1. Dr. Giovanni Arnoldo Molina Paredes
Residente de segundo Año de Patología
Enero 2013

2. Krawczyk, Ewa; Suprynowicz, Frank A.; Liu, Xuefeng; Hanover, John; et al.
Department of Pathology, Georgetown University Medical School, Washington, DC; and the
Laboratory of Cell Biochemistry and Biology, National Institute of Diabetes and Digestive and
Kidney Diseases, National Institutes of Health, Bethesda, Maryland.
The American Journal of Pathology, Vol. 173, No. 3, September 2008
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2527066/

3.  Característica patognomónica de infección
por el virus del papiloma humano (VPH).
 Células epiteliales escamosas que contienen
un núcleo acéntrico e hipercromático que es
desplazado por una gran vacuola perinuclear .
 ¿Cómo las proteínas E5 y E6 de los VPH en
infecciones de bajo y alto grado inducen la
formación de coilocitos en células cervicales?

4.  La infección por VPH es la enfermedad de
trasmisión sexual más común.
 Más de 120 tipos aislados, más de 40 infectan
la mucosa genital y de 12 a 15 de estos se
consideran de alto grado.

5.  Existen tres genes del VPH-16 que poseen actividad
transformadora: E6, E7 y E5.
 El gen E6 codifica una proteína de 151 aminoácidos
(16E6) que se une a la proteína de supresión tumoral
(p53), y facilita su degradación a través de vías
ubiquitina dependientes.
 Esto, junto con la inhibición de la proteína pro-
apoptótica, BAK, determina la resistencia a la
apoptosis y la inestabilidad cromosómica. También
activa el promotor hTERT, aumentando así la
actividad de la telomerasa celular y, en cooperación
con la proteína E7 (16E7), induce la inmortalización
celular.

6.  Células y virus.
 Los retrovirus que codifican 16E6 y 16E7 fueron
generados usando el sistema celular Phoenix.
 Las células ectocervicales humanas (CEH) fueron
derivadas de tejido cervical tras histerectomía por
enfermedad uterina benigna.

7.  Infección retroviral.
 En matraces de 25 y 75 cm2.
 Inmunoprecipitación e inmunotransferencia.
 Técnicas de inmunoprecipitación con anticuerpo
policlonal anti-AU1.
 Tinción histológica.
 Tinción con hematoxilina-Eosina.

8.  E5 induce coilocitosis.
 Mientras se estudiaban
los efectos de 16E5 sobre
el contenido de la
membrana plasmática, se
observó que una
subpoblación expresante
de E5, constituida por
CEH mostraban
coilocitosis.
 Esto sugirió que el
fenómeno de coilocitosis
podría estar asociado con
la expresión de un
subconjunto específico
de oncoproteínas.

9.  E5 induce coilocitosis.
 Después se fijaron y
tiñeron líneas de CEH
(con y sin el gen 16E5)
con H & E. los coilocitos
se detectaron
fácilmente en las líneas
que expresan 16E5-
HEC en comparación
con las células que
albergan el vector de
expresión pLXSN vacío.

10.  E5 induce coilocitosis.
 Es importante destacar
que, la
inmunohistoquímica de
estas líneas CEH
(utilizando un
anticuerpo anti-AU1
para detectar la
proteína epítopo de E5)
reveló que 16E5 estaba
presente en las
membranas vacuolares
coilocíticas.

11.  E6 coopera con E5 para inducir la coilocitosis.
 Lo anterior demostró que la expresión estable
de 16E5 induce coilocitosis en CEH inmortalizadas con
16E6 y 16E7. Pero, ¿es suficiente o requiere de una
colaboración/interacción?
 La expresión de HPV-16 E6, E7, o E5 sola fue
insuficiente para generar coilocitos en CEH.
Además, la expresión combinada de 16E6 y 16E7 fue
ineficaz. Sin embargo, la co-expresión de 16E5 y 16E6
resultó en niveles de coilocitos que eran casi 10-veces
encima de la línea HEC 16E5/E6/E7.

13.  E6 coopera con E5
para inducir la
coilocitosis.
 Aunque los coilocitos
están presentes en las
infecciones por VPH
cervical, también se
observan en otros
sitios anatómicos, en
diferentes tipos de
células epiteliales.

14.  En contraste a las bien caracterizadas
oncoproteínas E6 y E7 de HPV-16, las
actividades biológicas de la oncoproteína
16E5 y su papel en el ciclo de replicación del
VPH no son completamente entendidas.
 En el presente estudio, se ha demostrado que
el VPH y las proteínas E5 y E6 cooperan para
inducir coilocitosis.

15.  Los coilocitos observado en estos experimentos
son muy similares a los observados en biopsias y
citologías vaginales, aunque exhiben algunas
diferencias cualitativas, como las
multivesiculaciones.
 La diferencia entre las coilocitosis in vivo e in
vitro podría tener varios orígenes:
 La expresión de E5 en estas células puede no ser tan
alta como durante una infección productiva;
 Las células estudiadas no se diferencian, y
 Los experimentos utilizan sólo dos oncogenes virales
en lugar del genoma viral completo.

16.  El papel de la vacuolización perinuclear en la
replicación viral
no es claro, pero dicha vacuolización
citoplásmica podría contribuir a la
fragilidad de los queratinocitos y la liberación
de la carga viral nuclear de las lesiones del
VPH.
 De hecho, se ha sugerido que salida del VPH
en la capa epitelial superior se facilita por la
disrupción en la integridad de la queratina.

17. Krawczyk, Ewa; Suprynowicz, Frank A.; Liu, Xuefeng; Hanover, John; et al.
Department of Pathology, Georgetown University Medical School, Washington, DC; and the
Laboratory of Cell Biochemistry and Biology, National Institute of Diabetes and Digestive and
Kidney Diseases, National Institutes of Health, Bethesda, Maryland.
The American Journal of Pathology, Vol. 173, No. 3, September 2008
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2527066/