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UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL
AUTOR : Martha Guerrero –Olazarán,Eddy.L.Cab-
Barrera,Luis Galan-Wong y Jose Viader
INTEGRANTES:
 HENRY GONZALO CCAMA LLANQUE
 DEYSY MAGALI INCACUTIPA LAYME
 LUIS SANTIAGO MALDONADO RONDO
 HECTOR RINALDO DAMIAN FLORES
 VALERIA FERNANDA AMPUERO HERRERA
CURSO : BIOTECNOLOGIA
DOCENTE : Dr. HEBERT H.SOTO GONZALES
ILO – PERÚ
13/09/2021
BIOTECNOLOGÍA DE
PROTEINAS RECOMBINANTES
Se considera una proteína recombinante o proteína heteróloga
aquella proteína cuya síntesis se realiza en un organismo distinto al
organismo nativo. Actualmente se ofrecen en el mercado
internacional una gran variedad de proteínas recombinantes para
un amplio abanico de aplicaciones, lo que ha impulsado la
investigación en este campo.
El desarrollo de la tecnología DNA
recombinante y la optimización de
bioprocesos con organismos recombinantes.
 Posibilidades para la
producción de proteínas
nativas o modificadas.
ofrece
Un sistema de expresión lo
conforma un organismo
hospedero y fragmento de DNA
que poseen los elementos
genéticos necesarios para
realizar los procesos de
transcripción y traducción en
dicho organismo hospedero.
Para la selección de un sistema adecuado para la síntesis de
una proteína recombinante
 El origen biológico, propiedades
químicas y biológicas de la proteína.
 El bioproceso que se empleara para su
producción.
Se debe
considerar
El origen biológico es importante ya que generalmente un
sistema de expresión eucariota es mas eficiente para
sintetizar una proteína de origen eucariota que un sistema
de expresión procariota. Es importante analizar las
secuencia nucleotídica codificante para evaluar el uso de
codones y la presencia de secuencias de finalización
prematura de la transcripción.
FACTORES DETERMINANTES EN LA
SELECCIÓN DE UN SISTEMA DE EXPRESIÓN
Origen de la proteína Aplicación Bioproceso
• PROCARIOTA. Organismos unicelulares
que carecen de estructuras unidas a las
membranas. Las bacterias y las arqueas
son los dos tipos de procariotas.
• EUCARIOTA. Organismos cuyas células
tienen un núcleo y otros orgánulos
encerrados por una membrana plasmática.
• Secuencia nucleotídica
• Propiedades químicas
• Estabilidad
• Toxicidad
• Destino celular
• Grado de pureza
Estos son
Química de la
transformación.
Reactivo químico
Medio ambiente
- Tipo
- Condiciones de cultivo
- Escala
- costo
Propiedades de la proteína
-Uso de codones
preferenciales
-Tamaño
-Modificaciones
postraduccionales
-proteólisis
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- Industria del papel
- Industria textil y del
cuero
- Industria
farmacéutica
- Industria química
- Reactivo analítico
- Energía y combustibles
- Tratamiento de residuos
Actualmente se emplea gran variedad
de hospederos que van desde
organismos unicelulares tales como
bacerias,hongos,levaduras y líneas
celulares de mamiferos,insectos o
plantas ,hasta organismos completos
como animales y plantas transgénicas.
PROTEÍNAS RECOMBINANTES EN
LA ACUACULTURA
Esta tecnología esta enfocado
para incrementar la eficiencia
y productividad de la
practica acuícola
Uno de estos fue
desarrollados de hormonas y
estimulantes de crecimiento de
especies marinas
Crecimiento de
bovina
Empleado para el
crecimiento de varios
especies
Estudia los genes y sus
elementos reguladores para
la producción de proteinas
Genes que codifican proteínas
y actúa como alergenos
humanos
Tripsina
Que es ?
Función biológica
Es una enzima peptidasa que rompe los enlaces peptídicos de las proteínas mediante hidrólisis para formar péptidos de menor
tamaño y aminoácidos. Se produce en el páncreas y se secreta en el duodeno (parte del intestino), donde es esencial para la
digestión. Es una enzima específica, ya que liga al péptido en las posiciones del carboxilo de residuos arginina (Arg) o lisina (Lys)
en la cadena, ambos aminoácidos con grupos R cargados positivamente, fragmentando al péptido inicial.
La tripsina fue descubierta en 1876 por el fisiólogo alemán Wilhelm Kühne
mientras estudiaba el mecanismo de la digestión.
La tripsina es producida por el páncreas en forma de tripsinógeno (enzima
inactiva), y luego se activa en el duodeno gracias a la enteropeptidasa, que la
convierte en tripsina (enzima activa) mediante un corte proteolítico.
¿Como se
produce?
Historia
Propiedades
presente en el tracto digestivo de una gran variedad de mamíferos y juega un papel
importante en la activación de endopeptidasas digestivas en animales.
Esta enzima lleva a cabo la catálisis de reacciones de hidrólisis de enlaces peptídicos que contienen
residuos de aminoácidos básicos, tales como lisina y arginina reduciendo el tamaño de proteínas
grandes y haciéndolas accesibles a posterior degradación por otras proteasas.
Las serín-proteasas se caracterizan por un mecanismo catalítico común que involucra la presencia de
una triada formada por tres residuos específicos de serina, histidina y ácido aspártico.
PRODUCCION TRIPSINÓGENO RECOMBINANTE DE CAMARÓN
BLANCO DEL PACÍFICO (Litopenaeus Vannamei)
Sistema de Expresión de Pichia pastori
con el
Este sistema de expresión cuenta con un
promotor finamente regulable que se puede
inducir después de tener una densidad celular
deseada, estrategia útil si la proteína
recombinante resulta ser toxica para el
hospedero
Reúne los criterios favorables para el
desarrollo de procesos escalables a nivel
industrial y ha mostrado resultados
satisfactorios con la producción de otras serín
proteasas como ha sido el caso de una forma
modificada de tripsinógeno bovino
Las cepas recombinantes fueron
cultivadas bajo condiciones de
inducción, en un medio mínimo
amortiguado conteniendo metanol al
0,75%
Con el fin de obtener mayor
eficiencia en los niveles de
producción del tripsinógeno
recombinante de camarón
Se inicio un estudio para determinar las
condiciones de fermentación en un biorreactor
de 5L
A ph 3 disminuyen los niveles
de producción del
tripsinógeno recombinante
Trabajando a 22°C y a pH 5
durante la etapa de inducción-
producción, se encontró una
producción mayor que en
ensayos de fermentación a
30°C
DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES
- Se selecciona el sistema de expresión de
pichia pasotoris para la producción de
tripsogeno
- Las cepas recombinantes de p. pastoris
producen y secretan el tripsogeno
- Para el caso del bovino algunos autores
tuvieron que hacer una mutacion.
GRACIAS

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BIOTECNOLOGÍA DE PROTEINAS RECOMBINANTES

  • 1. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL AUTOR : Martha Guerrero –Olazarán,Eddy.L.Cab- Barrera,Luis Galan-Wong y Jose Viader INTEGRANTES:  HENRY GONZALO CCAMA LLANQUE  DEYSY MAGALI INCACUTIPA LAYME  LUIS SANTIAGO MALDONADO RONDO  HECTOR RINALDO DAMIAN FLORES  VALERIA FERNANDA AMPUERO HERRERA CURSO : BIOTECNOLOGIA DOCENTE : Dr. HEBERT H.SOTO GONZALES ILO – PERÚ 13/09/2021
  • 2.
  • 3. BIOTECNOLOGÍA DE PROTEINAS RECOMBINANTES Se considera una proteína recombinante o proteína heteróloga aquella proteína cuya síntesis se realiza en un organismo distinto al organismo nativo. Actualmente se ofrecen en el mercado internacional una gran variedad de proteínas recombinantes para un amplio abanico de aplicaciones, lo que ha impulsado la investigación en este campo. El desarrollo de la tecnología DNA recombinante y la optimización de bioprocesos con organismos recombinantes.  Posibilidades para la producción de proteínas nativas o modificadas. ofrece Un sistema de expresión lo conforma un organismo hospedero y fragmento de DNA que poseen los elementos genéticos necesarios para realizar los procesos de transcripción y traducción en dicho organismo hospedero. Para la selección de un sistema adecuado para la síntesis de una proteína recombinante  El origen biológico, propiedades químicas y biológicas de la proteína.  El bioproceso que se empleara para su producción. Se debe considerar El origen biológico es importante ya que generalmente un sistema de expresión eucariota es mas eficiente para sintetizar una proteína de origen eucariota que un sistema de expresión procariota. Es importante analizar las secuencia nucleotídica codificante para evaluar el uso de codones y la presencia de secuencias de finalización prematura de la transcripción.
  • 4. FACTORES DETERMINANTES EN LA SELECCIÓN DE UN SISTEMA DE EXPRESIÓN Origen de la proteína Aplicación Bioproceso • PROCARIOTA. Organismos unicelulares que carecen de estructuras unidas a las membranas. Las bacterias y las arqueas son los dos tipos de procariotas. • EUCARIOTA. Organismos cuyas células tienen un núcleo y otros orgánulos encerrados por una membrana plasmática. • Secuencia nucleotídica • Propiedades químicas • Estabilidad • Toxicidad • Destino celular • Grado de pureza Estos son Química de la transformación. Reactivo químico Medio ambiente - Tipo - Condiciones de cultivo - Escala - costo Propiedades de la proteína -Uso de codones preferenciales -Tamaño -Modificaciones postraduccionales -proteólisis -PH -temperatura - Agente terapéutico - Vacunas - Diagnostico Biomedicina Alimentos - Procesos industriales - Nutracéuticos - Aditivos - Industria del papel - Industria textil y del cuero - Industria farmacéutica - Industria química - Reactivo analítico - Energía y combustibles - Tratamiento de residuos Actualmente se emplea gran variedad de hospederos que van desde organismos unicelulares tales como bacerias,hongos,levaduras y líneas celulares de mamiferos,insectos o plantas ,hasta organismos completos como animales y plantas transgénicas.
  • 5. PROTEÍNAS RECOMBINANTES EN LA ACUACULTURA Esta tecnología esta enfocado para incrementar la eficiencia y productividad de la practica acuícola Uno de estos fue desarrollados de hormonas y estimulantes de crecimiento de especies marinas Crecimiento de bovina Empleado para el crecimiento de varios especies Estudia los genes y sus elementos reguladores para la producción de proteinas Genes que codifican proteínas y actúa como alergenos humanos
  • 6. Tripsina Que es ? Función biológica Es una enzima peptidasa que rompe los enlaces peptídicos de las proteínas mediante hidrólisis para formar péptidos de menor tamaño y aminoácidos. Se produce en el páncreas y se secreta en el duodeno (parte del intestino), donde es esencial para la digestión. Es una enzima específica, ya que liga al péptido en las posiciones del carboxilo de residuos arginina (Arg) o lisina (Lys) en la cadena, ambos aminoácidos con grupos R cargados positivamente, fragmentando al péptido inicial. La tripsina fue descubierta en 1876 por el fisiólogo alemán Wilhelm Kühne mientras estudiaba el mecanismo de la digestión. La tripsina es producida por el páncreas en forma de tripsinógeno (enzima inactiva), y luego se activa en el duodeno gracias a la enteropeptidasa, que la convierte en tripsina (enzima activa) mediante un corte proteolítico. ¿Como se produce? Historia Propiedades presente en el tracto digestivo de una gran variedad de mamíferos y juega un papel importante en la activación de endopeptidasas digestivas en animales. Esta enzima lleva a cabo la catálisis de reacciones de hidrólisis de enlaces peptídicos que contienen residuos de aminoácidos básicos, tales como lisina y arginina reduciendo el tamaño de proteínas grandes y haciéndolas accesibles a posterior degradación por otras proteasas. Las serín-proteasas se caracterizan por un mecanismo catalítico común que involucra la presencia de una triada formada por tres residuos específicos de serina, histidina y ácido aspártico.
  • 7. PRODUCCION TRIPSINÓGENO RECOMBINANTE DE CAMARÓN BLANCO DEL PACÍFICO (Litopenaeus Vannamei) Sistema de Expresión de Pichia pastori con el Este sistema de expresión cuenta con un promotor finamente regulable que se puede inducir después de tener una densidad celular deseada, estrategia útil si la proteína recombinante resulta ser toxica para el hospedero Reúne los criterios favorables para el desarrollo de procesos escalables a nivel industrial y ha mostrado resultados satisfactorios con la producción de otras serín proteasas como ha sido el caso de una forma modificada de tripsinógeno bovino Las cepas recombinantes fueron cultivadas bajo condiciones de inducción, en un medio mínimo amortiguado conteniendo metanol al 0,75% Con el fin de obtener mayor eficiencia en los niveles de producción del tripsinógeno recombinante de camarón Se inicio un estudio para determinar las condiciones de fermentación en un biorreactor de 5L A ph 3 disminuyen los niveles de producción del tripsinógeno recombinante Trabajando a 22°C y a pH 5 durante la etapa de inducción- producción, se encontró una producción mayor que en ensayos de fermentación a 30°C
  • 8. DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES - Se selecciona el sistema de expresión de pichia pasotoris para la producción de tripsogeno - Las cepas recombinantes de p. pastoris producen y secretan el tripsogeno - Para el caso del bovino algunos autores tuvieron que hacer una mutacion.