Genero brucelosis

1. Unidad de Centro de Diagnóstico de Sanidad Animal
Laboratorio de Bacteriología

2. Conceptos generales
 Enfermedad bacteriana generalizada
 Fiebre continua, intermitente o irregular,
duración variable, cefalalgias, debilidad,
sudor profuso, artralgias, depresión,
perdida de peso y malestar general.
 Duración: días, meses o años.
 Tasa de letalidad: <2% sin tratamiento.

3. Conceptos generales
 Zoonosis importantes en
muchos países
 Bacterias del genero Brucella
 Aislado por David Bruce en
1886
 Microorganismos facultivos
Sir David Bruce

4. BRUCELOSIS
* Enfermedad causada por bacterias del género Brucella (B. Abortus,
B. Suis, B. Melitensis y B. Ovis)
*Afecta principalmente bovinos, ovinos, caprinos, cerdos y
ocasionalmente los equinos
*Poseen amplio rango de hospederos, pero la transmisón es más fácil
en los
hospederos principales
*Enfermedad de gran importancia por las grandes pérdidas
económicas que
produce
* También es importante por ser un problema en la salud pública

5. CUADRO CLINICO
•En los machos se observa ocasionalmente orquitis y epididimitis uni o
bilateral
•B. Melitensis produce abortos al final de la gestación, hay fiebre,
pérdida de peso y a veces diarrea. También hay mastitis, claudicación
y en los machos orquitis.
•B. abortus en bovinos produce abortos(generalmente al 5° mes de
gestación), presencia de mortinatos, terneros débiles, retención de
placenta y menor producción de leche
•B. Ovis ocasiona abortos, nacimiento de crias muertas o débiles,
placentitis macroscópica. En los machos descenso en la calidad de
semen, orquitis aguda, fiebre y depresión.
•B. Suis produce abortos, esterilidad temporal o permanente, cojeras,
parálisis posterior y ocasionalmente metritis. En los machos hay
orquitis.

6. Características básicas
 Cocobacilos pequeños
 Gram negativos, inmóviles y no esporulados
 No producen cápsulas ni flagelos.
 Son aeróbicos estrictos y tienen metabolismo
oxidativo.

7. Taxonomía
 Brucella melitensis
 Brucella abortus
 Brucella suis
 Brucella canis
 Brucella neotomae
 Brucella ovis
 Brucella cetaceae y B. pinnepediae (B.
maris)

8. PLAN DE CONTROL Y
RECOMENDACIONES IMPLEMENTADO
 Base Legal:
1. Ley General de Sanidad Agraria – Decreto
legislativo Nº 1059
2. Reglamento de la Ley General de Sanidad
Agraria – D.S. Nº 018-2008-AG
3. Reglamento para el Control y Erradicación
de la Brucelosis Bovina – Decreto
Supremo Nº 033-2000-AG

9. Identificación de cepas de Brucella en
el Perú
B.
melitensi
s 1
B.
melitensi
s 2
B.
melitensi
s 3
B.
canis
B.
abortus
1
B.
no
determin
.
1969 112 1
1984
-1990
962 18 10 1 9
1999
-2000
24
2005
-2010
300
Fuentes: Carrillo, Viernes Med. 1971
INS, UCSD

10. 10
DIRECTODIRECTO INDIRECTOINDIRECTO
•MICROSCOPIA
•BACTERIOLOGIA
•BIOLOGICO
•MOLECULAR
•MICROSCOPIA
•BACTERIOLOGIA
•BIOLOGICO
•MOLECULAR
•PRUEBAS TAMIZ:
BPA, RB, IELISA, FPA
•PRUEBAS COMPLEMENTARIAS
SAT, 2ME, Rivanol, FC, CELISA,
•PRUEBAS DE VIGILANCIA EPIDEMIOLOGICA
PAL, IELISA
•PRUEBAS TAMIZ:
BPA, RB, IELISA, FPA
•PRUEBAS COMPLEMENTARIAS
SAT, 2ME, Rivanol, FC, CELISA,
•PRUEBAS DE VIGILANCIA EPIDEMIOLOGICA
PAL, IELISA
INMUNOLOGICOS
SEROLOGICOS ALERGICOS
INMUNOLOGICOS
SEROLOGICOS ALERGICOS
CLINICOCLINICO
LABORATORIOLABORATORIO
• ABORTOS
• ORQUITIS
EPIDIDIMITIS
• ESTERILIDAD
• RETENCION
PLACENTARIA
• LESIONES
ARTICULARES
• NEONATOS
DEBILES
• ABORTOS
• ORQUITIS
EPIDIDIMITIS
• ESTERILIDAD
• RETENCION
PLACENTARIA
• LESIONES
ARTICULARES
• NEONATOS
DEBILES
DIAGNOSTICO

11. Diagnóstico diferencial
 Fiebre tifoidea.
 Malaria.
 Tuberculosis.
 Linfoma.
 Dengue.
 Leptospirosis.
 Bartonelosis.
 Enfermedades autoinmunes.
 Neoplasias.

12. Diagnóstico bacteriológico
 Relativamente
complicado y
laborioso.
 Sigue siendo el
método convencional
y definitivo para
confirmar la
enfermedad

14. Transporte público....
Días laborables... - emergencia
Protocolo..
Embalaje...
Muestras para serología

15. Prueba de Rosa de Bengala
EQUIPOS
Centrífuga refrigerada (2,000rpm.)
Refrigeradora (2- 4°C)
Aglutinoscopio
MATERIALES
Placa de vidrio dividida en cuadrantes.
Crioviales
Micropipetas de rangos de 5-50µL y 20-200µL
Tips con un rango de 20-200µL.
Plumones de tinta indeleble
Agitadores
REACTIVOS
Antígeno prueba rosa de bengala. +Sueros control

16. PROCEDIMIENTO DE EJECUCIÓN DE LA PRUEBA DIAGNOSTICA
Recepción de la muestra
- Se recepciona muestras correctamente identificadas y en
condiciones de conservación - volumen de ser procesadas.
Preparación de los sueros
- Los sueros deben ser centrifugados a 2,000rpm 10 minutos.
- Trasvasar los sueros a crioviales previamente rotulados.
- Confeccionar los inmunogramas con el orden en el que serán
distribuidos los sueros en la placa.
- Identificar las placas de acuerdo al registro de ingreso y la
fecha de ejecución de la prueba.
Prueba de Rosa de Bengala
Fecha Antigeno Ag. Num. Serie
Operador Fec. Exp. Ag.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A
B
C
D
E
F
Observaciones

17. Procedimiento:
- El suero y el antígeno deben estar a temperatura ambiente (22°C +/- 4°C),
solamente se debe retirar la cantidad de antígeno necesaria para trabajar
en ese período.
- Depositar 30µL de suero problema sobre cada cuadrante de la lámina de
vidrio.
- Homogenizar cuidadosamente el antígeno y depositar 30µL de antígeno
cerca al suero problema.
- Mezclar el suero y el antígeno, formando una zona ovalada de 2cm de
diámetro aproximadamente.
- Levantar la placa y realizar movimientos rotatorios.
- Marcar el timer por 4 minutos.
- Transcurrido el tiempo proceder a la lectura, sobre fondo blanco
Prueba de Rosa de Bengala

18. RESULTADOS
- Para la lectura se realiza haciendo incidir una luz indirecta en la placa
de vidrio.
- El resultado de la lectura del diagnóstico se informa como positivo o negativo.
- Las reacciones positivas presentan grumos de aglutinación que pueden ser
grandes o pequeños y las negativas tienen ausencia de éstos.
Prueba de Rosa de Bengala

19. Prueba de Rosa de Bengala
Fundamento
Ag
Ac

20. Prueba de Rosa de Bengala
AntigenoAntigeno homogenizadohomogenizado
SueroSuero
aglutinaciónaglutinación
HomogeneoHomogeneo
PositivoPositivo
NegativoNegativo
4 min4 min

21. 21
Reacciones falso positivas:
- Vacunación con cepa 19 en terneras
- Anticuerpos maternos
-Infecciones bacterianas por: Escherichia coli O:157, Yersinia
enterocolitica O:9 Vibrio cholerae O:1, Stenotrophomonas
maltophilia, Salmonella spp (serotipos del grupo N), Francisella
tularensis.
- Calidad de antígeno
- Error Humano
Reacciones Falso negativas
- Estadios tempranos de incubación de la enfermedad
- Inmediatamente después del aborto
- Calidad de antígeno
- Error Humano

22. PositivoPositivo NegativoNegativo
AntígenoAntígeno
Anticuerpo BAnticuerpo Brr..
ComplementoComplemento
PRIMERA ETAPA

23. PositivoPositivo NegativoNegativo
AntígenoAntígeno
Anticuerpo BAnticuerpo Brr..
ComplementoComplemento
Sistema HemolíticoSistema Hemolítico
EritrocitoEritrocito
Anticuerpo antieritrocitoAnticuerpo antieritrocito
SEGUNDA
ETAPA

24. PositivoPositivo NegativoNegativo
AntígenoAntígeno
Anticuerpo BAnticuerpo Brr..
ComplementoComplemento
Sistema HemolíticoSistema Hemolítico
EritrocitoEritrocito
Anticuerpo antieritrocitoAnticuerpo antieritrocito
TERCERA ETAPA

25. PositivoPositivo NegativoNegativo
AntígenoAntígeno
Anticuerpo BAnticuerpo Brr..
ComplementoComplemento
Sistema HemolíticoSistema Hemolítico
EritrocitoEritrocito
Anticuerpo antieritrocitoAnticuerpo antieritrocito
CUARTA ETAPA

26. PositivoPositivo NegativoNegativo
LECTURA
50% HEMOLISIS
Para que la prueba de FC tenga validez; se tienen que efectuar en presencia de los
controles de los reactivos usados, sueros negativos y positivos a diferentes diluciones;
los cuales validan el resultado, mostrando la lectura esperada.

27. OIESS: Suero Patrón Internacional
Segundo Patrón Internacional, anti-Brucella abortus
1000 UI/ml FC
Suero Patrón Nacional SENASA POS Br 01/05
NEG Br 03/05
OIE ELISA Sueros Patrones
OIEELISASPSS (Fuerte)
OIEELISAWPSS (Débil)
OIEELISANSS (Negativo)
SUEROS PATRONES
Laboratorio de Referencia OIE, Weybridge, UK

28. Bioseguridad
Usted no me explicó cuales eran los riesgos
de trabajar con Brucella

29. CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD

30.  Creceen mediosestándar como
(Agar sangre, chocolatey agar
tripticasasoya).
 Algunascepascrecen en medio
MacConkey.
 Crecetambién en medio Martin-
Lewisy Thayer-Martin
 Morfologiadelacoloniaen SBA
 Fastidioso
 Visiblealas48 - 72 hrs
 pequeñas(0.5-1.0mm),
convexa, traslucidas
 No-hemolyticasy no
pigmentadas
Cultivo de Brucella sp en agar
sangre (48 hours)
Diagnóstico Bacteriologico

31. Diagnóstico
serológico

32. Diagnóstico serológico
 Muestras que se pueden usar son sangre, suero,
leche, LCR.
 Se basan en la detección de anticuerpos de tipo
IgM y IgG.
 Técnicas son de screening o tamiz.
 Técnicas de vigilancia epidemiològica.

33. Características de las pruebas
Placa Tubo 2ME Rosa
Bengala
IgG - IgM IgG - IgM IgG IgG1
8' 48 h. 48 h. 4 '
6.8 6.8 6.8 3.65
10-12% 0.045% 0.045% 8%

34. Rosa de Bengala
 Antígeno acidificado
 Sencilla
 Económica
 Detecta IgG1
 Muy sensible y específica
 Prueba cualitativa: positivo
o negativo
 Uso en campañas de
MINSA y SENASA
positivo negativo

35. Parto prematuro por la brucelaosis

36. Ternero abortado a los 5 meses de
gestación

37. Lesiones mas visibles de un Ternero
abortado

38. Lesiones mas visibles de un Ternero
abortado

39. Problemas post-Aborto en vacas

40. Problemas post-Aborto en vacas

41. ABORTO EN OVINOS

42. ORQUITIS EN PORCINOS

43. GRACIAS