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1. CROMATO
GRAFIA

2. HISTORIA
 En 1910, el botánico ruso M.Tswett
descubrió por primera vez esta técnica,
que fue aplicada a la separación de
pigmentos de plantas dándole el
nombre de cromatografía en referencia
a las bandas coloreadas de pigmentos
que se separaban por su absorción
selectiva sobre columnas de yeso.
 En 1930 fue redescubierta por Kunh y
Lederer quienes lo aplicaron para la
separación de cartonoides .

3. DEFINICION:
 La cromatografía
comprende un conjunto
de técnicas que tienen
como finalidad la
separación de mezclas
basándose en la
diferente capacidad de
interacción de cada
componente en otra
sustancia. De forma
general, consiste en
pasar una fase móvil
(una muestra constituida
por una mezcla que
contiene el compuesto

4.  Para realizar la cromatografía, la mezcla
que se desea separar se coloca sobre la
fase estacionaria, y la fase móvil
atravesará el sistema arrastrando y
desplazando a los distintos componentes a
distintas velocidades, esto dependerá de la
magnitud de las interacciones relativas con
ambas fases.
 Cuando se repiten sucesivamente las
operaciones principales de retención y
desplazamiento a lo largo del soporte o
sistema de la cromatografía, tendremos
como resultado la separación de la
mezcla original.
 La retención: es el efecto que se ejerce
sobre los componentes de una mezcla por
medio de una fase estacionaria, la cual
puede ser de naturaleza sólida o un
líquido que se encuentre anclado en un
soporte sólido.
 Desplazamiento: Es el efecto que se
ejerce sobre los componentes de una
mezcla por la fase móvil, la cual puede

5. TECNICAS DE
CROMATOGRAFÍA
 CROMATOGRAFÍA DE
PAPEL:
Es un proceso donde el
absorbente lo constituye un
papel de Filtro. Una vez
corrido el disolvente se retira
el papel y se deja secar, se
trata con un reactivo químico
con el fin de poder revelar
las manchas.
 Ejemplo de cromatografía
en papel de clorofila
(obtenida de hojas de
espinaca) con un
disolvente orgánico.

6.  Procedimiento de cromatografía de
papel
 es un proceso muy utilizado en los laboratorios para
realizar unos análisis cualitativos ya que pese a no
ser una técnica muy potente no requiere de ningún
tipo de equipamiento.
 La fase estacionaria está constituida simplemente por
una tira de papel filtro. La muestra se deposita en
un extremo colocando pequeñas gotas de la solución
y evaporando el disolvente. Luego
el disolvente empleado como fase móvil se hace
ascender por capilaridad. Luego se coloca la tira de
papel verticalmente y con la muestra de abajo dentro
de un recipiente que contiene fase móvil en el
fondo.
 Después de unos minutos cuando el disolvente deja
de ascender o ha llegado al extremo se retira el
papel y se deja secar. Si el disolvente elegido fue
adecuado y las sustancias tienen color propio se
verán las manchas de distinto color separadas.
Cuando los componentes no tienen color propio el
papel se somete a procesos de revelado.
 Hay varios factores de los cuales depende una
cromatografía eficaz: la elección del disolvente y la

7.  Tipos de cromatografía en papel
 Descendente: Se trata de una caja
saturada de vapor de agua, atravesada
por una cajetín semicilíndrico lleno con
el solvente orgánico. En el se deposita,
como muestra la figura el papel con la
banda de muestra justo al salir el
papel del cajetín. Para sujetar el papel
introducimos una varilla a lo largo de
la caja. El solvente comenzará
ascendiendo por el papel por
capilaridad y continuará bajando al salir
de la cajetilla, pasando por la zona de
muestra y arrastrándola, consiguiéndose
así la separación.

8.  CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA:
En la cromatografía analítica en capa fina,
la fase estacionaria o también
llamada, absorbente, se encuentra colocada
uniformemente, formando una finísima capa
de un espesor en torno a 0.1 mm, sobre un
soporte o placa de vidrio o metal. La mezcla
que deseamos analizar se colocará a una
corta distancia del borde inferior de la
mencionada placa, la cual introduciremos en
una cubeta o recipiente que contendrá la
fase móvil, o también llamado, eluyente. La
fase móvil irá ascendiendo poco a poco
sobre la placa de la fase estacionaria a
través de capilaridad, desplazando a los
diferentes componentes de la mezcla a
analizar, a distintas velocidades, lo que
provocará la separación de la mezcla.
Cuando el frente del disolvente se sitúe
próximo a la parte superior de la placa,
sacaremos la placa de la cubeta con la
finalidad de dejarla secar para poder ver las
manchas de los diferentes componentes.

9.  CROMATOGRAFÍA DE
COLUMNA
Los elementos básicos en la
cromatografía de columna son
una son la fase estacionaria y
la fase móvil. La fase
estacionaria la forma un sólido
poroso, el cual queda
soportado en el interior de una
columna generalmente fabricada
en plástico o vidrió.
La fase móvil se encuentra
formada por la solución que
lentamente va atravesando la
fase estacionaria. La solución
que sale al final de la columna
se reemplaza constantemente
por nueva solución que se
suministra desde un contenedor
por la parte superior de la
columna.
La Cromatografía en columna
se emplea para la separación
de sustancias en escala

10.  Existen diferentes tipos de cromatografías,
las cuales se diferencian y dependen de
las fases estacionarias (ya sea sólida o
líquida), así como de la fase móvil (ya
sea líquida o gaseosa), así podremos
diferenciar diferentes tipos de
cromatografía, donde sus nombres indican
la naturaleza de las diferentes fases que
la forman:
 Cromatografía sólido-líquido: donde la
fase estacionaria es un sólido y la móvil
un líquido.
 Cromatografía líquido-líquido: donde la
fase estacionaria es un líquido que se
encuentra anclado en un soporte sólido y

11.  Por otro lado, dependiendo del tipo de
interacción que se consiga establecer entre los
componentes de la mezcla, la fase móvil y
estacionaria, podemos hablar de:
 Cromatografía de adsorción: donde la fase
estacionaria es un sólido de tipo polar, el cual
es capaz de absorber a los diferentes
componentes de la mezcla a través de
interacciones polares.
 Cromatografía de partición: donde la
separación se basa en las diferentes
solubilidades de los componentes que
conforman la mezcla en las distintas fases
estacionarias, y móviles, que en este caso, son
ambas líquidas. Cuando la fase estacionaria es
menos polar que la fase móvil, esta se llamará
cromatografía en fase inversa.
 Cromatografía de intercambio iónico: La fase
estacionaria es un sólido que tiene anclados
distintos grupos funcionales fijos ionizables,
cuyas cargas se encuentran contrabalanceadas
por distintos iones móviles que pueden ser
intercambiados por los iones presentes en la
fase móvil.

12.  Visualizacion de la muestra
de cromatografía
 Una vez realizada la cromatografía,
pasamos a su visualización. La gran
parte de las placas cromatográficas
contienen un producto indicador
fluorescente que permite la visualización
de los compuestos que son activos a
la luz ultravioleta, concretamente a 254
nm. El indicador absorbe la luz UV, y
emite luz visible, por lo general de color
verde. La presencia de un compuesto
activo que se encuentra en el UV evita
que dicho indicador absorba luz en la
parte en la cual hemos colocado el

13. Un químico utiliza la
cromatografía para
analizar una mezcla
compleja de sustancias.
El cromatógrafo emplea
un medio adsorbente
que, al ser colocado en
contacto con una
muestra, adsorbe sus
distintos componentes a
velocidades diferentes.
De esta forma se
separan los
componentes de una
mezcla. La
cromatografía tiene
muchas aplicaciones
importantes, como la
determinación del nivel

14. GRACIAS POR SU
ATENCIÓN