1. microRNoma
Creación de perfiles genómicos mediante microarreglos
Juan Ospina

2. ¿Qué son los MIRNAS?
• RNA no codificantes 19-25 nt
• Modulan el desarrollo en diferentes organismos
• 10,000 nt RNAs envueltos en silenciamiento de genes
• Sufren escisión 60-110 nt (pre-miRNA)
• Transcrito primario largo (pri-miRNA)

3. MIRNAS
Extraños en la galaxia genómica
• Descritos en C.elegans
• 4.000 microRNAs en 4 años; vertebrados, moscas, gusano, plantas y virus.
• miRNoma 450 miRNA in silico total se espera > 1000
• La reacción de splicing requiere de Dicer RNAsa III y miembro de la familia
argonauta
• Inhiben transcripción del RNA blanco y por tanto de la proteína que codifica
por asociación directa e imperfecta miRNA::mRNA
• Su participación en procesos biológicos esenciales ha sido probado en
células eucariotas.

4. miRNAs
Biogénesis y función

5. http://www.youtube.com/watch?v=V9fAz3zsQhI

6. MIRNAS en eucariotas
miR-181 • Linaje hematopoyético cell-B
miR-15a y miR-16-1 • Supervivencia de cell B
miR-125b y let-7 • Control de la proliferación celular
miR-430 • Diseño cerebral
miR-375 • Células pancreáticas secretoras de insulina
miR-143 • Desarrollo de adipocitos

7. Antiguo descubrimiento de los miRNAs:
desarrollos recientes interesantes
• 1981 genes heterocrónicos capaces de controlar la temporización de los
eventos específicos del desarrollo post-embrionario en C.elegans.

8. MIRNAS y enfermedades humanas
¿juegan rol en enfermedades humanas?
Cáncer
• Deleción homocigota o la combinación de mutaciones +
hipermetilación del promotor Cluster miR15a-miR16a
• Amplificación génica miR-155 o cluster miR17-92
• Inactivación miRNA sobrexpresión mRNA
• Activación miRNA inhibición mRNA (ciclo cell, apoptosis,
angiogénesis..)

10. MIRNAS y otras enfermedades
• ¿atrofia muscular espinal?
Mecanismo
• ¿Síndrome del X frágil?
desconocido
• SLITRK1 Síndrome de Tourette
• Variante localizada en 3’UTR afecta miR-189
¿Mutación en la línea germinal o polimorfismos?

11. Importancia de los perfiles de
miRNAs
• Probar niveles de expresión de cientos de miRNAs en cáncer
consume mucho tiempo
• Requiere gran cantidad de RNA total
• Autoradriografías con uso de material radioactivo
¿Microarreglos miRNAs?

14. Significado biológico de los perfiles
miRNA
Después de muchos estudios, se han observado características comunes en
la regulación de tumores humanos.
1. Expresión de perfiles de miRNAs clasifican cada tipo de cáncer humano
2. Los genes miRNA comunes son expresados diferencialmente en varios
tipos de cáncer, lo que sugiere vías de regulación comunes alteradas.
3. Onco miRNAs y miRNAs supresores pueden representar 2 diferentes
versiones del mismo gen microRNA con respecto al mecanismo
especifico de inactivación o el tipo de tejido donde ocurre.

15. Permite
diferenciar
células
malignas de
células sanas.
Localización de
Iniciación y los genes en
desarrollo de regiones
cáncer humano asociadas al
cáncer.
miRNAs
Dx, estadío,
progresión,
Mecanismos
pronostico y
epigenéticos
respuesta al
tratamiento.
Alteración de
las proteínas
de la
maquinaria de
procesamiento

16. Significancia del ensayo CGH
MIRNAS.
Alta significancia de asociación entre la localización
del miRNA y la aberración genómica o
cromosómica.
(aCGH) comparación genómica por hibridización
Método molecular citogenético para análisis de
cambios en el numero de copias del DNA
generalmente de células tumorales.

18. CGH Zhang et al. (2006)
• Marcaje con Cy3 y
Cy5
• DNA marcado
hibridiza con CGH
• escaneo con laser
verde y rojo

20. Significado biológico de la
investigación con CGH
• Si la localización de los miRNA es relevante en la tumorogénesis se
podrían identificar alteraciones estructurales y funcionales en
diferentes tipos de canceres.
• Expresión anormal de miRNA es la principal patogenia del cáncer.
• Anomalías cromosómicas no aleatorias y otros tipos de eventos
genéticos y epigenéticos podrían contribuir a la inhibición o
potenciación de los miRNA.

21. Perfiles genómicos miRNA por
microarreglos

28. GRACIAS