El plasma seminal, su rol en la ovulación de los camélidos y potenciales aplicaciones. Ponencia Magistral presentada en el III Simposium Internacional de Investigaciones Sobre Camélidos Sudamericanos. Arequipa - Perú.

1. El plasma seminal, su rol en la ovulación de los camélidos y potenciales aplicaciones Wilfredo Huanca 1 , Marcelo Ratto 2 y Gregg P. Adams 3 1 Unidad de Biotecnología Reproductiva, Laboratorio de Reproducción Animal, Facultad de Medicina Veterinaria, UNMSM; 2 Universidad Austral de Valdivia – Chile; 3 Departamento de Ciencias Biomédicas – Universidad de Saskatchewan, Canadá III Simposio Internacional de camélidos Arequipa 9 y 10 Setiembre 2010

3. INTRODUCCION

5. Clase: Mamíferos

6. CLASIFICACION DE ESPECIES SEGÚN CARACTERISTICA DE OVULACION OVULADORES INDUCIDOS OVULADORES ESPONTANEOS ORDEN Lagomorpha (conejos) Rodentia (roedores) Insectivora (erizos, topos) y Carnivora(felinos) ORDEN Artiodactyla (extremidades con dedos) Familia: Camelidae ORDEN Artiodactyla Familia: bovidae

7. Estradiol OVULACION ESPONTANEA Hipotalamo (GnRH) Hipofisis o Pituitaria LH pre-ovulatoria Estimulo endógeno

9. DISTRIBUCION MUNDIAL DE LOS CAMELIDOS Orden: Artiodactyla Familia:Camelidae

10. OVULACION INDUCIDA O REFLEJA Hipotalámo ( GnRH ) Pituitaria LH Preovulatoria Estradiol Est ί mulo externo (Sexuales) +

11. Duración de la cópula Tiempo de Cópula Novoa, (1991) Libre 8,1 ± 4' Controlado 17,5 ± 12,1' San Martín et al. (1968) Bravo, (1990) 18' - 20' Fernández Baca, (1971) 5' - 50' England, (1971) 3' - 65'

12. Intervalo entre estímulo de inducción – ovulación en llamas Tamaño Intervalo % Tratamiento Folículo (mm) Inducción Ovulación Ovulación (h) ------------------------------------------------------------------------------------------- T1: Monta 11.2 ± 2.04 30.13 ± 1.3 80.0 (28.20 – 31.50) T2 : GnRH 11.8 ± 2.73 30.15 ± 1.59 81.82 (28.14 – 33.55) T3 : LH 10.9 ± 2.7 30.24 ± 2.29 100.0 (27.20 – 34.55) ------------------------------------------------------------------------------------------- W. Huanca et al. RIVEP 2001

13. REGULACIÓN ENDOCRINA DE LA OVULACIÓN Senger P. 2006

14. G1 (Control) 12.5 % G2 Semen alpaca IV 53.3 % G3 Plasma seminal IV 07.6 % G4 Semen toro IV 66.7 % G5 Suero Fisiol + 1000 UI hCG IV 0.0 % G6 Suero Fisol + 0.008 ug GnRH 0.0 % G7 hCG IM 100.0 % G8 GnRH IM 87.5 % Presencia de un factor de inducción de la ovulación en el semen de la alpaca y toro Ríos, Marina 1989

17. ESTUDIOS SOBRE EL PLASMA SEMINAL

19. Presencia de Factor Inductor de ovulación (FIO) en plasma seminal en alpacas y llamas

20. Administración intramuscular o intrauterina de plasma seminal (PS) de alpacas. a,b (P <.001) Biol. Reprod. 2005 Sep; 73(3): 452-7 Intramuscular Intravaginal PS (n = 14) PBS (n = 14) PS (n = 12 PBS (n = 12) LH (n = 6) Diametro fol ί culo (mm) 10.9  0.3 10.9  0.3 10.9  0.3 10.9  0.3 10.9  0.3 Tasa de Ovulación 13/14 a (93%) 0/14 b (0%) 0/12 b (0%) 0/12 b (0%) 0/6 b (0%) Diametro de CL (mm) 12.2  0.4 ---- ---- ---- ----

21. Pérfiles de LH en plasma de llamas después del tratamiento con Plasma Seminal (PS), GnRH, o PBS. GnRH LH ( ng/ml) Horas 0 Tratamiento 0.5 1 2 3 4 5 6 7 8 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 a a b abc P<0.01 a b a ab b PS PBS a b c b a a a x x y y z z Biol. Reprod. 2005 Sep; 73(3): 452-7 Effect of treatment: P<0.01 Effect of time: P<0.01 Treatment by time interaction: P<0.01

22. Diametro del CL en llamas, despues del tratamiento con plasma seminal o GnRH SP group GnRH group 0 3 5 7 9 11 13 15 D ί as Effect of treatment: P=0.22 Effect of day: P<0.01 Interaction: P=0.10 0 2 4 6 8 10 12 14 Diametro CL (mm) 17 19 Tratamiento P.S. GnRH Biol. Reprod. 2005 Sep; 73(3): 452-7

23. Accion local o sistémica del FIO en plasma seminal

24. Efecto de la administración de plasma seminal y PBS via intramuscular o intrauterina a,b,c son diferentes (P < 0.01) Reprod. Biol. And End. 2005, 3:29 intramuscular Intrauterina Intrauterina curetage SP (n=15) PBS (n=15) SP (n=17) PBS (n=15) SP (n=15) PBS (n=15) Diametro Folicular (mm) 8.0  0.3 8.2  0.3 8.1  0.3 8.0  0.3 8.3  0.2 8.4  0.3 Tasa Ovulacion (%) 14/15 a (93%) 0/15 c (0%) 7/17 b (41%) 0/15 c (0%) 10/15 ab (67%) 0/15 c (0%) Diametro CL (mm) 9.3  0.4 ---- 9.5  0.3 ---- 9.4  0.4 ----

25. PRESENCIA DE FIO EN ESPECIES DE OVULACION INDUCIDA Y ESPONTANEA

26. Efecto de Plasma seminal de llama, alpaca, toro y PBS, sobre la tasa de ovulación a,b,c superindices diferentes (P < 0.01) Theriogenology 2006, Sep 15;66 (5):1102 -6 Plasma seminal PBS (n=19) Llama (n=19) Alpaca (n=19) Toro (n=19) Diametro Foliculo (mm) 10.0  0.7 8.9  0.3 9.0  0.3 8.7  0.2 Tasa de Ovulacion (%) 0/19 a (0%) 19/19 b (100%) 19/19 b (100%) 5/19 c (26%) Diametro del CL (mm) ---- 10.4  0.4 10.1  0.3 9.6  0.7

27. BIOACTIVIDAD DE LA FRACCION DEL PLASMA SEMINAL INDUCTOR DE OVULACION

29. Bioactividad de diferentes fracciones de plasma seminal Ratto M, Huanca W y Adams GP. 2010 Reprod. Biol and End. 8:44 >30 Kda (n = 9) 10 – 30 Kda (n = 9) 5 – 10 Kda (n= 9) < 5 Kda (n = 9) Plasma completo (n = 9) PBS (n = 9) Diametro Folicular (mm) 9.5 ± 0.7 9.3 ± 0.6 9.8 ± 0.7 10.0 ± 0.7 9.3 ± 0.5 11.3 ± 0.8 Ovulacion (%) 9/9 a (100%) 0/9 b (0%) 0/9 b (0%) 0/9 b (0%) 9/9 a (100%) 0/9 b (0%) Diametro del CL Dia 8 (mm) 10.1 ± 0.5 ---- ---- ---- 10.8 ± 0.7 ----

30. Efecto de tratamiento de PS con Pronasa Ratto M, Huanca W y Adams GP. 2010 Reprod. Biol and End. 8:44 Plasma seminal no tratado (n = 10) Plasma seminal tratado (n = 10 Tamaño del foliculo (mm) 9.7 ± 0.4 a 9.0 ± 0.6 a Numero de Ovulaciones 9/10 a 0/10 b Maximo diametro de CL (mm) 10.8 ± 0.3 ----

32. Efecto del Plasma seminal sobre la tasa de preñez en IA con semen fresco en alpacas Huanca W. y col. 2009 (Congreso de camélidos 2009) GnRH (Acetato de buserelina) Plasma seminal Animales 33 32 Tasa de Preñez (US) 17/33 (51.5 %) 23/32 (71.8 %)

33. Unidad de Biotecnología Reproductiva Laboratorio de Reproducción Animal Facultad de Medicina Veterinaria UNMSM Desarrollar Protocolos de Fecundación In vitro en alpacas

34. Efecto de adición de hCG o Plasma seminal en el medio de maduración de ovocitos de alpacas C: Trat. por 42 horas con hCG T1: hCG T2: Plasma seminal TRATAMIENTO TASA DE DIVISION 72 H ( %) BLASTOCISTOS (%) (Día 7) Control (n=169) 43.2 13.6 Trat. hCG (n = 168) 38.1 16.1 Trat. PS (n = 139) 33.1 13.7

36. Muchas Gracias