1.
WESTERN-BLOT
• Discriminación de
antígenos específicos
frente a los que se
dirigen los anticuerpos
presentes en una
muestra.
• Prueba confirmatoria de
infecciones virales (VIH,
Hepatitis C, HTLV-1).

2.
PROCEDIMIENTO
• Lisado del cultivo del agente infeccioso
• Electroforesis: separación de antígenos en gel de poliacrilamida
• Transferencia a matriz superpuesta de nitrocelulosa
• Incubación con suero del paciente
• Unión de anticuerpos específicos radiomarcados o unidos a
enzima a proteína blanco
• Detección: bandas coloreadas por reacción enzimática en zonas
correspondientes a anticuerpos específicos que contenga la
muestra

3.
Resultado:
• Positivo
• Negativo
• Indeterminado

4.
• Técnica de análisis celular
multiparamétrico que permite
caracterizar fenotípicamente una
célula mediante el estudio de la
dispersión de la luz y
fluorescencia emitidas cuando
atraviesa un rayo láser.
• Permite analizar células, núcleos,
cromosomas, mitocondrias y otras
partículas en suspensión.

5.
SISTEMA HIDRÁULICO: controles neumático y fluidos para establecer un flujo
laminar que permita a la suspensión celular atravesar la cámara de flujo.
SISTEMA ÓPTICO: láser (Argón con luz monocromática de
488nm, filtros, lentes y detectores.
SISTEMA ELECTROINFORMÁTICO: convierte la luz dispersa en señales
eléctricas y las procesa para su análisis.

6.
• Principio: hacer pasar células u otras partículas en suspensión alineadas
y de una en una por delante de un haz luminoso, induciendo variaciones
ópticas que son detectadas por un sistema de fotomultiplicadores.

7.
Señales de dispersión: interacción de la luz con una partícula que produce un cambio
de dirección en todas direcciones. Determinada por el tamaño celular, la membrana, el
núcleo y el material granular del interior de la célula, llamado complejidad.
- en ángulo cónico pequeño (0-10º) que casi coincide con la dirección de la luz
incidente, llamada FSC (Forward Scatter). Proporcional al tamaño de la partícula
que produce la dispersión.
- en ángulo recto llamada SSC (Side Scatter). Proporcional a la complejidad de la
estructura interna de la partícula.
Fluorescencia: fluorocromo interacciona con luz láser y emite energía radiante. Parte se
utiliza para la absorción y la luz emitida es de menor energía que la luz de excitación. La
diferencia entre la longitud de onda de absorción y emisión se denomina Stokes shiff.
Los CMF permiten detectar señales de fluorescencia procedentes de Ac marcados con un
fluorocromo y situados en una célula, siendo la cantidad de señal de fluorescencia
emitida igual a la proporción de la cantidad de componentes fluorescentes de la
partícula.

8.
PARÁMETROS MEDIBLES POR CMF

9.
Aplicaciones:
• Cuantificación de subpoblaciones linfocitarias para el Dx y
seguimiento de inmunodeficiencias (ej. VIH); LCD4+ y CD8+
• Cuantificación de SC, CD34+ para valorar injertabilidad en muestras
para TPH autólogo o alogénico.
• Diagnóstico, seguimiento, evaluación pronóstica y detección de EMR
de hemopatías malignas. Identificación de tipos de leucemia.
• Detección de antígenos HLA para ayudar el diagnóstico de
enfermedades autoinmunes con asociación estadística a
determinados alelos.