2. Integrantes: Campos, Belén Mattera, Vanesa Goncebatt, Carlos Javier Moreira Toja, Ignacio Agustín Ripoll, Lucas Wisner, Darío
3. El objetivo del presente trabajo es obtener cafeína en estado puro a partir de granos de café, mediante las técnicas aprendidas en el curso. Objetivo
5. Modo de actuar Cafeína Droga psicoactiva Aumenta la actividad de un neurotransmisor excitatorio (glutamato) Estimula el sistema nervioso central Altera temporalmente el funcionamiento habitual del organismo Inhibe la liberación de un neurotransmisor inhibitorio (GABA)
9. Reactivos y solventes Café molido Agua destilada Cloroformo Sulfato de sodio anhidro Tolueno Éter de petróleo Sílica gel Sulfato ferroso Ácido sulfúrico Ácido nítrico NH3OH
10. Materiales Balanza granataria Manta calefactora Plato poroso Mechero de Bunsen Equipo de filtración al vacío Vaso de precipitados Varilla de vidrio Columna para cromatografía Tubo de ensayo Placa de sílica gel para CCD
11. Se pesan 100 gr de café expreso molido en una balanza granataria, se vierten 400 ml de agua destilada, y se agregan dos o tres trozos de plato poroso para evitar proyecciones en el posterior calentamiento. Se calienta mediante el uso de una manta calefactora y se deja bullir durante 15 a 20 minutos. Se filtra en caliente, y se realizan varios lavados con agua caliente, descartando el residuo sólido. Protocolo a desarrollar
12. La extracción inerte se realiza para separar la glucosa del resto de los compuestos, siendo ésta mas soluble en agua que en solvente orgánico La extracción se realizará con 20 mililitros de cloroformo, realizando nuevamente este paso, esta vez con 10 mililitros de solvente orgánico. Ambas fases se juntan para dar un resultante de 30 mililitros, teniendo allí cafeína, taninos y ácidos clorogénicos. Extracción inerte
13. Se realizarán varias CCDs para comparar los rfs de los compuestos resultantes de la extracción, y se comparará con el patrón de cafeína en pastilla previamente comprado. Los solventes elegidos como fase móvil serán: Cromatografía en capa delgada (C.C.D.)
14. Se realizará para separar los compuestos resultantes de la extracción inerte, utilizando como eluyente el/los solvente/s que más convengan, con el fin de separar en una fracción la cafeína lo más pura posible. A cada fracción se la someterá a un revelado bajo luz UV para divisar presencia de compuestos, ya sea cafeína u otras impurezas. Cada fracción tomada será de 2 a 5 mililitros, dependiendo de la cantidad de muestra obtenida del rotavapor. Cromatografía en columna
15. Para comprobar que la cafeína obtenida, luego de la columna, está pura se determina el punto de fusión, si es de 236 ºC y el rango de fusión es menor de 2ºC puede decirse que la muestra esta pura. Estimación de pureza
16. Prueba de la murexida: En un tubo de ensaye se coloca una pequeña cantidad de cafeína muestra y 1 ml de ác. Nítrico, y se pone a calentar en un mechero de bunsen hasta que está mezcla se seque en el tubo, esto tendrá como consecuencia que el tubo quede de color amarillo mostaza.Después de este procedimiento se pone el tubo a enfriar a temperatura ambiente.Posteriormente se le agregan unas gotas de NH3OH, esto propiciara un color rojo púrpura, el cual nos indicara que esta presente el grupo purina de la cafeína. Identificación
