Nutrición para el control de hipercolesterolemia e hiper trigliceridemia- Nut...
26/5. Movilidad espermática y morfología por el método objetivo. Dra. Julia Ariagno
1. Bioq. Julia Irene Ariagno
Hospital de Clinicas “José de San Martín”
FFyB - UBA
Estudio de la cinemática y
morfología espermática por el
método objetivo
Curso de Actualización en Laboratorio
Novedades en el Diagnóstico Bioquímico
2. Análisis del semen
Los parámetros analizados en el semen:
Reflejan la función exocrina de las
glándulas sexuales masculinas
Orientan sobre patologías del sistema
genital
Definen la fertilidad potencial del hombre
3. Análisis del semen
• Examen macroscópico:
–Licuefacción,color, aspecto, volumen,
viscosidad,pH
• Examen microscópico:
– Concentraciónde esp. y otras células
– Movilidad
– Vitalidad
– Morfología espermática
4. Ferttilidad potencial del hombre
Se define por
– Concentraciónespermática
– Movilidad espermática
– Morfología espermática
Gran variabilidad biológica
5. Las causas son
• Subjetividad de los
métodos
Desarrollo de métodos
automatizados (objetivos)
• Falta de estandarización
de los procedimientos
Adherir a las normatizaciones
de OMS 1999 o ESHRE 2002
(Sociedad Europea de Reproducción
Humana)
OMS 2010OMS 2010
6. Movilidad
OMS 1999 – ESHRE 2002
Temperatura de transporte y conservación de la muestra
Platina termostatizadaa 37°C
Tamaño de la gota de semen utilizada (10 µl)
Tamaño del cubreobjetos(22 x 22 mm)
Realizar por duplicado (2 alícuotas) contando 200 Ez en 5
camposc/vez
Clasificar solo a los Ez. Enteros (con cabeza y cola)
7. Errores en movilidad
• El error estándar del porcentaje (p) es
Ej: Si cuento 200 Ez y el % de Ez normales o móviles
progresivos da 20% entonces:
ES= 2.8
IC ( 95%)= p 1.96 x ES = 14.5% - 25.5%
9. Clasificacion de la movilidad espermática
• MOVILES
– GRADO a (movilidad progresiva lineal rápida)
– GRADO b (movilidad progresiva lineal lenta y/o
no lineal)
– GRADO c (movilidad no progresiva, Ez. móviles
“in situ”)
• INMOVILES
– GRADO d
» Vivos
» muertos(eosina positiva)
OMS 1999
10. OMS 2010
• MOVILES (PR o NP)
– MOVILES PROGRESIVOS (PR): movilidad progresiva
lineal lenta o rápida o no lineal
– MOVILES NO PROGRESIVOS (NP): movilidad no
progresiva
• INMOVILES (IM)
» Vivos
» Muertos (eosina positiva)
CLASIFICACION DE LA MOVILIDAD ESPERMATICA
11. CASA
(COMPUTER ASISTED SEMEN ANALYSIS)
Sistemas automatizados
para el análisis objetivo de
la calidad del esperma.
Técnicas de análisis de imagen asistido por computadora
Antecedente: Sistemas computarizadossemiautomáticos
(80s)
12. Estudio de la cinemática espermática
(CASA)
Los sistemas CASA reducen el error técnico,
presentando un bajo CV
Permiten la estandarización de resultados entre
laboratorios
Los parámetros aportados por estos sistemas
podrían tener un mayor poder predictivo
Permiten analizar semen de diferentes especies
14. Imagen digitalizadade 1 espermatozoide
J. Androl. 2000 Jul-Aug;21(4):515-24. CASA--practical aspects. Mortimer ST
15. Limitaciones del método
Cruce de trayectorias quedando ambas indefinidas. (Editar la imagen)
Incapacidad para procesar imágenes con gran cantidad de trayectorias
(Diluir el semen con PS autólogo)
Confunde debris o células pequeñas con Ez. Inmóviles. (Editar la imagen)
Gran dependencia con las condiciones lumínicas del MO.
16. La forma de la
trayectoria se altera
considerablemente
por el número de
imágenes tomadas
por segundo, por lo
que puede parecer
relativamente simple
cuando se
reconstruye con 30
imágenes por
segundo, pero es
mucho mas compleja
si se toman 60
imágenes por
segundo.
Exactitud de la trayectoria
17. CASA
(COMPUTER ASISTED SEMEN ANALYSIS)
Hamilton Thorne: IVOS, CEROS, HELOS
Microptic: Integrated Semen Analysis System (ISAS®)
Proiser: Sperm Class Analyzer (SCA)
Medical Electronic System: SQA-V Gold Automated Semen Analyzer
18.
19.
20. SCA
Captura entre 1 y 100 imágenes/ muestra
Captura entre 25 y 100 imágenes/seg
Contraste de fases positivo o negativo.
Cámara Leja, Makler, Neubauer,
Microcell, Proiser, porta y cubre u otras.
Se puede calibrar para 10x o 20x.
Captura manual o automática
(posibilidad de trabajar con platina
motorizada)
Visualización conjunta e individual de
trayectorias
22. Comparación de métodos
Análisis de regresion
• Carlos Aulesa, et al. Evaluación del sistema automatizado Sperm Class Analyzers
(SCA) para análisis del semen. Rev Lab Clin.2009;2(1):8–16
r = 0,98
P=0,001.
23. Comparación de métodos: Análisis de regresión de Passing-Bablock y
diferencias de medias de Bland Altman
0 100 200 300 400 500
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
CC Neubauer
0 100 200 300 400 500 600
-60
-40
-20
0
20
40
60
80
CC Neubauer
CCNeubauer-CCSCA
Mean
-0,0
-1.96 SD
-39,6
+1.96 SD
39,5
Recuento espermático
r= 0.9734
p <0.0001
• Chenlo P.H. et al. Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana 2013; 47 (1): 00-00.
24. Recuento y movilidad (grado a y móviles progresivos)
por el SCA vs. el método tradicional subjetivo
Recuento
(Cámara de Neubauer) Moviles Grado a Moviles Progresivos
Ecuación de la recta y= 6,008833+0,940119 X y= 0,40000+1,073333 X y= -7,275000+1,199000X
r (p) 0.9734 (p<0.0001) 0.8167 8p<0.0001) 0.8355 (p<0.0001)
N 50 101 101
Pendiente
(IC 95%)
0,940119
(0,8361;1,0184)
1,073333
( 0,9470;1,2000)
1,199000
(1,0735;1,3562)
Ordenada alorigen
(IC 95%)
6,008833
(2,0386;12,6371)
0,400000
(-1,0000;2,1363)
-7,275000
(-12,8625; -2,0176)
• Chenlo P.H. et al. Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana 2013; 47 (1): 00-00.
25. Linealidad del recuento
Linealidad recuento
y = 1,027x + 0,768
R
2
= 0,997
0
20
40
60
80
100
120
140
0 20 40 60 80 100 120 140
recuento teórico esperado
recuentoobtenidoSCA
• El Intervalo de medición del método fue lineal. (r: 0.99, p<0.001)en el
rango de concentraciones estudiadas (0,98 a 125 x106/ml).
• Chenlo P.H. et al. Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana 2013; 47 (1): 00-00.
26. Comparación de métodos: Análisis de regresión de Passing-Bablock y
diferencias de medias de Bland Altman
Móviles progresivos
0 20 40 60 80
0
10
20
30
40
50
60
70
80
A+B Subjetivo
0 20 40 60 80
-30
-20
-10
0
10
20
30
A+B Subjetivo
A+BSubjetivo-PRSCA
Mean
0,4
-1.96 SD
-18,6
+1.96 SD
19,4
r= 0.8355
p <0.0001
• Chenlo P.H. et al. Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana 2013; 47 (1): 00-00.
27. Comparación de métodos: Análisis de regresión de Passing-Bablock y
diferencias de medias de Bland Altman
Móviles grado (a)
0 10 20 30 40 50
0
10
20
30
40
50
Grado a Subjetivo
0 10 20 30 40 50 60
-40
-30
-20
-10
0
10
20
Grado a Subjetivo
GradoaSubjetivo-GradoaSCA
Mean
-2,7
-1.96 SD
-16,7
+1.96 SD
11,3
r= 0.8167
p <0.0001
• Chenlo P.H. et al Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana 2013; 47 (1): 00-00.
30. VCL vs. VAP
VCL: Velocidad curvilinea
(Track Velocity) (µ/seg)
Es la velocidad media de todas
las fotos (tracks) tomadas en 1
imagen.
VAP: Velocidad promedio de la
trayectoria del Ez. (µ/seg).
VSL: Velocidad rectilínea
(µ/seg) entre su posición inicial
y final.
ALH: Amplitud del
desplazamiento lateral de la
cabeza.
Es el desplazamiento de la
cabeza respecto de l trayectoria
promedio.
39. Computer-aided sperm analysis: a useful tool to evaluate patient's
response to varicocelectomy.
Julia I Ariagno1, Gabriela R Mendeluk1, María J Furlan1, M Sardi1, P Chenlo1, Susana M Curi1,
MercedesN Pugliese1, Herberto E Repetto1, Mariano Cohen2
1 ClinicalBiochemistry Department, Male Fertility Laboratory, Faculty of Pharmacy and
Biochemetry, University of Buenos Aires, Argentina
2 Urology Department, "José de San Martín"ClinicalHospital,University of Buenos Aires, Buenos
Aires, Argentina
Asian J Androl. 2016 Apr 22. doi: 10.4103/1008-682X.173441.[Epub ahead of print]
40. El varicocele es considerado la causa más fecuente
de infertilidad masculina. Esta condición puede ser
detectada en el 19-41% de los pacientes con infertilidad
primaria y el 45-81% de los hombres con infertilidad
secundaria.
El impacto de la varicocelectomía sobre la
fecundidad sigue siendo un tema controvertido.
Los parámetros del semen normalmente empleados
para evaluar la fertilidad masculina, como el recuento
espermático, la movilidad y la morfología, no son lo
suficientementeprecisos para definir la respuesta clínica
al tratamiento quirúrgico según diferentes autores.
41. OBJETIVO: Evaluar los posibles cambios de los
parámetros del semen post varicocelectomía
empleandoel análisis de semen asistido por
computadora(CASA) y el método subjetivo
según OMS 2010.
42. MATERIALES Y METODOS
MATERIALES:
¤ Se analizaron97 muestras de semen de:
• 38 de varones sanos fértiles de edades comprendidasentre 20 y 41 años
• 38 de pacientescon varicocele(17-40 años); 6 con varicocele bilateraly 32
con varicoceledel lado izquierdo.
• 21 post varicocelectomía (17-40 años)
¤ Se analizaron muestraspre y post cirugía (3 a 6 meses) de 10 pacientesa los que
se les realizó varicocelectomía microquirúrgica subinguinal con el técnica de
Marmar.
METODOS:
¤ Todaslas muestras fueron analizadasporel método subjetivosegún OMS 2010
(movilidadsubjetivay morfología espermática) y con el sistema CASA (Computer
Assisted Semen Analysis – Sperm Class Analyzer® (SCA)) se determinaron los
parámetroscinéticosy la concentraciónespermática.
Análisisestadístico
¤ Se empleó el software SPSS 14.0 para Windows (SPSS, Chicago,IL, USA).
43. Table 1: Descriptive statistics for semen parameters values for men from RP, pre-S and post-S,
assessed by conventional semen analysis and CASA-SCA
44. Table 2: Analysis of paired-sample semen parameters for 10 men pre-S and post-S assessed by
conventional semen analysis and CASA-SCA
46. Tabla 2: Análisis de muestras apareadas de 10 hombres pre y post cirugía.
47. El análisis de las muestras pareadas reveló que la mayoría de los parámetros
cinéticos: VCL (p=0,002), VSL (p=0,0004), VAP (p=0,0005), LIN (p=0,0005),
STR (p=0,004) y WOB (p=0,0003) mejoraron después de la cirugía siendo
estas diferencias estadísticamente significativas.
48. CONCLUSIONES
• El método CASA permitió, a diferencia del método
subjetivo, evidenciar cambios en los parámetros
seminales.
• El CASA brinda resultados potencialmente útiles
para la evaluación cuantitativa precisa de la
respuesta del paciente a la varicocelectomía.
• El valor clínico de los datos cinéticos debe ser
probado en la práctica clínica.
49. Estudio de la morfología espermática por el
método objetivo
Sistemas computarizados automáticos: morfología (ASMA)
Area (A)
Acrosoma (%)
Perímetro (P)
Angulo ()
Distancia (d)
Anchura (w)
CABEZA
Pieza Intermedia
Anchura (W)
Longitud (L)
Area (a)
Elipticidad: L/A
Rugosidad: 4S/P2
Elongación: (L-A)/(L+A)
Regularidad: LA/4S
50.
51.
52.
53.
54.
55.
56. Inconvenientes
Confunde el fondo con los elementos formes
No detecta anomalías d e la cola
Tiene alta dependencia con las condiciones de
iluminación y coloración
Sobrestima las anomalías de la cabeza y del
segmento intermedio por no poder distinguir el borde
citoplasmático del fondo.
No visualiza correctamente el acrosoma
De forma manual insume mucho tiempo
