y orientación del laboratorio
 Instalaciones fig. 1.3
fig 1.2
fig 1.3
Dentro del hospital
visitamos el Laboratorio
especializadoen el área de
Microbiología
Aquí vemos los materiales de
construcción de la
infraestructura del hospital
(laboratorios); se percibe que
son materiales de resistencia.

4.  Ventilación y calefacción
 Iluminación
 Desagüe
 Conductos en general
 Materiales para la construcción
 Inmuebles de trabajo
 Seguridad y precauciones en el laboratorio
Dependiendo el tipo de laboratorio estas normas pueden estar sujetas a
diversos cambios en medidas de seguridad.
Desarrollo
Acreditación de laboratorios que realizan análisis microbiológicos
Dichos laboratorios deben de cumplir con ciertas reglas para poder ser
acreditados, pues estas reglas son las que deben aplicarse a todo tipo de
mediciones objetivas, ya sean o no rutinarias, o como parte de actividades de
investigación y desarrollo.
Como cumplimiento de ciertas reglas son:
Personal
Los análisis microbiológicos deben ser realizados o supervisados por una
persona con experiencia (fig. 1.4) y con titulación superior en microbiología o
equivalente, pues el personal debe tener la necesaria experiencia profesional
práctica para que se le permita realizar sin supervisión trabajos cubiertos por el
alcance de la acreditación o se considere que tiene experiencia suficiente como
para supervisar el trabajo
acreditado. (fig. 1.5)
fig. 1.5
fig. 1.4

5. Condiciones Ambientales
Locales
 Un laboratorio suele tener áreas de ensayo (dónde se realizan análisis
microbiológicos específicos y actividades relacionadas) y áreas
auxiliares (recepción, pasillos, oficinas de administración, guardarropas y
aseos, almacenes, archivos, etc.). En general, existen requisitos
ambientales específicos para las áreas de ensayo.
 Dependiendo del tipo de ensayos que se realicen, el acceso al
laboratorio microbiológico debe restringirse al personal autorizado.
Cuando existan este tipo de restricciones, el personal debe conocer:
(a) el uso restringido de una determinada área; (fig. 1.6)
(b) las restricciones impuestas al trabajo que puede realizarse en dichas áreas;
(c) las razones para imponer esas restricciones;
(d) los niveles de
contaminación apropiados.

 El laboratorio debe tomar las medidas necesarias para reducir al mínimo
el riesgo de contaminación cruzada, siempre que dicho riesgo sea
importante. Este objetivo puede conseguirse, por ejemplo, mediante la
adopción de las siguientes medidas:
Las entradas a cada
laboratorio del hospital;
están libres al paso, con
indicaciones de lo que está
prohibido hacer y con
señalamientos de la parte
interior
fig 1.6

6. (a) construir el laboratorio conforme a un diseño sin camino de regreso’(fig. 1.7)
(b) realizar los procedimientos de una manera secuencial utilizando medidas
apropiadas para asegurar la integridad de los ensayos y las muestras (por
ejemplo, utilizando recipientes herméticos).
(c) separar las actividades en el tiempo o en el espacio.
En general debe ser conveniente que existan áreas separadas o claramente
designadas para algunas actividades como por ejemplo:
 recepción y almacenamiento de muestras
 preparación de muestras (por ejemplo, debe utilizarse un área separada
para la preparación de productos en polvo que pueden estar muy
contaminados)
 examen de muestras, incluyendo su incubación
 mantenimiento de microorganismos de referencia
 preparación de medios y equipos, incluyendo su esterilización

 descontaminación.
El área de lavado puede compartirse con otras partes del laboratorio siempre
que se adopten las debidas precauciones para evitar la transferencia de
substancias que afectarían negativamente el crecimiento microbiano.
Los equipos del laboratorio no deben moverse habitualmente entre las distintas
áreas, para evitar una contaminación cruzada accidental. En el laboratorio de
biología molecular debe disponerse de pipetas, puntas, centrifugadoras, tubos,
etc. de uso exclusivo para cada área de trabajo, las cuales deberán ser lo
fig 1.7
En esta imagen observamos
un plano de la ubicación de
cada parte y vemos que está
desarrollado de una manera
inteligente con todos los
señalamientos y con las
medidas de seguridad.

7. suficientemente espaciosas para mantenerse limpias y ordenadas, al igual
deberán mantenerse ventiladas y mantenidas a una temperatura adecuada.
Esto puede conseguirse con ventilación natural o forzada, o mediante el uso de
aire acondicionado. Cuando se utilice aire acondicionado, se emplearán unos
filtros adecuados, que tendrán que inspeccionarse, mantenerse y reponerse
según el tipo de trabajo realizado.
Otro aspecto importante en cuanto a condiciones ambientales, es la reducción
de contaminación del laboratorio, la cual se reduciría adoptando algunas
medidas; tales como:
 Superficies lisas en paredes, techos, suelos y mesas de trabajo. No se
recomienda el empleo de madera como material de revestimiento
 Uniones cóncavas entre suelos, paredes y techos
 Apertura mínima de ventanas y puertas mientras se estén realizando los
ensayos
 Instalación de persianas externas
 Fácil acceso para la limpieza de las persianas internas cuando sea
imposible instalarlas en el exterior;
 Las tuberías que transportan líquidos no deben pasar por encima de las
superficies de trabajo salvo que estén provistas de un revestimiento
herméticamente sellado
 Filtros para el polvo en las entradas de aire del sistema de ventilación
 Instalaciones de lavamanos de accionamiento no manual
 Armarios hasta el techo
 Evitar las maderas rugosas y sin revestir
 Superficies de madera de instalaciones y accesorios debidamente
selladas
 Materiales y equipos colocados de forma que se facilite su limpieza
 Ausencia de mobiliario, documentos u objetos que no sean los
estrictamente necesarios para la realización de los ensayos.
Condiciones Ambientales
El laboratorio debe establecer un programa adecuado de vigilancia de las
condiciones ambientales que incluya, el uso de placas de sedimentación y
frotis de superficies. Se asignarán unos recuentos máximos de
microorganismos que se consideran aceptables y existirá un procedimiento
documentado en el que se describan las medidas a tomar para corregir las
situaciones en que se sobrepasen dichos límites.

8. Higiene
El laboratorio debe establecer un programa de limpieza para las instalaciones,
los equipos y las superficies, teniendo en cuenta los resultados de la vigilancia
de las condiciones ambientales y la posibilidad de contaminación cruzada, así
mismo, evitar la acumulación de polvo, reduciendo al mínimo el trabajo con
papeles en el laboratorio y no permitiendo la presencia de plantas y objetos
personales innecesarios en el área de trabajo.(fig. 1.8)
Equipos
Mantenimiento
El mantenimiento de los equipos esenciales debe realizarse dependiendo de
factores tales como la frecuencia de uso, donde el laboratorio debe adoptar
medidas para evitar la contaminación causada por dichos equipos, como:
 el material desechable debe estar limpio o estéril, en función de su uso;
 el material de vidrio reutilizable debe estar debidamente limpio o estéril,
en función de su uso.
El mantenimiento de algunos equipos, consiste en la limpieza y revisión, así
como la inspección de daños, verificación general y si es necesario
esterilización:
 equipos de uso general – aparatos de filtración, recipientes de vidrio o
plástico (matraces, tubos de ensayo), placas Petri de cristal o plástico,
instrumentos de muestreo, asas de siembra de platino, níquel/cromo o
material de plástico desechable
 baños termostáticos, estufas, cabinas de seguridad microbiológica,
autoclaves, homogeneizadores, refrigeradores, congeladores;
fig. 1.8

9.  material volumétrico, como pipetas, dispensadores automáticos,
sembradores en espiral; (fig.1.9)
 instrumentos de medida, como termómetros, cronómetros, balanzas, pH-
metros, contadores de colonias.
Calibración y verificación de equipos
El laboratorio debe establecer un programa de calibración y verificación de los
equipos que puedan influir directamente en los resultados de los ensayos. La
frecuencia de esas calibraciones y verificaciones se establecerá en función de
la experiencia documentada y dependerá del uso, el tipo y el funcionamiento
previo de los equipos.(fig.2.0)
fig 2.0
fig. 1.9

10. Reactivos y Etiquetado de las substancias
Reactivos
El laboratorio debe asegurarse de que la calidad de los reactivos utilizados sea
apropiada para los ensayos realizados. Debe verificar la idoneidad de cada uno
de los lotes de reactivos críticos para el ensayo, al inicio y durante su período
de validez, utilizando microorganismos de control positivo y negativo.
Etiquetado
El laboratorio debe asegurarse de que todos los reactivos, medios, diluyentes y
otras suspensiones estén debidamente etiquetados, indicando, según sea
apropiado, identidad, concentración, condiciones de conservación, fecha de
preparación, fecha de caducidad validada y/o períodos recomendados de
almacenamiento. Asimismo, los registros deben permitir la identificación de la
persona responsable de la preparación. (fig 2.1)
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD
Dentro del laboratorio aprendimos las Medidas de Bioseguridad que deben de
haber para recrear un ambiente de trabajo óptimo.
o Todo laboratorio debe de estar ventilado e iluminado adecuadamente, y
los servicios de agua deben de funcionar satisfactoriamente
o Las mesas de trabajo deben confeccionarse de material de superficie
continua sin hendiduras e impermeable, resistente a sustancias
corrosivas y fáciles a la limpieza.
fig 2.1

11. o Las paredes y pisos deben de ser lisos para facilitar limpieza con
soluciones desinfectantes.
o Debe de haber áreas de tránsito libre sin obstrucciones algunas.(fig. 2.2)
CLASIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS POR SUS GRUPOS DE RIESGO
Dentro del área de investigación del laboratorio que visitamos encontramos que
estudiaban a los “microorganismos” y se clasifican (de acurdo a si riesgo) de la
siguiente manera.
 Grupo de Riesgo I
Incluye a los agentes que generan un limitado riesgo para el individuo .Este
grupo de microorganismos tiene bajas posibilidades de provocar
enfermedades en el hombre o en los animales.
 Grupo de Riesgo II
Agrupa a los agentes que representan un riesgo individual moderado. Estos
patógenos pueden producir enfermedad pero no implican un riego grave
para el personal del laboratorio. (Actinobacter, Aeromas, Mycobacterium)
 Grupo de Riesgo III
Aquellos agentes que representan un riesgo individual elevado, suelen
provocar una enfermedad grave en el hombre aunque no suele
propagarse.(Brucella, Taeniasolium, Triponozomacruzi).
 Grupo de Riesgo IV
fig. 2.2
Aquí percibimos el área de
trabajo, podemos ver que está
adecuado con luz tanto solar
como artificial,así como con
aire acondicionado y el paso
está al libre tránsito del
personal.

12. Tienen un alto riesgo para el individuo y para la comunidad, suelen provocar
enfermedades graves para la persona y pueden propagarse fácilmente.
(VIH, Virus Ebola, Virus de las fiebres hemorrágicas).
TIPOS DE LABORATORIOS CON RELACION AL NIVEL DE SEGURIDAD
 LABORATORIO NIVEL 1
Laboratorio básico que permite la manipulación de microorganismos de bajo
riesgo en ambientes, son adecuados para centros de salud, laboratorios
clínicos y hospitales de nivel local.
 LABORATORIO NIVEL 2
Laboratorios que cuentan con cabinas de bioseguridad y dispositivos de
protección personal o de contención física adecuados para el trabajo con
microorganismos. Tiene áreas de transito limitado; funciona en hospitales
regionales y laboratorios de salud pública.
 LABORATORIO NIVEL 3
Este tipo de laboratorios está implementado con áreas de acceso restringido y
cabinas de bioseguridad. Son laboratorios de investigación biomédica y de
diagnóstico especializado.(fig. 2.3)
.
fig. 2.3
En esta fotografía podemos
observar la entrada al área de
Mico bacterias,el cual es un
laboratorio de Nivel 3

13.  LABORATORIO NIVEL 4
Es un laboratorio de contención máxima que cuenta con recintos separados o
aislados, con sistemas de apoyo exclusivo y en cuya infraestructura incluye
barreras de contención adecuados para trabajar con agentes de clase IV. El
personal que labora estas áreas deberá traer ropa especial.(fig. 2.4)
Actividades que se desarrollan en el laboratorio de Microbiología Clínica
El laboratorio de Microbiología Clínica se divide en diferentes áreas de trabajo
para el estudio de diferentes microorganismos las cuales son: Recepción,
Bacteriología, Parasitología, Hemocultivos; Hongos; Anaerobios, Mico bacterias
y Antibióticos.(fig. 2.5)
Al laboratorio llagan muestras tanto de
los pacientes del hospital como de
pacientes externos (provenientes de
otros hospitales tanto de la Ciudad de
México como de hospitales del interior
de la República) entre las cuales
pueden ser muestras de orina, sangre,
líquidos cefalorraquídeos; muestras de
catéter, biopsias, heridas, líquidos de
ascitis, aspirados endotraquiales,
muestras de VIH, entre otros.
Una vez que se reciben las muestras pasan al área de recepción en dónde se
siembran y se distribuyen a las mesas o aparatos correspondientes.
fig. 2.4
fig. 2.5
En esta imagen encontramos el
CUARTO OSCURO que se usa
para observar las muestras de
tuberculosis.

14. Todas las muestras líquidas (muestras de sangre, líquidos cefalorraquídeos o
líquidos de ascitis) se siembran tanto en
medios de cultivo como en soluciones
correspondientes, las cuales se registran
y se introducen en un aparato llamado
VITEK 2 (fig.2.6) , el cual es un aparato
que tiene separaciones para introducir
las botellas de las soluciones y tengan
movimiento para homogenizar la
muestra y favorezca el desarrollo
bacteriano; una vez que llegue a una
curva de crecimiento favorable para su estudio “pita” una alarma para poderlo
sacar y comenzar a trabajarlo. Las demás muestras una ve sembradas pasan a
las diferentes mesas como son Bacteriología I y II, Parasitología, Hemocultivos,
Hongos, Anaerobios y Mico bacterias, donde estudian a fondo el
microorganismo para conocer sus
características, formas y así saber el
diagnóstico de los pacientes.(fig. 2.7)
Una vez estudiado el microorganismo la
muestra se pasa a la mesa de
antibióticos (generalmente son cepas multirresistentes) para que dependiendo
del tipo de microorganismo se le corran una serie de antibióticos para conocer
la sensibilidad y resistencia que tengan los microorganismos a los antibióticos y
poder darle un tratamiento óptimo al
paciente.(fig. 2.9)
Cada mesa tiene sus propios
protocolos, aparatos, y
metodologías a seguir para la
realización de su trabajo. (Fig
3.0)Un punto importante y que cabe
resaltar es la exactitud en cuanto a
la entrega de resultados ya que una
vez ingresada la muestra al
fig 2.7
fig 2.9
fig 3.0

15. laboratorio tiene cierto lapso de tiempo en el que se deben entregar resultados
tanto del microorganismo que tiene la muestra así como el tratamiento a seguir
para la pronta recuperación del paciente, por lo que se debe trabajar con
responsabilidad, precisión y veracidad en los resultados que cada mesa arroja,
pues esta en juego la salud e incluso la vida de una persona.
Metodología de la mesa de antibióticos
Una vez realizado el procedimiento arriba mencionado, se comienza a trabajar
con la cepa que se recibe. Lo primero que se debe hacer es resembrar todas y
cada una de las muestras que lleguen a la mesa en un agar llamado “Gelosa
Sangre de Carnero” para que la curva de crecimiento del microorganismo tenga
aproximadamente 24 hrs. Cuando se tiene el microorganismo en este estado
se “cosecha” para posteriormente guardarlo en viales que contengan medio de
cultivo (medio glicerado) e introducirlo en Ultra congeladores (con temperatura
de -80ªC) y formar lo que se conoce como “Cepario”. Esto se realiza para que
si se tiene alguna duda o corrección de los resultados se tenga de donde
obtener la muestra.(fig. 3.1)
El método que se utiliza para conocer la sensibilidad o resistencia de los
microorganismos se llama “Micro dilución en placa”, al cual le anteceden una
serie preparaciones para poder vaciar en las placas la cepa. Una vez teniendo
el microorganismo con curva de crecimiento de 24 hrs. Se toma una porción
pequeñísima de cepa y se disuelve en solución salina para poder ajustar al 0.5
en la escala de MC Farland con ayuda de un aparato llamado Nefelómetro;
posteriormente se tomas 10 micro litros de esa solución salina y se vierten en
20 mL. de una solución llamada “PBS”, la cual tiene 7.3 de pH. Una vez
teniendo de esta manera la cepa se comienza a trabajar con la placa (la cual
tiene 84 pozos, se distribuyen en columnas del 1 al 12 y en filas de la “A” a la
fig 3.1
En esta imagen encontramos
los viales y las cajas en
donde se guardan para
posteriormente introducirlos
en los Ultra congeladores.

16. “H”.) se vacía medio de cultivo (Miuller Hinton Caldo) en los pozos
correspondientes de la columna 2 a la 12, dejando la columna 1 vacía.
Posteriormente se agrega el antibiótico en las columnas 1 y 2 de la fila “A”
hasta la fila “H”, y se comienza a diluir a partir del pozo 2 hasta el pozo 11; de
manera que una vez preparada la placa; los pozos de la columna 2 a la 11
tienen medio de cultivo y antibiótico, la columna 1 antibiótico y la columna 12
medio de cultivo. Teniendo de esta manera la placa se introduce la cepa de la
fila “A” hasta la “G”; la fila “H” lleva la cepa control, para verificar y saber la
sensibilidad o la resistencia al antibiótico.
Esta mesa lleva ciertas líneas de investigación como lo son las “Beta Lacta
masas” y “Amp C” las cuales son un mecanismo de resistencia a ciertos
antimicrobianos como las cefalosporinas presentes en las cepas.(fig. 3.2)
CONCLUSIONES
Como conclusiones podríamos agregar que este trabajo nos ayudó a saber
más acerca de la estructura de un laboratorio; así como de los materiales que
se usan, las medidas de seguridad; también observamos cómo se trabajaba en
un laboratorio y a que ramas de investigación está dirigida el área de éste.
Con esta investigación que realizamos ampliamos nuestro conocimiento y
ponemos un tanto en práctica lo visto en clase, además que tuvimos la grata
experiencia de conocer un laboratorio a un nivel más avanzado como es el
caso del Laboratorio de Microbiología Clínica en el Instituto Nacional de
Ciencias Médicas y Nutrición Salvador Zubirán.
Observamos la manera de trabajo, la distribución de cada área laboral en el
laboratorio, aprendimos cuáles son los materiales e instrumentos más
requeridos así como su uso y manera de trabajar con ellos.
fig 3.2
Mediode Cultivo
GelosaSangre de
Carnero
Tuboscon
PBS
Placaspara la
Micro Dilución

17. También logramos adentrarnos en el mundo de la microbiología y conocer más
a fondo la investigación de estos seres microscópicos. Observamos la
importancia, pero también lo dañinos que pueden ser los microorganismos.
Nuestros objetivos fueron logrados ya que conocimos todo lo que requerimos
saber de un laboratorio: su distribución, las medidas de seguridad que se
deben de seguir, los materiales más usados así como su importancia y
clasificación, el área de investigación del laboratorio (microbiología), los
distintos tipos de laboratorios, los cuidados requeridos para trabajar y todo lo
relacionado en cuanto a la infraestructura de un laboratorio.
BIBLIOGRAFIA
*M.C. Martí (1997) Prevención de Riesgos Biológicos en el Laboratorio. Madrid
*M. Bultó y Cols (1992). Seguridad y Condiciones de Trabajo en el Laboratorio.
Madrid