El documento describe los objetivos de la siembra de muestras clínicas en medios de cultivo, que son facilitar el crecimiento bacteriano, determinar las bacterias causantes de infecciones frente a colonizadores, y obtener un desarrollo suficiente para su identificación. También explica conceptos básicos sobre medios de cultivo como su composición, clasificación y controles de calidad.
3. Facilitar el crecimiento y el aislamiento de las bacterias
presentes en una muestra clínica.
Determinar qué bacterias entre las que se desarrollan
tienen más probabilidades de ser las causantes de la
infección y cuales son sus posibles contaminantes o
colonizadores.
Obtener un desarrollo suficiente de las bacterias de
importancia clínica para permitir su identificación y su
caracterización.
CULTIVO PURO
CULTIVO MIXTO
CULTIVO CONTAMINADO
4. DEFINICIÓN
Sustrato sólido, líquido o semisólido que contiene
todos los nutrientes necesarios para el crecimiento y
desarrollo de los gérmenes.
Fuentes de energía, carbono, nitrógeno, fósforo,
azufre y varios minerales.
pH
Luz
Temperatura
Esterilidad absoluta (salvo excepciones)
Recipientes adecuados
5. Es importante destacar que la transición exitosa de un microorganismo in
vivo a un ambiente in vitro va a depender de:
Disponibilidad de nutrientes esenciales
Condiciones ambientales adecuadas
pH
Temperatura
Oxígeno y CO2
Presión
Luz
6. SÓLIDOS
LÍQUIDOS
SEMISÓLIDOS
Clasificación de los medios
de cultivo según consistencia
12. Enriquecimiento
Nutritivo
Selectivo y
diferencial
Clasificación de los medios
de cultivo según utilización
13. MEDIOS NUTRITIVOS
Contienen nutrientes que
favorecen el desarrollo de la
mayoría de los
microorganismos sin
requerimientos especiales de
cultivo.
No promueven el
crecimiento de ningún
agente en particular
15. MEDIOS SELECTIVOS
Contienen uno o más agentes que inhiben el
crecimiento de los microorganismos que no se
quieren estudiar
Agentes inhibidores: colorantes, sales biliares,
alcoholes, ácidos y antibióticos
16. MEDIOS DIFERENCIALES
Contienen un factor o factores que permite que las
colonias de una especie o un tipo bacteriano
exhiban ciertas características metabólicas o de
cultivo que puedan utilizarse para diferenciarlas de
otras bacterias que crecen en el mismo agar
17. MEDIOS ESPECIALES
MEDIOS
CROMÓGENOS
MEDIOS DE
TRANSPORTE
MEDIOS DE
CONSERVACIÓN
18.
19. Sustancias cromogénicas:
- Son productos químicos de síntesis que son
incoloros cuando se unen a sustratos naturales por enlaces
que son hidrolizados por enzimas microbianas específicas.
- Cuando la enzima microbiana hidroliza el enlace, se
libera el compuesto cromogénico, que adquiere un color
intenso.
- Ejemplo: Cromo agar (agentes uropatógenos), se
pone en evidencia la actividad enzimática de la B-
glucoronidasa o B- galactosidasa de las bacterias
formándose colonias de diferentes colonias según la especie.
- Identificación presuntiva, haciendo innecesaria la
realización de pruebas bioquímicas.
20. Medios para bacterias no exigentes
- agar
- extracto de carne
- peptona
- NACL
- leche descremada (congelar cepas)
NORMATIVA ISP, entregar
21. CONTROL DE CALIDAD
El Control de Calidad en la preparación y evaluación de
los medios de cultivo es considerado como una esencial
y buena práctica de laboratorio, necesaria para mantener
el nivel y la ejecución de cualquier técnica microbiológica.
Proceso continuo que se extiende desde las materias
primas ; a través del productor hasta el producto final
utilizado en los diferentes departamentos de análisis y
diagnóstico microbiológico.
22. ▪ Recuperación o supervivencia de los microorganismos de interés
(Productividad)
▪ Inhibición o suspensión de los microorganismos no deseados.
(Selectividad)
Propiedades bioquímicas (diferenciales y diagnósticas)
Propiedades físicas (por ejemplo, pH, Volumen)
Sea estéril .... etc.
El Jefe inmediato responsable del área
* Deberá analizar mensualmente los resultados de las pruebas
realizadas por el responsable del departamento de control de calidad
* Evaluará el cumplimiento de objetivos a través de los resultados
23. CRITERIOS DE EVALUACIÓN DE LA CALIDAD
DE LOS MEDIOS DE CULTIVOS PREPARADOS.
Se evalúa utilizando criterios objetivos del medio respecto a:
La recuperación o supervivencia de los microorganismos de interés
La inhibición o supresión de los microorganismos no deseados tiene que ser
cuantitativa
Los atributos ( por ejemplo: Propiedades físicas y bioquímicas)
Rajadura del plato o envase
Variaciones en el volumen del medio
Hemólisis
Cristales en el medio
Presencia de burbujas
Presencia de coágulos
Cambio de color normal
Contaminación
Falla en la inhibición de microorganismos saprofitos
Esterilidad
24. PRUEBAS FUNCIONAMIENTO
Para evaluar cada lote de medio de cultivo que sea
recibido en el laboratorio, se emplean cepas patrones
(ATCC) de varios géneros y especies de acuerdo al
medio de cultivo a analizar.
El control del funcionamiento consistirá en
comprobar:
capacidad del medio de recuperar un bajo
número de los microorganismos más sensibles
para los que ha sido preparado.
capacidad de inhibir un alto número de los
microorganismos que deben ser inhibidos en
caso de los medios selectivos y
diferenciar los microorganismos para los que ha
sido diseñado en caso de los medios diferenciales.
25. RECONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO
DESHIDRATADO
• Cumplir con las instrucciones de preparación del medio de cultivo
indicado en la etiqueta del envase
• Cumplir con los procedimientos técnicos de fórmulas enviadas por el
cliente
• Utilizar agua destilada de calidad
• Determinar el pH del M de C
• Esterilización del medio de cultivo
• Procedimiento escrito
• Control de esterilidad del Medio de Cultivo
29. ERRORES EN LA PREPARACIÓN
Apelmazamiento del producto deshidratado
DEFECTO
El envase no fue cerrado correctamente después de su
uso.
El envase permaneció abierto por largo rato.
Apelmazamiento del
El producto sobrepasó la fecha de vencimiento.
Producto deshidratado
El valor de pH no coincide con el indicado
• No fue empleada agua destilada
• El medio fue sobrecalentado durante su preparación
• El Phde pH no coincide
El valor no fue determinado correctamente
• El el indicado
Con medio estaba vencido.
30. Aparición de turbiedad o precipitados:
El medio preparado perdió agua por evaporación
El medio se calentó en exceso
El medio no se calentó lo suficiente.
No fue empleada la cantidad del medio o suplemento recomendada.
El color del medio no coincide con el indicado:
El medio fue sobrecalentado durante su preparación.
El pH no fue ajustado correctamente.
El recipiente empleado estaba sucio.
Los azúcares contenidos en el medio se caramelizaron
31. El gel se obtiene más blando que lo característico para el
medio:
No fue garantizada la disolución total del agar durante la preparación
del medio.
No fue empleada la cantidad del medio recomendada o se añadió agua
en exceso.
El crecimiento de los microorganismos es
pobre:
El medio fue sobrecalentado
El valor del pH no fue ajustado correctamente.
La adición de suplementos al medio se efectuó a excesiva temperatura.
El medio no fue mezclado correctamente.
32. El crecimiento de los microorganismos es atípico:
Quedaron residuos de sustancias inhibidoras del
crecimiento no deseables, en los recipientes donde se
preparó o distribuyó el medio.
El medio de cultivo fue preparado de manera incorrecta.
El producto sobrepasa la fecha de vencimiento.
33. ES, POR LO TANTO, MUY IMPORTANTE
QUE EL TECNÓLOGO MÉDICO SEA QUIEN
SUPERVISE Y CONTROLE TODOS LOS
FACTORES NECESARIOS EN LA
PREPARACIÓN Y CONSERVACIÓN DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO, PARA ASÍ LOGRAR
AISLAR E IDENTIFICAR CON
EXCELENCIA LOS DISTINTOS AGENTES
MICROBIANOS.
41. Los métodos de siembra se utilizan
para inocular por distintos métodos
sobre un medio de cultivo apropiado
una muestra que contenga
bacterias con el fin de reproducirlas
para aumentar el número de
individuos de la población y formar
colonias en el caso de medios
sólidos.
42.
43.
44.
45.
46. I. Siembra con rastrillo
II. Siembra con asa de cultivo
- Diseminación en superficie
- Agotamiento en superficie
- Tubos en superficie
- Tubos en profundidad o picada
III. Siembra con tórula
